Izotóp Intézet Kft.

1. Radiokémiai szennyezők vizsgálata etilén-diamin-tetrametilén-foszfonát (EDTMP) és ón(II)-klorid tartalmú liofilizátumok öregedését modellező rendszerekben Paál Margit, Antalffy Mária, Környei József Izotóp Intézet Kft.

2. Multibone kit: liofilizátum EDTMP: 25 mg (57,3 μmol) Sn(II)-klorid: 1 mg ( 4,4 μmol) Jelezhetőség: leképezésre: 99mTc terápiára: 90Y, 153Sm, 177Lu Cél: a lejárati idő kiterjesztése

3. I. Vizsgálati terv 1. Tárolásos stabilitásvizsgálat (nemzetközi ajánlások szerint) – „statikus öregedési modell” – szennyezők spontán kialakulása várható 2. Provokatív vizsgálat („dinamikus modell”) a gőzsterilezés által okozott hősokk hatásának vizsgálata, potenciális és / vagy látens folyamatok észlelhetővé tétele

4. II. Megfontolások a.) A jelzést követően várható radioaktív komponensek 1. Jelzett EDTMP (etilén-diamin-tetrametilén-foszfonát) [99mTc(HO3P-CH2)2N-CH2-CH2-N(CH2-PO3H)2] 2. Sn(II) vagy Sn(IV) és EDTMP kölcsönhatása révén létrejövő, 99mTc radionukliddal jelezhető szennyezők 3. Ligandumokkal kölcsönhatásba lépő 99mTc-vegyületek: szabad pertechnetát és / vagy redukált – hidrolizált technécium

5. II. Megfontolások, folytatás b.) A hordozómentes jelzés megfontolása 99mTc (400 MBq) = 2 . 10-2nmol Sn(II)-tartalom = 4,4μmol

6. II. Megfontolások, folytatás c.) Radioaktív komponensek elválasztása Rendszer Jellemző Whatman ET-31 papíron aceton eluens 10 perces kifejlesztési idő 99mTcO4- mindig a fronton, minden nem-lipofil a starton redukált – hidrolizált 99mTc mindig a starton, minden nem-lipofil vegyület a fronton ITLC SG rétegen fiziológiás sóoldat eluens 10 perces kifejlesztési idő a különböző jelzett vegyületek különböző Rf -értéknél jelentkeznek Kieselgel 60 rétegen EtOH : H2O 1:1 (v/v) eluens 2,5 órás kifejlesztési idő

7. III. Elvégzett vizsgálatok Multibone kit egy ampullájának tartalma feloldva 2 ml fiziológiás sóoldatban, EDTMP / Sn(II) mólarány 12,9 : 1 frissen összemért EDTMP és Sn(II) oldat EDTMP / Sn(II) mólarány 12,9 : 1 és 1 : 1 + 99mTcO4- hőkezelés 121 oC 30 - 90 perc + 99mTcO4- + Sn(II) in situ 0,44 mol, 1/10 hőkezelés 121 oC 30 - 90 perc + 99mTcO4-

8. III. Elvégzett vizsgálatok, folytatás frissen összemért EDTMP és Sn(IV) oldat EDTMP / Sn(IV) mólarány 12,9 : 1 és 1 : 1 hőkezelés után liofilizált EDTMP és Sn(IV) oldat EDTMP / Sn(IV) mólarány 1 : 1 + Sn(II) in situ 0,44 mol, 1/10 + 99mTcO4- hőkezelés 121 oC 30 - 90 perc + Sn(II) in situ 0,44 mol, 1/10 + 99mTcO4-

9. III. Elvégzett vizsgálatok, folytatás Infravörös spektroszkópiás mérések az MTA KKKI Molekulaspektroszkópiai Osztályának közreműködésével a Multibone kitben { Sn(II)-EDTMP } az Sn(IV)-EDTMP liofilizátumban referencia: EDTMP önmagában, ón-ortofoszfát

10. IV. Vizsgálati eredmények Kieselgel 60 réteg – EtOH : H2O 1:1 (v/v) Whatman ET-31 papír – aceton szabad 99mTcO4- cps cm redukált - hidrolizált 99mTc

11. IV. Vizsgálati eredmények, folytatás Kieselgel 60 réteg – EtOH : H2O 1:1 (v/v) Whatman ET-31 papír – aceton Multibone, {EDTMP/Sn(II) = 12,9 : 1} Rf=0,67 Rf=0,90 hőkezelt Multibone csak 99mTcO4-

12. IV. Vizsgálati eredmények, folytatás ón(II) tartalom, % az EDTMP liofilizátumban 100 80 60 40 20 100 150 300 50 200 250 a liofilizátum gyártásától eltelt napok száma

13. IV. Vizsgálati eredmények, folytatás Kieselgel 60 réteg – EtOH : H2O 1:1 (v/v) Whatman ET-31 papír – aceton frissen összemért EDTMP / Sn(II) = 12,9 : 1, azonnal felhasznált nincs 99mTcO4- Rf=0,67 frissen összemért EDTMP / Sn(II) = 12,9 : 1, hőkezelés után csak 99mTcO4-

14. IV. Vizsgálati eredmények, folytatás Kieselgel 60 réteg – EtOH : H2O 1:1 (v/v) Whatman ET-31 papír – aceton frissen összemért EDTMP / Sn(II) = 1 : 1, hőkezelés után kevés 99mTcO4- Rf=0,90 frissen összemért EDTMP / Sn(II) = 1 : 1, hőkezelés után in situ Sn(II) adagolással nincs 99mTcO4-

15. IV. Vizsgálati eredmények, folytatás Kieselgel 60 réteg – EtOH : H2O 1:1 (v/v) Whatman ET-31 papír – aceton frissen összemért EDTMP / Sn(IV) = 1 : 1, hőkezelés után Rf=0,04 Rf=0,67 kevés 99mTcO4- Rf=0,15 Rf=0,90 hőkezelés után liofilizált EDTMP / Sn(IV) = 1 : 1, in situ Sn(II) adagolással Rf=0,04 nincs 99mTcO4- nincs Rf=0,67 Rf=0,90 Rf=0,15

16. IV. Vizsgálati eredmények, folytatás Infravörös spektrumok EDTMP Sn - O - P - C rezgések Sn(II) ill. Sn(IV) eltérő koordinációjának megfelelően: 1652 cm-1 1640 cm-1 Sn(IV)-EDTMP Sn(II)-EDTMP

17. V. Vizsgálati eredmények értékelése Kieselgel 60 réteg – EtOH : H2O 1:1 (v/v) Rf értékek Frissen összemért Sn(II)-klorid és (EDTMP) Rf=0,67 (>99%) Rf=0,67 (80±5%) Sn(II)-klorid és (EDTMP) liofilizátum (Multibone) Rf=0,90 (20±5%) Csak a liofilizátumról felvett IR-spektrumon észlelhető az1652 cm-1csúcs, ami az Sn - O - P - C kötésekre utal A Multibone kitben az ón(II) és a ligandum között a liofilizálás során legalább részlegesen olyan kölcsönhatás megy végbe, ami e komponensek frissen összemért oldatában nem lép fel. Valószínűsíthető, hogy a liofilizátumból a jelzés során kétféle komplex alakul ki: [99mTc-EDTMP] és [ 99mTc-(Sn-EDTMP)n]

18. V. Vizsgálati eredmények értékelése, folytatás Hőkezelés hatására az oldatokban az Sn(II) elveszíti redukáló-képességét, ha az EDTMP ligandum feleslegben van jelen. Ugyanakkor ez a jelenség nem figyelhető meg EDTMP - Sn(II) 1 : 1 mólarány esetén. A hőkezelés során tehát az Sn(II) Sn(IV) oxidáció legfeljebb részlegesen megy végbe, ugyanakkor valószínű, hogy az Sn-EDTMP kölcsönhatás (oligomer-képződés) teljes mértékben végbemegy. Amennyiben az EDTMP nincs feleslegben, az oligomer-képződés mellett marad szabad ón(II) a 99mTcO4- redukciójához. A kapott jelzett vegyület: [ 99mTc-(Sn-EDTMP)n](Rf = 0,9)

19. IV. Vizsgálati eredmények értékelése, folytatás Az ón(IV)-klorid és az EDTMP hőkezeléskor és liofilizálásakor olyan rendszer képződik, amelyet feloldva és in situ ón(II) - adagolás mellett technéciummal jelezve, a jelzett vegyületek nagyobb hányada Rf=0,04 és Rf=0,15 csúcsokkal jellemezhető. Az Rf = 0,04 csúcs redukált-hidrolizált 99mTc jelenlétére is utalhat, azonban az Rf = 0,15 csúcs megjelenése ezzel nem magyarázható. Az Sn(IV)-klorid és EDTMP hőkezelése és liofilizálása nagyobb molekulatömegű jelzett vegyületek kialakulásához vezet: [99mTc-(Sn-EDTMP)x] Rf = 0,04 (?), Rf = 0,15 ; x >> n [99mTc-(Sn-EDTMP)n] Rf = 0,90

20. VI. Következtetések • A Multibone kit lejárati idejének • kiterjesztésénél feltétlenül elő kell írni • hűtve tárolás és szállítás követelményét; mindenfajta hőhatást kerülni kell. • További vizsgálatok szükségesek annak • eldöntésére, hogy a hordozómentes jelzés • során tapasztalt jelenségek hogyan • mutatkoznak meg háromértékű, nem • hordozómentes fémekkel történő jelzés • esetében.

21. VII. Köszönetnyilvánítás Ezúton is szeretném köszönetemet kifejezni a Magyar Tudományos Akadémia KKKI Molekulaspektroszkópiai Osztályának az infravörös spektroszkópiás vizsgálatok elvégzéséért. Külön köszönet illeti Németh Csabát, a MTA KKKI tudományos munkatársát, aki a spektrumok értékelését, értelmezését végezte. Köszönöm figyelmüket!