900 likes | 1.32k Views
Solujen viestintä. Kuljetusmekanismit solukalvon läpi. Passiivinen kuljetus Pitoisuusgradientin suuntaan ilman energiaa Kuljetettavalla aineella sähkövaraus, sähkökemiallinen potentiaali Sähkökemiallinen potentiaali Potentiaalienergian minimointi. Diffuusio 1. Molecules of dye. Membrane.
E N D
Kuljetusmekanismit solukalvon läpi Passiivinen kuljetus • Pitoisuusgradientin suuntaan ilman energiaa • Kuljetettavalla aineella sähkövaraus, sähkökemiallinen potentiaali • Sähkökemiallinen potentiaali • Potentiaalienergian minimointi
Diffuusio 1 Molecules of dye Membrane Diffusion of one solute WATER
Diffuusio 3 EQUILIBRIUM
Diffuusio 4 Diffusion of two solutes
Diffuusio 6 EQUILIBRIUM
Passiiviset kuljettajat • Polaaristen aineiden kuljettajat transporttereita, vähentävät aktivaatioenergiaa • Avustettuakuljetusta (facilitated diffusion)
Avustetut kuljetusmekanismit 1 Facilitated diffusion
Kalvokuljetus • Biologiset kalvot läpäisemättömiä polaarisille aineille tarvitaan proteiineja kuljettamiseen kalvon läpi • Vesi (polaarinen) läpäisee kalvon suuri pitoisuus (55.5 M) • Veden nopeaan vaihtoon tarvitaan integraalisen kalvoproteiinin muodostama vesikanava eli akvaporiini • Kaasut läpäisevät kalvot (O2, N2, CO2)
Akvaporiinit • Munuaisen tubulussoluissa, absorboivat vettä takaisin virtsanmuodostuksen aikana • Kasvisolujen vakuolin kalvolla säätelevät vakuolin vesimäärää, ylläpitävät solujen mekaanista rakennetta • Virtausnopeus akvaporiinin läpi 5x108 molekyyliä/s (vrt. suurin entsyymireaktionopeus 1x 107 substraattimolekyyliä/s
Glukoosikuljettajat 1 • Punasolujen energiametabolia • GluT1 kiihdyttää glukoosin siirtoa punasoluihin 50 000 x • GluT1 integraaliproteiini, 12 hydrofobista aluetta, -kierteitä muod. kanavan • K1-arvo glukoosille 1.5 mM • K1-arvo galaktoosille 30 mM
Glukoosikuljettajat 2 • Solutyypeittäin • Maksassa GluT2 • K1-arvo D-glukoosille 66 mM • Glukoosin sisäänotto maksasoluihin tehokasta • Glukoosin luovutus maksasoluista verenkiertoon glykolyysissä GluT:n avulla
Glukoosikuljettajat 3 • GluT4 lihaksen ja rasvakudoksen glukoosin kuljettaja • Insuliini stimuloi GluT4 • Aterian jälkeen glukoosin otto lihaksiin ja rasvasoluihin kiihtyy • Insuliini saa aikaan vesikkeleihin varastoituneen GluT4 siirtymisen solukalvolle
Kuljetustapahtuma ryhmät Uniportti • Kuljetetaan yhtä ainetta Symportti • Kahden tai useamman aineen samanaikainen kuljetus samaan suuntaan Antiportti • Kahden tai useamman aineen kuljettaminen vastakkaisiin suuntiin
Aktiivinen kuljetus • Vaatii energiaa • Aine siirretään konsentraatiogradienttia vastaan • Kuljettajaproteiinit tarvitsevat ulkopuolisen energialähteen • Energia ATP:ltä • Kuljettaja-ATPaaseja
Aktiiviset kuljetusmekanismit Oligosaccharides OUTSIDE OF CELL INSIDE OF CELL Binding site for ATP
Na+/K+ ATPaasi • ATPaasit pumppaavat ioneja niiden konsentraatiogradienttia vastaan kuluu energiaa out 3 Na+ ATPaasi solukalvo ATP ADP + P in 2 K+
Na-K-ATPaasi 1 Initial state: pump open to inside OUTSIDE OF CELL 3 Na+ are taken from inside
Na+/K+ ATPaasi 2 Esim. mahan limakalvo pumppaa H+ • gradientti 1: 1 000 000 (106) • pH solussa 7, ulkopuolella 1-2
Na-K-ATPaasi 3 ATP phosphorylates α subunits INSIDE OF CELL Pump open to outside, ready to start second half of cycle A conformational change following phosphorylation expels 3 Na+ to outside
Na-K-ATPaasi 3 5. Dephos- phorylation triggers conformational change 4. Two K+ accepted from outside
Aktiivinen kuljetusmekanismi Na/K-pumpun toiminta konsentraatiogradienttia vastaan
ATPaasityypit 1 Neljä tyyppiä • Rakenne • Toimintamekanismi • Sijainti erilaisia
ATPaasityypit 2 P-tyyppi • Katioininkuljettajia • Fosforyloituvia • Inhiboituvat vanadaatilla tai ouabaiinilla • Na+K+-ATPaasi (Na+/K+ antiportteri) • Ca2+-ATPaasi • Mahalaukun seinämän parietaalisolujen H+ ja K+ antiportteri
ATPaasityypit 3 V-tyyppi • Vakuolityypin ATPaasit • Protonipumppuja • Happamoittavat eläinsolujen endosomeja, lysosomeja, Golgin laitetta ja eritysrakkuloita • Ei reversiibeliä fosforylaatiota • Inhibiittoreita: bafilomysiini A, konkanamysiini A • Periferaalinen kalvoproteiini ja 7 alayksikköä sekä inegraalinen kalvoproteiini + 3 alayks. (= protonikanava)
Protonipumppu 1 EXTRACELLULAR FLUID CYTOPLASM
Protonipumppu 2 Diffusion of H+ Sucrose
ATPaasityypit 4 F-tyyppi • Bakteerien solukalvoilla • Eukaryosyyttien mitokondrioissa • Kloroplasteissa • Käänteisessä roolissa protonipumppuina • Kalvon lävistävä protonikanava eli F0-osa ja F1-osa (sis. ATPsyntaasin) • Siirtää lääkeaineita ulos soluista (multidrug transporter) • Aktivoiduttuaan lisää syöpäkudoksen vastustuskykyä samanaikaisesti useille lääkeaineille
Kuljetusmekanismit, yhteenveto Lipofiilisetaineet, esim.melatoniini Diffusion through lipid bilayer Facilitated diffusion Active transport Passive transport
Ionoforit • Ioneja kalvon läpi kuljettavia orgaanisia yhdisteitä • Myrkkyjä tai antibiootteja • Valinomysiini kuljettaa K+-ioneja gradientin suuntaan • Monensiini (Na+/H+-vaihtaja) • Gramisidiini muodostaa kalvoon ionikanavan ioneille,toimii myös matalissa Ta:ssa
solukalvoissa kaliumkanavia ja kloridikanavia Eivät ole kyllästettävissä Virtaus jopa 108 ionia/s Kanava sulkeutuu tai avautuu vasteena solutapahtumaan (10-3s) jos molemmat (Cl- ja K- kanavat kiinni: V = 0 mV jos K-kanava auki ja Cl-kanava kiinni: V = -58 mV jos molemmat kanavat auki: V = 0 mV Ionikanavat Nernstin kaava: E(mV) = 58 log(Cout/Cin)
Toiminta hermoim-pulssin aikana ennen depolarisaatiota kanavat kiinni, jännite solun sisällä negat. V=-70 mV Na-kanava aukeaa hieman Na+ virtaa sisään depolarisaatio Na-kanava sulkeutuu ja K-kanava avautuu K+ virtaa ulos depolarisaatio jatkuu potentiaali lepotasolle –70 mV Na- ja K-kanavat kiinni Depolarisaatio ja ionikanavat
Potassium channel OUTSIDE CELL PLASMA MEMBRANE INSIDE CELL Sodium channel Kanavan sytoplasman puoleisella pinnalla vesionkalo, K:lla säilyy vesivaippa. Vesi korvautuu onkalossa pp-ketjulla. 1. Resting state
Activation gate OUTSIDE CELL INSIDE CELL Kanava auki muutaman ms 2. Depolarizing phase Kanavan ympärillä posit. varautuneita polypeptidiketjujen jaksoja, reagoivat kalvopot. muutoksiin
OUTSIDE CELL INSIDE CELL Inactivation gate 3. Repolarizing phase Sytoplasman puoleinen proteiinidomeeni toimii inaktivaatioporttina
OUTSIDE CELL INSIDE CELL 4. Undershoot
Aktiopotentiaali 5 Region of depolarization
Aktiopotentiaali 6 Inactivated Na+ channels Movement of action potential
monet myrkyt sitoutuvat hermon toiminnan kannalta tärkeisiin proteiineihin, kuten: tetrodotoksiini (eristetty japanilaisesta fugu-kalasta, pallokala Spheroides rubripes) salpaa Na-kanavan Saksitosiini siimaeläimen (Gonyaulax) tuottama myrkky estää Na-kanavan toiminnan Dendrotoksiini, mustan mamban myrkky salpaa K-kanavaan vaikuttava myrkky Bungarotoksiini, cobtoksiini käärmemyrkkyjä Ionikanavat 2
Ionikanavan toiminnan tutkiminen • yksittäisen ionikanavan toimintaa voidaan tutkia patch clamp –tekniikalla • solukalvo imetään mikropipetin sisään • Peter Agre ja Roderick MacKinnon (amer.) v. 2003 kemian Nobel vesikanavien (Agre) ja ionikanavien (MacKinnon) tutkimuksista
Patch clamp -tekniikka 1 Glass pipette Membrane Ion channel
aktiopotentiaalin kulku aksonia pitkin myelinisoitu hermo sähköinen synapsi Ca-kanava presynaptisella puolella ligandi= molekyyli, joka spesifisesti sitoutuu toiseen molekyyliin neurotransmitteri voi tuottaa ekskitatorisen (Na-kanava + neurotransmitteri) tai inhibitorisen (Cl-kanava + neurotransmtteri) vaikutuksen postsynaptiseen neuroniin Miten hermosolut kommunikoivat toistensa kanssa?
yleisin inhibitorinen neurotransmitteri –aminovoihappo (GABA) neurotransmitterin vapautuminen on riippuvainen ainakin neljästä proteiinista Miten hermosolut ...
GABA-erginen neuroni Cl- GABA or glycine GABA or glycine Action potential GABA or gylicine receptor Presynaptic cell Ca2+
Synaptic terminals of presynaptic neurons Dendrites of postsynaptic neuron Myelin sheath Cell body of postsynaptic neuron Axon hillock Axon of postsynaptic neuron Terminal branches of presynaptic neurons