1 / 11

Extrakcia DNA z ovocia

Extrakcia DNA z ovocia. Kanisová Katarína II.B , GSF v Žiline. Pomôcky: Šampón s EDTA Kuchynská solˇ Destilovaná voda Banán Papierová vreckovka Podchladený lieh Odmerný valec, váhy, striekačka, skúmavky, lyžička, kadičky a nádobky. Pracovný postup.

doctor
Download Presentation

Extrakcia DNA z ovocia

An Image/Link below is provided (as is) to download presentation Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author. Content is provided to you AS IS for your information and personal use only. Download presentation by click this link. While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server. During download, if you can't get a presentation, the file might be deleted by the publisher.

E N D

Presentation Transcript

  1. Extrakcia DNA z ovocia Kanisová Katarína II.B, GSF v Žiline

  2. Pomôcky: • Šampón s EDTA • Kuchynská solˇ • Destilovaná voda • Banán • Papierová vreckovka • Podchladený lieh • Odmerný valec, • váhy, striekačka, • skúmavky, lyžička, • kadičky a nádobky

  3. Pracovný postup • Odkrojím 2 kolieska banánu • Rozpučím ich v miske lyžičkou • V nádobke zmiešam • 20-25ml vody, 2g • (1/2 lyž.) soli spolu • s 10ml šampónu , • aby sa všetko dobre • rozpustilo ale • nevytvorila sa pena

  4. Kašovitú hmotu z banána • rozdelím do 2 skúmaviek • Vzniknutý roztok • nelejem do skúmaviek • a dôkladne premiešam • Nechám približne • 10 minút odstáť

  5. Následne zmes • prefiltrujem • pomocou • vreckovky do • čistej nádoby • Vzniknutý filtrát rozdelím do dvoch • skúmaviek • Zalejem približne štvornásobkom • podchladeného liehu • Po krátkej dobe začne zo zakaleného • filtrátu na spodu skúmavky stúpať • k hladine biela vláknitá zrazenina

  6. Táto zrazenina obsahuje niektoré • proteíny z jadra buniek banánu, • prípadne iné molekuly s podobnými • chemickými vlastnosťami ako DNA

  7. Čo sa to vlastne deje?

  8. DNA je umiestnená v jadre bunky A teda je od okolitého prostredia oddelená viacerými fosfolipidovými membránami. Tu je na ňu naviazaných množstvo proteínov a iných molekúl (transkripčné faktory, polymerázy). Táto makromolekula obsahuje dva komplementárne reťazce pripútané k sebe vodíkovými mostíkmi Nesie náboj, a teda je rozpustná vo vode a môže byť z vodného roztoku vyzrážaná etanolom.

  9. Voda -tvorí reakčné prostredie -DNA je v nej rozpustná Soľ -udržuje osmotický tlak roztoku -urýchľuje lepšie uvoľňovanie Šampón -detergenty prederavia bunkovú membránu a vyzrážajú niektoré proteíny -EDTA inhibuje tie proteíny, ktoré obsahujú kovy schopné poškodiť DNA

  10. Následnou filtráciou sa odstránia všetky látky nerozpustné vo vode. Podchladený lieh sa prilieva preto, že sa menej zmiešava s vodou. DNA sa vyzráža a „vypláva“ do hornej časti skúmavky ku hladine. Týmto sa však nezbavíme väčšiny proteínov viazaných na DNA, takže výsledná „hmota“ obsahuje najmä DNA, čo ale v bežných podmienkach nevieme 100% dokázať. V laboratóriu sa dokazuje látkou Ethydiumbromid alebo DAPI.

  11. Ďakujem za pozornosť

More Related