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Estructura de la célula eucariota. Citoplasma . Nucleoide . Membrana celular . Cápsula . Pared celular. Flagelo . Pili . Estructura de la célula procariota. Reino Animalia. Clasificación tradicional. Reino Plantae. Tres Reinos: Sistema de Haeckel (1894). Protistas atípicos.
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Citoplasma Nucleoide Membrana celular Cápsula Pared celular Flagelo Pili Estructura de la célula procariota
Reino Animalia Clasificación tradicional Reino Plantae Tres Reinos: Sistema de Haeckel (1894) Protistas atípicos Reino Protistas Protozoa Protophyta Reino Planta Reino Animal
Reino Protoctista Reino Fungi Reino Plantae Reino Animalia Subdominio Eubacteria Subdominio Archaebacteria Dominio Prokarya Esquema de Margulis: dos dominios y 5 reinos (1988-1996) Reino Bacteria Dominio Eukarya Dominio Prokaryota Cuatro Subdominios (Mayr 1990) Dominio Eukaryota Subdominio Protista Subdominio Metabionta Reino Metaphyta (Plants) Reino Fungi Reino Animalia
Reino Mychota Reino Protoctista Reino Plantae Reino Animalia Reino Monera Reino Protista Reino Plantae Reino Fungi Reino Animalia Sistema de Copeland: cuatro Reinos (1956) Whittaker: Cinco Reinos (1969)
Dominio Bacteria Dominio Archaea Dominio Eucarya Tres Dominios (Woese 1990) Superreino Prokaryota Reinos Bacteria Superreino Eukaryota Reino Protozoa Reino Animalia Reino Fungi Reino Plantae Reino Chromista Cavalier-Smith 1998 Suprareinos y Seis Reinos
La línea verde indica origen bacteriano de los cloroplastosLa línea roja indica origen bacteriano de las mitocondrias
BACTERIA ARCHEA EUKARYA Células procariotas eucariotas Núcleo con NO SI Membranas lipídicas enlazados por éster, no ramificados enlaces eter, ramificado enlazados por éster,no ramificados organelas NO SI ribosomas 70S 80S DOMINIOS: Caracteres que los definen
Tres dominios Seis reinos Eubacteria Bacteria Archaebacteria Archaea Ancestro común Protista Eukarya Plantae Fungi Animalia
Eubacteria Dominio Reino Prokaryotae Gracilicutes División Firmicutes Tenericutes Mendosicutes Eubacteriales Orden Scotobacteria Clase Enterobacteriaceae Vibrionaceae Pasteurellaceae Familia Escherichia Salmonella Klebsiella Shigella Género Especie
Taxonomía La taxonomía es la ciencia de la clasificación, agrupa y separa los organismos vivos de acuerdo a sus características fenotípicas o genéticas. Para propósitos de clasificación, los organismos usualmente son reconocidos en órdenes superiores, familias, géneros, especies y subespecies. Es una ciencia ARTIFICIAL, influida por los avances en las técnicas. • SE DIVIDE • CLASIFICACION • NOMENCLATURA • IDENTIFICACION
1. Clasificación “Es la ordenación de los microorganismos en grupos o taxones en función de semejanzas mutuas o de parentesco evolutivos” El objetivo es el de serESTABLE, OBJETIVA YPREDICTIVA
2. Nomenclatura “Es la asignación de un nombres específico a los grupos taxonómicos de acuerdo a criterios y normas preestablecidas y adminitidas internacionalmente”
3. Identificación “Es la parte práctica de la taxonomía, dado que permite encuadrar un determinado organismo en un grupo taxonómico previamente establecido”
CRITERIOS UTILIZADOS Las distintas categorías taxonómicas se definen por las propiedades y características que poseen las bacterias que las integran. Los datos reciben el nombre de caracteres taxonómicos. E incluyen caracteres fenotípicos, genéticos y quimiotaxonómicos.
FENOTÍPICOS • 1) MORFOLÓGICOS • 2) BIOQUÍMICAS/FISIOLÓGICAS • 3) SEROLÓGICAS • 4) FAGOTIPIA • 5) PRUEBAS DE INHIBICIÓN
GENÉTICOS • 1 ) ADN / ARN: contenido de G+C, hibridación ADN-ADN, secuenciación del ARNr
QUIMIOTAXONÓMICOS • 1) MEMBRANA CITOPLASMÁTICA: ácidos grasos, tipos de lípidos polares, presencia de ácidos micólicos • 2) PARED CELULAR: tipos de peptidoglucano, presencia de ácidos teicoicos • 3) PROTEÍNAS: comparación perfil proteínas, secuencia de aminoácidos
T A X O N O M Í A ENFOQUE CLÁSICO TAXONOMÍA NUMÉRICA ENFOQUE GENÉTICO O MOLECULAR
Taxonomía numérica o adansoniana Usa las características bioquímicas, morfológicas y culturales, así como las susceptibilidad a los antibióticos y compuestos inorgánicos, para determinar el grado de similitud entre organismos. Se calcula luego un coeficiente o porcentaje de similitud. Se construye un dendrograma o matriz de similitudes entre los organismos.
DENDROGRAMA GRUPO 50 60 70 80 90 100 1 C freundii Citrobacter C diversus 2 Escherichia coli 3 GÉNERO Y ESPECIE
Filogenética El significado ideal de la identificación y clasificación debe ser comparar la secuencia de cada secuencia de genes en una cepa dada, con la secuencia de genes para cada especie conocida. El método que se usa es la hibridización. Este método puede ser usado para medir el número de secuencias de DNA que dos organismos cualesquiera tienen en común y para estimar el porcentaje de divergencia dentro de las secuencias de DNA que están relacionadas pero no son idénticas.
VENTAJAS DE LA CLASIFICACION GENETICA • BRINDA UN CONCEPTO MÁS UNIFICADO DE ESPECIE • ES MÁS OBJETIVA Y ESTABLE • SE PUEDEN ORGANIZAR ESQUEMAS DE IDENTIFICACIÓN FIDEDIGNOS • INDICA CÓMO EVOLUCIONARON LOS MICROORGANISMOS Y CÓMO PUEDEN AGRUPARSE
ESPECIE Grupo taxonómico básico Menos definido que para organismos superiores Rasgos morfológicos no tan importantes Puede ser considerada como una colección de cepas que muestras muchos rasgos en común y difieren considerablemente de otras cepas Una CEPA de una especie es considerada como CEPA TIPO (comparar)
SUBESPECIE Basada en variaciones fenotípicas y genotípicas menores, pero constantes. Es la categoría más baja aceptada oficialmente
CATEGORÍAS INFRASUBESPECIE Cepas que tienen Nombre preferido Sinónimo biotipo prop bioquímicas o fisiológicas especiales biovar serovar serotipo prop antigénicas distintivas patovar patotipo prop patogénicas para ciertos animales fagovar fagotipo lisis por ciertos fagos morfovar morfotipo rasgos morfológicos especiales
TIPOS DE CLASIFICACIÓN • 1) FENÉTICAS O FENOTÍPICAS • 2) FILOGENÉTICAS O FILÉTICAS
RELACIÓN DEL ADN Tamaño del genoma Contenido de G+C Reasociación en condiciones óptimas Estabilidad térmica de secuencias Reasociación en condiciones supraóptimas
Se comparan macromoléculas que se comportan como “cronómetros evolutivos”. • Sus característcias son: • distribución universal • realizar la misma función en todos los seres vivos • sus secuencias deben permitir la identificación de regiones de homología y heterogeneidad • la tasa de cambio de la secuencia de la macromolécula debe estar en correlación con la distancia evolutiva • EL USADO ES EL ARNr, Y DENTRO DE ELLOS EL 16S
A. TINCIÓN:Gram, AAR, Cápsula B. MÉTODOS BIOQUÍMICOS:actividad enzimática, medios selectivos C. MÉTODOS SEROLÓGICOS: aglutinación en porta, ELISA, IFI D. TIPIFICACIÓN POR BACTERIÓFAGOS:altamente específicos (placa) E. SECUECIACIÓN DE AMINOÁCIDOS F. PERFIL DE ÁCIDOS GRASOS G. COMPOSICIÓN DE BASES DEL DNA: % de G+C H. HIBRIDIZACIÓN DEL DNA Métodos de identificación bacteriana
CULTIVO PURO MORFOLOGÍA DE COLONIA Y GRAM PROPIEDADES BIOQUÍMICAS CARACTERÍSTICAS DE CRECIMIENTO PROPIEDADES ANTIGÉNICAS CARACTERÍSTICAS GENÉTICAS O MOLECULARES PORCENTAJE DE G+C HIBRIDACION ESTABILIDAD TÉRMICA
DIFICULTADES EN LA IDENTIFICACIÓN • Asegurarse que se trabaja con un cultivo PURO • Trabajar desde categorías mayores a menores • APLICAR EL SENTIDO COMÚN EN CADA PASO • Usar el menor número de pruebas • Comparar el aislamiento con cepas tipo o de referencia
DIFICULTADES EN LA IDENTIFICACIÓN • CUANDO NO SE LOGRA IDENTIFICAR EL AISLAMIENTO: • Controlar pureza • Asegurarse que se han realizado las pruebas apropiadas • Controlar que los métodos sean confiables • Que se han usado correctamente las distintas claves y tablas
Diagnóstico Clínico Investigaciones No microbiológicas Tomar correctamente Rotular y embalar adecuadamente Almacenar y transportar correctamente No teñidos o teñidos con Gram u otra tinción Característica de colonia, morfología, hemólisis, pigmento, etc. Serología Tecnologías de DNA Por difusión en discos o MIC
CLASIFICACION DEL DOMINIO BACTERIA (Bergey 2001) El Manual Bergey categoriza a las bacterias en taxones basados en la secuencia de ARNr Por otra parte lista características identificatorias de las bacterias tales como: morfología celular, coloración de Gram, requerimientos de oxígeno • las bacterias del phylum Proteobacterias son Gram negativas • Alfa Proteobacterias: los integrantes de este sub-phylum crecen con niveles bajos de nutrientes (oligotróficos), algunos poseen prostecas (prolongaciones celulares) . Incluye a fijadores de nitrógeno, quimioautotrofos y quimioheterotrofos • Beta Proteobacterias: los integrantes de este sub-phylum habitan en el agua y suelo. Algunos son patógenos humanos, incluyen quimioautotrofos y quimioheterotrofos. Bordetella, Burkholderia, Neisseria
Gama Proteobacterias: incluye los ordenes Pseudomonadales, Legionellales, Vibrionales, Enterobacteriales, Pasteurellales, Francisella • Delta Proteobacterias: incluye los géneros Myxococcus y Bdellovibrio, parásitos de otras bacterias y el género Desulfovibrio • Epsilon Proteobacterias: incluye los patógenos humanos Campylobacter y Helicobacter
Bacterias Gram negativas No-proteobacterias Las phyla de bacterias Gram negativas no relacionadas filogeneticamente a Proteobacteria se clasifican en varios phyla de Gram negativas no Proteobacterias 1. El phylum Cyanobacteria corresponde a los fotoautotrofos que utilizan la luz como fuente de energía y CO2 como fuente de carbono y producen O2 durante la fotosíntesis 2. Los quimioheterotrofos incluyen Chlamydia (phylum Planctomyces), Bacteroides (phylum Bacteroides), Fusobacterium (phylum Fusobacteria) y Treponema, Borrelia y Leptospira (phylum Spirochetes). Muchos de ellos patógenos humanos
El Manual Bergey divide a las bacterias Gram Positivas de acuerdo a su contenido de G+C 1. Bacterias Gram Positivas de alto contenido de G+C (phylum Actinobacteria) incluye el importante género Mycobacterium y los géneros filamentosos Actinomyces y Streptomyces, formadores de conidiosporas. Los no formadores Nocardia y Frankia también se incluyen aquí. Corynebacterium, Propionibacterium 2. Bacterias Gram Positivas de bajo contenido de G+C (phylum Firmicutes) incluye a las bacterias del suelo, las lácticas y numerosos patógenos. Los órdenes Clostridiales (Clostridium), Bacillales (Bacillus) Lacobacilalles (Staphylococcus, Streptococcus, Listeria y Lactobacillus). También incluye a Micoplasmas (todavía clasificados como Gram negativos), pero como se tiñen débilmente por su falta de pared, se incluyen entre las bacterias Gram positivas de bajo contenido de G+C
Las bacterias fotosintetizadoras verdes (sulfúreas y no sulfúreas) y las púrpuras (sulfúreas y no sulfúreas) son fotoautotrofas gram negativas que usan energía luminosa y CO2 como fuente de carbono y no producen O2 (anoxigénicas). Se las clasifica por una parte dentro de dos sub-phyla diferentes de las Proteobacterias y por otra dentro de las no Proteobacterias
Sistemática “El estudio científico de los tipos y diversidad de organismos y de cualquiera y todas las relaciones entre ellos " (Simpson, 1961)
REINOS Animalia • 1753C. Linnaeus 2 Reinos Plantae Animalia • 1800´sE. Haeckel 3 ReinosPlantae Protista