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尿蛋白 SDS-AGE 电泳的临床应用. 广 州医学院检验系 2005 届毕业生 杜任生 指导老师 广州市珠江医院检验科 袁小澎. 摘要. 目的 研究各种尿蛋白的 SDS-AGE 电泳谱带模式 及其在诊断肾脏疾病中的作用。 方法 收集各种经病理活检确诊的肾脏疾病病人的尿液进行尿蛋白 SDS-AGE 电泳。观察电泳谱带的特征及对各蛋白组分的百分比进行评估分析。
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尿蛋白SDS-AGE电泳的临床应用 广州医学院检验系2005届毕业生 杜任生指导老师 广州市珠江医院检验科 袁小澎
摘要 • 目的 研究各种尿蛋白的SDS-AGE电泳谱带模式 及其在诊断肾脏疾病中的作用。 • 方法 收集各种经病理活检确诊的肾脏疾病病人的尿液进行尿蛋白SDS-AGE电泳。观察电泳谱带的特征及对各蛋白组分的百分比进行评估分析。 • 结果 肾小管损伤性尿蛋白的电泳谱带表现为小分子量蛋白谱带，肾小球损伤性尿蛋白的电泳谱带表现为大、中分子量蛋白谱带，肾小管、肾小球同时损伤时，尿蛋白电泳谱带表现为大、中、小分子量蛋白都有混合性蛋白谱带。 • 结论SDS-AGE尿蛋白电泳对肾脏疾病的诊断、鉴别诊断、指导治疗及判断预后很有价值。
关键词 • 尿蛋白；SDS-AGE电泳
蛋白尿是肾脏疾病最常见的临床表现之一。鉴定尿蛋白的性质、来源是诊断和治疗各种肾脏疾病的关键。而一般尿蛋白检测方法如：干化学法，磺基水杨酸法和24小时尿蛋白定量检测等都只能测总尿蛋白含量，而不能鉴别尿蛋白的性质和具体组成成分。虽然使用十二烷基硫酸钠-聚丙酰胺凝胶电泳法（SDS-PAGE）可以使尿蛋白按分子量大小分离，但操作烦琐，需要预浓缩尿液①，操作时间长，不适用于临床。蛋白尿是肾脏疾病最常见的临床表现之一。鉴定尿蛋白的性质、来源是诊断和治疗各种肾脏疾病的关键。而一般尿蛋白检测方法如：干化学法，磺基水杨酸法和24小时尿蛋白定量检测等都只能测总尿蛋白含量，而不能鉴别尿蛋白的性质和具体组成成分。虽然使用十二烷基硫酸钠-聚丙酰胺凝胶电泳法（SDS-PAGE）可以使尿蛋白按分子量大小分离，但操作烦琐，需要预浓缩尿液①，操作时间长，不适用于临床。
材料和方法 • 1、标本来源 肾小管损伤性蛋白尿9例,其中男性7例，女性2例，年龄在17-63岁之间；肾小球损伤性蛋白尿18例，其中男性11例，女性7例，年龄在29-72岁之间；肾小球和肾小管都损伤的患者尿液8例，男性4例，女性4例，年龄在45-69岁之间,以上病例皆通过病理活检确诊。 • 2、仪器与试剂 美国Helena 公司的全自动快速电泳仪，离心机，SDS-AGE ，考马斯亮兰染液，20%冰醋酸，蒸馏水，加样枪，枪头，试管。
3、操作： • ①设置尿蛋白电泳参数： • 样本位置—— A、B； 点样时间——1秒； • 样品体积——3微升； 吸收时间——10分钟； • 冲洗次数——2次； 拭干时间——1秒； • 电泳时间——13分钟； 电泳电压——400伏； • 电泳温度——18摄氏度； 烘干时间——5分钟； • 烘干温度——54摄氏度。 • ②吸取50微升待检尿液于反应杯中，启动电泳仪。 • ③染色：考马斯亮兰染色10分钟，脱色液脱色1分钟2次，蒸馏水漂洗30秒，60-70度烘干5分钟。 • ④肉眼观察并分析电泳谱带后，于扫描仪上扫描半定量测定各蛋白组分的百分含量。
结果分析 • 根据尿蛋白分子量分布特征，以相对分子量为70KDA的白蛋白为界限分为 • ①小分子型蛋白条带（<70KDA） • ②中分子型蛋白条带（=70KDA） • ③大分子型蛋白条带（>70KDA）。 • 通过扫描半定量测定高、中、小分子量蛋白的相对百分比，同时统计其相对百分比的X±S。
结果 • 蛋白尿SDS-AGE电泳检测图谱如图一： • 图一、尿蛋白SDS-AGE电泳谱带图 • 1、小分子蛋白谱带 2、中、高分子蛋白谱带 3、高、中、低分子蛋白谱带
图谱扫描定量测定结果如表一 • 表一. 图谱扫描定量测定结果
讨论 • SDS是一种阴离子表面活性剂,当其浓度达到蛋白质量的5-10倍时，与还原剂共同作用，能使蛋白质分子内的氢键及二硫键断裂解离成单独的亚基。亚基与SDS充分结合形成带负电荷的亚基-SDS胶束，所带的电荷远远超过了蛋白质分子原有的电荷量，从而消除了不同分子之间原有的电荷差异，使蛋白质仅按分子量大小排列而不受其所带电荷的影响②。
正常情况下,肾小球滤膜只允许分子量小于或等于67KDA的蛋白质滤过,且滤过的血浆中分子量小于67KDA的小分子蛋白会被肾小管重吸收。所以,正常人尿液中仅含少量的分子量为67KDA的白蛋白。正常情况下,肾小球滤膜只允许分子量小于或等于67KDA的蛋白质滤过,且滤过的血浆中分子量小于67KDA的小分子蛋白会被肾小管重吸收。所以,正常人尿液中仅含少量的分子量为67KDA的白蛋白。
而当肾小球受损, 肾小球滤膜通透性增加时,尿液中会出现分子量大于67KDA的蛋白质;当肾小管受损,肾小管重吸收功能障碍时,尿液出现分子量小于67KDA的蛋白质;当肾小球、肾小管同时受损时，尿液中会出现分子量大小不等的蛋白质。
所以，经过SDS-AGE电泳后，肾小球损伤性蛋白尿会出现比白蛋白分子量大的蛋白谱带；肾小管损伤性蛋白尿会出现比白蛋白分子量小的蛋白谱带；肾小球、肾小管同时损伤性蛋白尿会出现分子量大小不等的蛋白谱带③。所以，经过SDS-AGE电泳后，肾小球损伤性蛋白尿会出现比白蛋白分子量大的蛋白谱带；肾小管损伤性蛋白尿会出现比白蛋白分子量小的蛋白谱带；肾小球、肾小管同时损伤性蛋白尿会出现分子量大小不等的蛋白谱带③。
我们对不同肾脏疾病患者尿液进行SDS-AGE电泳的实验结果表明：各种肾脏疾病就其疾病的特点表现出不同的蛋白谱带。反过来，我们可以根据SDS-AGE尿蛋白电泳的谱带特征和尿蛋白各组分的相对百分比含量来指导肾脏疾病的诊断和治疗。我们对不同肾脏疾病患者尿液进行SDS-AGE电泳的实验结果表明：各种肾脏疾病就其疾病的特点表现出不同的蛋白谱带。反过来，我们可以根据SDS-AGE尿蛋白电泳的谱带特征和尿蛋白各组分的相对百分比含量来指导肾脏疾病的诊断和治疗。
参考文献 • ① 陈梅芳，尿蛋白聚丙酰胺凝胶电泳的临床应用[J],中华内科杂 志,1997,36:326-328. • ② Le Bricon, Eriich D, Bengoufa D, etal. Sodium. Dodecyf sulfate agarose gel electroophorsis of urinary proteins:application to multiple myeloma[J]. clin chem.,1998,44(3):1191-1197. • ③ 高原,葛青玮,蒋巍.非浓缩尿琼脂糖蛋白电泳及其临床应用[J].上海医学检验杂志,2002,17(3):160-161.
