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植物组织中丙二醛含量测定

植物组织中丙二醛含量测定. malondialdehyde,MDA 膜脂过氧化的产物之一 器官衰老或对逆境反应. 实验原理. MDA 在高温、酸性条件下与硫代巴比妥酸 (TBA) 反应，形成三甲基复合物 该复合物 最大吸收峰在 532nm 处 ; 最小吸收峰 600nm 处 消光系数为 155 (mM) -1 cm -1. A 532 -A 600. MDA( m M)=6.45(A 532 -A 600 )-0.56A 450. MDA(mM)= ——————. •••••••••Equ.1. •••••••Equ.2. 155 x L.

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植物组织中丙二醛含量测定

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Presentation Transcript

  1. 植物组织中丙二醛含量测定 • malondialdehyde,MDA • 膜脂过氧化的产物之一 • 器官衰老或对逆境反应

  2. 实验原理 • MDA在高温、酸性条件下与硫代巴比妥酸(TBA)反应，形成三甲基复合物 • 该复合物 • 最大吸收峰在532nm处;最小吸收峰600nm处 • 消光系数为155 (mM)-1 cm-1

  3. A532-A600 MDA(mM)=6.45(A532-A600)-0.56A450 MDA(mM)=—————— •••••••••Equ.1 •••••••Equ.2 155 x L MDA含量计算公式 • 碳水化合物对MDA-TBA反应有干扰，可用下式消除有蔗糖引起的误差 L为比色杯厚度(cm) 进一步求出单位鲜重植物组织中的MDA含量

  4. 实验步骤 • 制备匀浆 • 黄叶和青叶各称1.0g(分开研磨), 分次加入50mM/L Pi-buffer，共 5ml • 研磨 • 吸取1.5ml匀浆,4℃离心6min,12,000g • 显色反应 • 取上清液1.0ml于7ml离心管中 • 加TBA与TCA混合液 4.0ml，92ºC水浴保温30min • 空白管： 1mL Pi-buffer +TBA与TCA混合液 4.0ml （92ºC水浴30min） • 比色 • 冷却后，平衡，离心5min; 5000g • 测定A532, A450和A600

  5. 数据及计算 MDA(mM) MDA leaves A532 A450 A600 (nmol g-1) Equ.1 Equ.2 yellow 0.323 1.293 0.086 1.53 0.80 16.1 green 0.138 0.229 0.037 0.65 0.52 10.5

  6. 第二次离心的目的何在？ • 植物组织中那些物质对丙二醛测定（TBA法）干扰较大？ • 研磨、离心时为何可以不用冰浴和低温？

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