KlinFor Workshop B16 Die neuen Tuberkulose Tests

1. KlinFor Workshop B16 ‚Die neuen Tuberkulose Tests‘

2. Lungen-Tuberkulose versus latente Infektion, CDC 2005 Latente Infektion TST oder y-Interferon positiv Röntgen Lunge negativ Keine Symptome einer Tuberkulose Proben ohne Erregernachweis Lungentuberkulose TST oder y-Interferon positiv Röntgen Lunge positiv Husten +/- Blut im Sputum +/- B-Symptomatik PositivMikroskopie +/- PCR +/- Kultur aus respiratorischen Proben

3. Diagnostik der Lungen Tuberkulose

4. Diagnostik der latenten Tuberkulose

5. Vergleich IGRA - TST Interferon-Gamma Release Assay (IGRA) In vitro Spezifische Antigene Keine Boosterung 1 Patienten Visite + Laborkosten Minimale Test-Variabilität Resultate in 2 Tagen Tuberculosis-Skin-Test (TST ) In vivo Weniger spezifische Antigene Boosterung 2 Patienten Visiten  höhere Test-Variabilität Resultate in 2 - 3 Tagen

6. ESAT 6 und CFP10 im Interferon-Gamma Release Assay (IGRA) TB7.7 is encoded by a phage-inserted region (phiRv2) which is highly specific for M. tuberculosis (6, 8, 12). Aus: Leyten_Discrepancy between Mycobacterium tuberculosis-specific gamma interferon release assays using short and prolonged in vitro incubation_CVI_2007TB7.7 is encoded by a phage-inserted region (phiRv2) which is highly specific for M. tuberculosis (6, 8, 12). Aus: Leyten_Discrepancy between Mycobacterium tuberculosis-specific gamma interferon release assays using short and prolonged in vitro incubation_CVI_2007

7. ESAT 6 und CFP 10 in Mycobacteriaceae

8. T-SPOT.TB – Blutaufbereitung in Vacutainer CPT™ Röhrli Röhrli zentrifugieren Lymphocyten Bande aufnehmen Lymphozyten zählen und waschen Lymphozyten in 96-Platte TB Antigene zugeben Übernacht Inkubation

9. T-SPOT.TB – Spot Bildung Platte waschen Detektionsreagenz zugeben 60 min inkubieren Platte waschen Farbreagenz (Substrat) zugeben Spots innerhalb 7 min Platte waschen und trocknen

10. T-SPOT.TB – Spot Zählung Mit blossem Auge und Vergrösserungsglas Alternativ mit automatisiertem ELISPOT imager

11. QuantiFERON®-Gold In Tube Konjugat=Obeer AK In den Näpfchen (wells) sind Maus-Antihuman-Gamma-Interferon-AK gebunden, erkennt als o hochspezifisch humanes Gamma-Interferon, ist aber in der Maus hergestellt. Konjugat: Weiterer-Antihuman-Gamma-Interferon-Ak bindet ebenfalls an Gamma-Interferon , An diesen ist eine Meerrettich-Peroxidase , also ein Enzym, gekoppelt, das das zugegebene Subsrtat (Farbstoff) blau färbt. Waschen: Zugabe einer modifizierten PBS (phosophate buffered saline), spült alles was nicht gebunden ist, weg Enzym-Stopplösung( 0,5M Schwefelsäure) wird 30 min nachE inwirkenunter Lichtschuz dzugegeen, es ommt zum ph-Umschlag und Gelbfärbung. Deren OD wird ts 450 nm proportional zur Mengwe des geb Konjugats. Miutogen: PHA: Phytohämagglutintn; muss ESAT-6 negativen positiv reagieren, zeit die grundsätlich fähugkiet dr Zelle an, unspezifisch Gamma-Interferon auszuschütten. Wenn beides negativ indeterminarnt( Ich weiss nicht ob das Immunsystem so gescjhwächt ist), Esat6 pos, Mitogen negativ: weit fortgeschrittenen TB, bei der nur noch ganz zpezifsche Ausschütung möglicb ist. Konjugat=Obeer AK In den Näpfchen (wells) sind Maus-Antihuman-Gamma-Interferon-AK gebunden, erkennt als o hochspezifisch humanes Gamma-Interferon, ist aber in der Maus hergestellt. Konjugat: Weiterer-Antihuman-Gamma-Interferon-Ak bindet ebenfalls an Gamma-Interferon , An diesen ist eine Meerrettich-Peroxidase , also ein Enzym, gekoppelt, das das zugegebene Subsrtat (Farbstoff) blau färbt. Waschen: Zugabe einer modifizierten PBS (phosophate buffered saline), spült alles was nicht gebunden ist, weg Enzym-Stopplösung( 0,5M Schwefelsäure) wird 30 min nachE inwirkenunter Lichtschuz dzugegeen, es ommt zum ph-Umschlag und Gelbfärbung. Deren OD wird ts 450 nm proportional zur Mengwe des geb Konjugats. Miutogen: PHA: Phytohämagglutintn; muss ESAT-6 negativen positiv reagieren, zeit die grundsätlich fähugkiet dr Zelle an, unspezifisch Gamma-Interferon auszuschütten. Wenn beides negativ indeterminarnt( Ich weiss nicht ob das Immunsystem so gescjhwächt ist), Esat6 pos, Mitogen negativ: weit fortgeschrittenen TB, bei der nur noch ganz zpezifsche Ausschütung möglicb ist.

12. QuantiFERON®-Gold In Tube Konjugat=Obeer AK In den Näpfchen (wells) sind Maus-Antihuman-Gamma-Interferon-AK gebunden, erkennt als o hochspezifisch humanes Gamma-Interferon, ist aber in der Maus hergestellt. Konjugat: Weiterer-Antihuman-Gamma-Interferon-Ak bindet ebenfalls an Gamma-Interferon , An diesen ist eine Meerrettich-Peroxidase , also ein Enzym, gekoppelt, das das zugegebene Subsrtat (Farbstoff) blau färbt. Waschen: Zugabe einer modifizierten PBS (phosophate buffered saline), spült alles was nicht gebunden ist, weg Enzym-Stopplösung( 0,5M Schwefelsäure) wird 30 min nachE inwirkenunter Lichtschuz dzugegeen, es ommt zum ph-Umschlag und Gelbfärbung. Deren OD wird ts 450 nm proportional zur Mengwe des geb Konjugats. Miutogen: PHA: Phytohämagglutintn; muss ESAT-6 negativen positiv reagieren, zeit die grundsätlich fähugkiet dr Zelle an, unspezifisch Gamma-Interferon auszuschütten. Wenn beides negativ indeterminarnt( Ich weiss nicht ob das Immunsystem so gescjhwächt ist), Esat6 pos, Mitogen negativ: weit fortgeschrittenen TB, bei der nur noch ganz zpezifsche Ausschütung möglicb ist. Konjugat=Obeer AK In den Näpfchen (wells) sind Maus-Antihuman-Gamma-Interferon-AK gebunden, erkennt als o hochspezifisch humanes Gamma-Interferon, ist aber in der Maus hergestellt. Konjugat: Weiterer-Antihuman-Gamma-Interferon-Ak bindet ebenfalls an Gamma-Interferon , An diesen ist eine Meerrettich-Peroxidase , also ein Enzym, gekoppelt, das das zugegebene Subsrtat (Farbstoff) blau färbt. Waschen: Zugabe einer modifizierten PBS (phosophate buffered saline), spült alles was nicht gebunden ist, weg Enzym-Stopplösung( 0,5M Schwefelsäure) wird 30 min nachE inwirkenunter Lichtschuz dzugegeen, es ommt zum ph-Umschlag und Gelbfärbung. Deren OD wird ts 450 nm proportional zur Mengwe des geb Konjugats. Miutogen: PHA: Phytohämagglutintn; muss ESAT-6 negativen positiv reagieren, zeit die grundsätlich fähugkiet dr Zelle an, unspezifisch Gamma-Interferon auszuschütten. Wenn beides negativ indeterminarnt( Ich weiss nicht ob das Immunsystem so gescjhwächt ist), Esat6 pos, Mitogen negativ: weit fortgeschrittenen TB, bei der nur noch ganz zpezifsche Ausschütung möglicb ist.

13. QuantiFERON®-Gold In Tube Konjugat=Obeer AK In den Näpfchen (wells) sind Maus-Antihuman-Gamma-Interferon-AK gebunden, erkennt als o hochspezifisch humanes Gamma-Interferon, ist aber in der Maus hergestellt. Konjugat: Weiterer-Antihuman-Gamma-Interferon-Ak bindet ebenfalls an Gamma-Interferon , An diesen ist eine Meerrettich-Peroxidase , also ein Enzym, gekoppelt, das das zugegebene Subsrtat (Farbstoff) blau färbt. Waschen: Zugabe einer modifizierten PBS (phosophate buffered saline), spült alles was nicht gebunden ist, weg Enzym-Stopplösung( 0,5M Schwefelsäure) wird 30 min nachE inwirkenunter Lichtschuz dzugegeen, es ommt zum ph-Umschlag und Gelbfärbung. Deren OD wird ts 450 nm proportional zur Mengwe des geb Konjugats. Miutogen: PHA: Phytohämagglutintn; muss ESAT-6 negativen positiv reagieren, zeit die grundsätlich fähugkiet dr Zelle an, unspezifisch Gamma-Interferon auszuschütten. Wenn beides negativ indeterminarnt( Ich weiss nicht ob das Immunsystem so gescjhwächt ist), Esat6 pos, Mitogen negativ: weit fortgeschrittenen TB, bei der nur noch ganz zpezifsche Ausschütung möglicb ist. Konjugat=Obeer AK In den Näpfchen (wells) sind Maus-Antihuman-Gamma-Interferon-AK gebunden, erkennt als o hochspezifisch humanes Gamma-Interferon, ist aber in der Maus hergestellt. Konjugat: Weiterer-Antihuman-Gamma-Interferon-Ak bindet ebenfalls an Gamma-Interferon , An diesen ist eine Meerrettich-Peroxidase , also ein Enzym, gekoppelt, das das zugegebene Subsrtat (Farbstoff) blau färbt. Waschen: Zugabe einer modifizierten PBS (phosophate buffered saline), spült alles was nicht gebunden ist, weg Enzym-Stopplösung( 0,5M Schwefelsäure) wird 30 min nachE inwirkenunter Lichtschuz dzugegeen, es ommt zum ph-Umschlag und Gelbfärbung. Deren OD wird ts 450 nm proportional zur Mengwe des geb Konjugats. Miutogen: PHA: Phytohämagglutintn; muss ESAT-6 negativen positiv reagieren, zeit die grundsätlich fähugkiet dr Zelle an, unspezifisch Gamma-Interferon auszuschütten. Wenn beides negativ indeterminarnt( Ich weiss nicht ob das Immunsystem so gescjhwächt ist), Esat6 pos, Mitogen negativ: weit fortgeschrittenen TB, bei der nur noch ganz zpezifsche Ausschütung möglicb ist.

14. QuantiFERON®-Gold In Tube Konjugat=Obeer AK In den Näpfchen (wells) sind Maus-Antihuman-Gamma-Interferon-AK gebunden, erkennt als o hochspezifisch humanes Gamma-Interferon, ist aber in der Maus hergestellt. Konjugat: Weiterer-Antihuman-Gamma-Interferon-Ak bindet ebenfalls an Gamma-Interferon , An diesen ist eine Meerrettich-Peroxidase , also ein Enzym, gekoppelt, das das zugegebene Subsrtat (Farbstoff) blau färbt. Waschen: Zugabe einer modifizierten PBS (phosophate buffered saline), spült alles was nicht gebunden ist, weg Enzym-Stopplösung( 0,5M Schwefelsäure) wird 30 min nachE inwirkenunter Lichtschuz dzugegeen, es ommt zum ph-Umschlag und Gelbfärbung. Deren OD wird ts 450 nm proportional zur Mengwe des geb Konjugats. Miutogen: PHA: Phytohämagglutintn; muss ESAT-6 negativen positiv reagieren, zeit die grundsätlich fähugkiet dr Zelle an, unspezifisch Gamma-Interferon auszuschütten. Wenn beides negativ indeterminarnt( Ich weiss nicht ob das Immunsystem so gescjhwächt ist), Esat6 pos, Mitogen negativ: weit fortgeschrittenen TB, bei der nur noch ganz zpezifsche Ausschütung möglicb ist. Konjugat=Obeer AK In den Näpfchen (wells) sind Maus-Antihuman-Gamma-Interferon-AK gebunden, erkennt als o hochspezifisch humanes Gamma-Interferon, ist aber in der Maus hergestellt. Konjugat: Weiterer-Antihuman-Gamma-Interferon-Ak bindet ebenfalls an Gamma-Interferon , An diesen ist eine Meerrettich-Peroxidase , also ein Enzym, gekoppelt, das das zugegebene Subsrtat (Farbstoff) blau färbt. Waschen: Zugabe einer modifizierten PBS (phosophate buffered saline), spült alles was nicht gebunden ist, weg Enzym-Stopplösung( 0,5M Schwefelsäure) wird 30 min nachE inwirkenunter Lichtschuz dzugegeen, es ommt zum ph-Umschlag und Gelbfärbung. Deren OD wird ts 450 nm proportional zur Mengwe des geb Konjugats. Miutogen: PHA: Phytohämagglutintn; muss ESAT-6 negativen positiv reagieren, zeit die grundsätlich fähugkiet dr Zelle an, unspezifisch Gamma-Interferon auszuschütten. Wenn beides negativ indeterminarnt( Ich weiss nicht ob das Immunsystem so gescjhwächt ist), Esat6 pos, Mitogen negativ: weit fortgeschrittenen TB, bei der nur noch ganz zpezifsche Ausschütung möglicb ist.

19. Problem Beurteilung Leistung der IGRA’s im Vergleich mit TST, ohne Gold Standard für die Latente TB Infektion ? TST ist kein Gold Standard, da weder 100% sensitiv noch 100% spezifisch Ohne Gold Standard ist die direkte Ermittlung von Sensitivität und Spezifität der IGRA’s und des TST unmöglich Hypothese Luftübertragung von TB wahrscheinlicher mit längerer Dauer sowie Enge des Kontaktes zu TB Patienten ? Exposition korreliert mit IGRA Ergebnis

20. Sensitivität in Probanden ohne TB, nach Ausmass Exposition TST = QFN Gold in tube = T-SPOT.TB 

21. Sensitivität in Probanden mit aktiver TB TST < QFN Gold in tube < T-SPOT.TB

22. Spezifität bei sehr geringem Risiko einer TB Infektion TST < QFN Gold in tube = T-SPOT.TB 

23. Prädiktiver Wert Risiko für Entwicklung aktiver TB bei Patienten mit IGRA Ergebnissen ? unbekannt? langfristige Kohortenstudien notwendig