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细胞系的生命期

细胞系的生命期. 原代培养 Primary culture. 原代培养 Primary culture. 概念 从体内取出组织细胞 开始培养到 第一次进行传代之前 的时期，一个特征性的必然的生长阶段。 完成了 从体内 环境 到体外 环境的 过渡 和 适应 过程， 恢复 了 分裂增殖 与 生长发育 的能力. 含义 : 包含 ①原代培养实质是 初次培养 ，即培养物接种到培养器皿 中就 不再分割 ，任其生长繁殖 ②原代培养中的“代” 并 不是指细胞繁殖的“代”数 ③原代培养过程中不分割培养物 不等于不更换培养液

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细胞系的生命期

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Presentation Transcript

  1. 细胞系的生命期

  2. 原代培养Primary culture

  3. 原代培养 Primary culture 概念从体内取出组织细胞开始培养到第一次进行传代之前的时期，一个特征性的必然的生长阶段。 完成了从体内环境到体外环境的过渡和适应过程，恢复了分裂增殖与生长发育 的能力

  4. 含义:包含①原代培养实质是初次培养，即培养物接种到培养器皿 中就不再分割，任其生长繁殖②原代培养中的“代” 并不是指细胞繁殖的“代”数③原代培养过程中不分割培养物不等于不更换培养液 建立方法:组织块法,分散(细胞悬液）法 时间: 一般1~4周

  5. 特点 (1)性质①性状似体内可表达某些形态、结构、功能,更能 代表活体细胞最接近在体时的情况 ②细胞异质性 细胞成分混杂，除目的细胞之外， 其它各种细胞还存在 ③细胞活跃移动，分裂不旺盛 ④相互依赖性强 独立生存能力差,不易单个培养

  6. 特点 (2)发展过程:调整组成 原代培养的产生- -选择 结果:形成相对均一的细胞系 选择第一步:形成原代培养的基础组织块:能迁移出的消化分散:操作中能生存、附着 能悬浮生存

  7. 特点-发展过程 选择第二步:时间：数小时后至铺满(汇合confluence)变化：数小时后至进一步选择中3种情况:能增殖 能存活 不能存活 细胞类型,继续改变,至铺满

  8. 特点-发展过程 选择第三步:时间：铺满后 (可用于生长区域已被利用)变化：通过密度抑制 密度依赖性敏感的细胞(如正常细胞)-----密度依赖性敏感低的细胞(如永生性细胞)---

  9. 特点-发展过程 需及时传代传不传代及何时传代 根据： 接种的细胞数量 培养瓶皿的大小 培养条件 在一定程度上具有可人为操作的特征

  10. 传代期- -细胞系Subculture - - Cell line

  11. 传代期- -细胞系 Cell line 概述将原代培养物经过分割，重新接种 到两个或两个以上 的器皿内进行培养， 进入传代培养期整个培养过程的主要时期 原代培养物---------要经过反复传代传代培养期 并不单指原代培养物经首次传代后 的“第一代”培养过程 而是指由首次传代开始经反复传代一直到培养物 开始衰退之前的全部时间

  12. 经过传代即称为细胞系细胞系可以继续传代 传代培养期就是 维持细胞系增殖、生长的培养过程 传代培养期的长短： 培养的细胞种类供体年龄大小一般是有限细胞系

  13. 特点细胞分裂增殖活动旺盛，细胞生长活跃细胞群体在调整：每次传代,调整 - 因增殖能力、耐受力差异 原本成分混杂的培养物中，增殖能力较强的细胞渐处于优势 其它逐渐淘汰 传代培养早期，细胞尚能保持二倍体核型随着传代次数增加 细胞发生转化的概率增大

  14. 能维持的代数一般是有限细胞系种族(主要):成纤维细胞 人,50;猴,40;鸡,37;鼠,8部位:人: 胚肺 50±10;肾8~19猴: 肺 5;肾 20;耳 40条件:如表皮细胞 +EGF从50代 增加至150年龄

  15. 传代的频率原则上 贴壁生长将长满培养罪皿的生长面(器皿的底壁)悬浮培养下细胞密度足够大具体时间并没有定时，根据 具体情况，但提前或过晚 (尤以后者)都不合适 一般:数天~ 一周因素:接种细胞数量:量大- 快 接种细胞性质:细胞系比原代- 快培养液:高血清- 快

  16. 意义 生物学意义:形成较均一的细胞 实际意义:优点:可传代,有特征,数目多,均一性,可冻存缺点:遗传学可改变,失去分化

  17. 衰退期Senescence phase

  18. 衰退期 Senescence phase • 概述仍生存,但基本不增殖- - -衰退,死亡传代培养到一定的代数时， 细胞的生命活动明显减弱。 细胞虽然生存，但生长缓慢、 很少分裂增殖甚或不再分裂， 即使及时换液也无效表明培养物已经进入衰退期， 再向前发展，只有退化、死亡

  19. 特点: 细胞系的生命期--归宿有限细胞系:一般 衰退、死亡转化:永生化: - -连续细胞系自发性转化诱导转化

  20. 自发性转化:偶而,个别通过危机- -转化 培养的细胞，由于尚不明确的原因---使培养的细胞发生自发的转化 转化细胞的性状可传递给予代细胞 来源细胞:2种可能转化因素:种族来源正常细胞:人 0;鸡 0;鼠较易9/11 诱导转化 诱导因素:化学、幅射、病毒等

  21. 诱发培养细胞的转化因素 凡能改变DNA (基因)结构的因素都可能成为诱发细胞转化因素。如①化学因素：如MNNG（甲基硝基亚硝基胍） ②物理因素：射线，包括放射性核素等. ③病毒: SV40,逆转录病毒等.④癌基因: 大多癌基团均有使细胞发生转化的 能力, 但癌基因的转 化必须借助载体和转导辅助因素.如诱发细细发生恶性转化,单个癌基因尚不足(如ras癌基因等), 常 需一两个以上才能产生这种效应

  22. 衰退期不同于每一代培养细胞的停滞期 处于衰退期的细胞以任何方法都不能阻 止其向死亡方向发展。 可见细胞轮廓增强，细胞质内出现暗的颗粒样结构及空泡状结构胞质 突起回缩,有时可脱落

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