1 / 36

Dopingcontroles anno 2008, de laboratoriumanalyse

Dopingcontroles anno 2008, de laboratoriumanalyse. Dopingcontrolelaboratoria. Sinds jaren 60 ontstaan Sinds 1981 IOC accreditatie -PT Sinds 2002 WADA accreditatie ISO17025 ISL en TD: Analytisch/Juridisch/Administratief PT testen (aangekondigd en blind) 2008: 33 WADA laboratoria wereldwijd.

eaton-henry
Download Presentation

Dopingcontroles anno 2008, de laboratoriumanalyse

An Image/Link below is provided (as is) to download presentation Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author. Content is provided to you AS IS for your information and personal use only. Download presentation by click this link. While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server. During download, if you can't get a presentation, the file might be deleted by the publisher.

E N D

Presentation Transcript

  1. Dopingcontroles anno 2008,de laboratoriumanalyse DoCoLab – Faculty of Medicine and Health Sciences– GE06 http://www.DoCoLab.UGent.be/

  2. Dopingcontrolelaboratoria Sinds jaren 60 ontstaan Sinds 1981 IOC accreditatie -PT Sinds 2002 WADA accreditatie ISO17025 ISL en TD: Analytisch/Juridisch/Administratief PT testen (aangekondigd en blind) 2008: 33 WADA laboratoria wereldwijd DoCoLab – Faculty of Medicine and Health Sciences– GE06 http://www.DoCoLab.UGent.be/

  3. Dopingcontrolelaboratoria DoCoLab – Faculty of Medicine and Health Sciences– GE06 http://www.DoCoLab.UGent.be/

  4. DoCoLab – historische evolutie aantal stalen DoCoLab – Faculty of Medicine and Health Sciences– GE06 http://www.DoCoLab.UGent.be/

  5. DoCoLab – historische evolutie aantal stalen DoCoLab – Faculty of Medicine and Health Sciences– GE06 http://www.DoCoLab.UGent.be/

  6. DoCoLab – historische evolutie % positieve DoCoLab – Faculty of Medicine and Health Sciences– GE06 http://www.DoCoLab.UGent.be/

  7. DoCoLab Enige in Benelux Ca. 10de grootste internationaal (aantal routinestalen)wereldwijd 2006: 198 143 – 1,96% pos Traditioneel in top 3 % positieve 2de grootste aantal wet. publicaties/jaar2006-2007: 24 A1 – 6 onderzoekers DoCoLab – Faculty of Medicine and Health Sciences– GE06 http://www.DoCoLab.UGent.be/

  8. Scope en toepassingsgebied Verboden middelen en methodes: OOC Anaboliserende substanties Hormonen en gerelateerde b-agonisten Hormoon antagonisten en modulators Diuretica en andere maskeermiddelen M1: Verbetering van het zuurstoftransport M2: Chemische en fysische manipulatie M3: Genetische doping DoCoLab – Faculty of Medicine and Health Sciences– GE06 http://www.DoCoLab.UGent.be/

  9. Scope en toepassingsgebied Verboden middelen en methodes: IC Alles OOC Stimulantia Narcotica Cannabinoiden Glucocorticosteroiden Verboden middelen in specifieke sporten: IC Alcohol Beta-blokkers DoCoLab – Faculty of Medicine and Health Sciences– GE06 http://www.DoCoLab.UGent.be/

  10. Matrix Urine Alle “klassieke” middelen A-staal 50 ml; B-staal 25 ml Bloed Homologe bloedtransfusie Serum groeihormoon DoCoLab – Faculty of Medicine and Health Sciences– GE06 http://www.DoCoLab.UGent.be/

  11. Technieken: ‘70 TLC RIA GC – FID/ECD/NPD DoCoLab – Faculty of Medicine and Health Sciences– GE06 http://www.DoCoLab.UGent.be/

  12. Technieken: ‘80 GC – FID/ECD/NPD HPLC-UV GC-MS ELISA DoCoLab – Faculty of Medicine and Health Sciences– GE06 http://www.DoCoLab.UGent.be/

  13. Technieken: ‘90 GC –NPD HPLC-UV GC-MSn ELISA Immunologische testen (hCG) LC-MSn DoCoLab – Faculty of Medicine and Health Sciences– GE06 http://www.DoCoLab.UGent.be/

  14. Technieken: Nu - GC-MSn Immunologische testen (hCG, hGH) LC-MSn Gelelectroforese/immunoblotting/chemiluminescentie GC/C/IRMS Flowcytometrie DoCoLab – Faculty of Medicine and Health Sciences– GE06 http://www.DoCoLab.UGent.be/

  15. Kwaliteitszorg ISO17025 WADA ISL, TD’s 1e lijnscontroles: per batch min. 2 negatieve en 1 positieve controle ISTD’s in alle stalen 2e lijnscontroles: alle methodes/analysten: min. 1 blinde QC/jaar 3e lijnscontroles: WADA PT, WAADS PT, CSCQ, dubbel blinde QC A-staal: screening en confirmatie: onafhankelijke controle B-staal: extra garanties voor atleet DoCoLab – Faculty of Medicine and Health Sciences– GE06 http://www.DoCoLab.UGent.be/

  16. Het verhaal van een staal…in het lab Staalontvangst Verificatie verzegeling en conformiteit Verificatie begeleidende documentatie (anonimiteit!) Registratie en verificatie : e-lab in-house LIMS Chain-of-custody start A-staal: analyse – B-staal: diepvries/koelkast DoCoLab – Faculty of Medicine and Health Sciences– GE06 http://www.DoCoLab.UGent.be/

  17. Het verhaal van een staal…in het lab Screening pH en SG GC/MS: 2 analyses Narcotica, stimulantia, beta-agonisten, anabolica, aromatase-inhibitoren, THC LC/MS: 2 analyses Anabole steroiden, aromatase-inhibitoren, beta-agonisten, corticosteroiden, diuretica en beta-blokkers hCG (♂) EPO HES DoCoLab – Faculty of Medicine and Health Sciences– GE06 http://www.DoCoLab.UGent.be/

  18. Het verhaal van een staal…in het lab GC/MS en LC/MS: staalvoorbereiding aliquotering (bl, sbl, QC) pH-aanpassing enzymatische hydrolyse (narcotica, anabolica, aromatase-inhibitoren) LLE - SPE OFN Derivatisatie (GC-MS) DoCoLab – Faculty of Medicine and Health Sciences– GE06 http://www.DoCoLab.UGent.be/

  19. Het verhaal van een staal…in het lab GC/MS Analyse : 4 Agilent MSD ANAL-15: GC-MS (SIM); uitprint: 10 p Steroidprofiel: T, E, DHEA, DHT, Adion, Andro, Etio,… Ca 45 anabole steroiden, THC, 3 diuretica, 4 andere substanties ANAL-108: GC-MS (Full scan); 11 p 12 narcotica, ca 60 stimulantia, 6 aromatase inhibitoren, 5 andere substanties DoCoLab – Faculty of Medicine and Health Sciences– GE06 http://www.DoCoLab.UGent.be/

  20. K. Deventer, P. Van Eenoo and F. T. Delbeke. Rapid Commun. Mass Spectrom. 2005; 19: 90–98 K. Deventer, P. Van Eenoo and F. T. Delbeke. Rapid Commun. Mass Spectrom. 2005; 19: 90–98 Het verhaal van een staal…in het lab LC/MS Analyse: 2 Thermo LCQ en 2 Thermo TSQ ANAL-09*: LC-MSn (ESI; polarity switching) 26 diuretica 21 beta-blokkers 8 andere substanties ANAL-30: LC-MSn (ESI; polarity switching) 17 anabole steroiden 18 corticosteroiden 8 aromatase inhibitoren 9 b-agonisten 6 andere substanties * K. Deventer, P. Van Eenoo and F. T. Delbeke. Rapid Commun. Mass Spectrom. 2005; 19: 90–98 DoCoLab – Faculty of Medicine and Health Sciences– GE06 http://www.DoCoLab.UGent.be/

  21. Het verhaal van een staal…in het lab EPO en analogen: probleemstelling en mogelijkheden tot detectie DoCoLab – Faculty of Medicine and Health Sciences– GE06 http://www.DoCoLab.UGent.be/

  22. Het verhaal van een staal…in het lab Indirect In bloed Statistischemodellen op basis van bloedparameters: Hematocriet, reticulocyten, macrocyten %, EPO en SolubleTransferrinereceptor Direct In urine Onderscheid EPO, rhEPO en Aranesp op basis van verschillen in koolhydraten DoCoLab – Faculty of Medicine and Health Sciences– GE06 http://www.DoCoLab.UGent.be/

  23. Het verhaal van een staal…in het lab Indirect Gezondheidscontroles UCI HCT en Hb > 50 % en > 17 g/dl (♂) ; 47 % en 16 g/dl (♀) %reti (<0,20 %) Stimulatie index = Hb (g/l) - 60 √ reti (%) > 133 (♂) ; 123 (♀) Bloedtransfusie (?) DoCoLab – Faculty of Medicine and Health Sciences– GE06 http://www.DoCoLab.UGent.be/

  24. Het verhaal van een staal…in het lab Hematologische testen: synthetisch hemoglobine Plasma Haemolyse Hemopure 325 mg/dl DoCoLab – Faculty of Medicine and Health Sciences– GE06 http://www.DoCoLab.UGent.be/

  25. Het verhaal van een staal…in het lab Direct Concentratie/ opzuivering Gelelectroforese Dubbele immunoblotting met selectieve herkenning Chemoluminescentie Verwerking via GASEPO en interpretatie DoCoLab – Faculty of Medicine and Health Sciences– GE06 http://www.DoCoLab.UGent.be/

  26. Het verhaal van een staal…in het lab Direct Concentratie/ opzuivering Concentratie EPO: ca 10 ng/L andere proteines 30 mg/L 1000-voudige concentratie 20 ml → 20 µl Filtratie MW 30 kDa Toevoeging protease inhibitoren (complete) DoCoLab – Faculty of Medicine and Health Sciences– GE06 http://www.DoCoLab.UGent.be/

  27. Het verhaal van een staal…in het lab Direct Gelelectroforese EPO: isovormen huEPO pI 3,7 – 4,7 rhEPO pI 4,4 – 5,1 Aranesp pI 3,0-3,9 Gel: pH-gradient 2-6 ladingscapaciteit DoCoLab – Faculty of Medicine and Health Sciences– GE06 http://www.DoCoLab.UGent.be/

  28. Het verhaal van een staal…in het lab Direct Dubbele immunoblotting Primair AB: R&D-systems kloon AE7A5 DoCoLab – Faculty of Medicine and Health Sciences– GE06 http://www.DoCoLab.UGent.be/

  29. Het verhaal van een staal…in het lab Direct Chemiluminescentie en interpretatie Een staal is positief voor rhEPO indien: Minstens 3 opeenvolgende banden worden onderscheiden, overeenkomend met 1, 2, 3 of 4. De 2 meest intensieve van deze banden moeten opeenvolgend zijn, komen overeen met 1,2 of 3 en zijn 2 maal intensiever dan de meest intensieve band in het endogene gebied. Een staal is positief voor Aranesp indien: Minstens 3 banden worden onderscheiden die overeenkomen met B,C en D. De meest intensieve banden moeten overeenkomen met C en D. De meest intensieve band, C of D, moet intensiever zijn dan elke band in het endogene gebied. DoCoLab – Faculty of Medicine and Health Sciences– GE06 http://www.DoCoLab.UGent.be/

  30. Het verhaal van een staal…in het lab Homologe bloedtransfusie Bloedtoediening: ABO-systeem, rh(D) Bijkomende antigenen (C; c; E; e; K1 (Kell); K2(Cellano); Fya , Fyb , Jka, JKb, S en s) via flow cytometrie (concentraties) 100% negatief 100% positief mengpopulatie 1% pos DoCoLab – Faculty of Medicine and Health Sciences– GE06 http://www.DoCoLab.UGent.be/

  31. Het verhaal van een staal…in het lab hGH : serum Natuurlijk mix 22 kDa-isovormen en non-22 kDa isovormen Recombinant: 22kDa-isovormen Detectieprincipe: 22kDa/alle isovormen via time resolved immuno-assay OS Athene en Torino : geen AF’s DoCoLab – Faculty of Medicine and Health Sciences– GE06 http://www.DoCoLab.UGent.be/

  32. Het verhaal van een staal…in het lab Testosteron Endogeen – Exogeen Indirect: testosteron/epitestosteron >4 Natuurlijk verhoogde waarde Vorige waarden Follow Up Ca. 30% variatie mogelijk Direct: 13C/12C DoCoLab – Faculty of Medicine and Health Sciences– GE06 http://www.DoCoLab.UGent.be/

  33. Het verhaal van een staal…in het lab Testosteron Direct: 13C/12C Verschil in 13C gehalte van endogeen/farmaceutisch T Ca. 1.1 % alle C in natuur is 13C Endogeen: voeding → acetaat → cholesterol → T Farmaceutisch: uit plantsterolen Alle C komt finaal uit CO2, maar bij elke intermediaire stap naar T is er depletie van 13C DoCoLab – Faculty of Medicine and Health Sciences– GE06 http://www.DoCoLab.UGent.be/

  34. Het verhaal van een staal…in het lab Testosteron Direct: 13C/12C via GC/C/IRMS Extractie uit urine Opzuivering via HPLC Scheiding via GC (derivatisatie/ongederivatiseerd) Pyrolyse van C tot CO2 Meten 13CO2 en 12CO2 en vgl met Internat. Std → d-waarden DoCoLab – Faculty of Medicine and Health Sciences– GE06 http://www.DoCoLab.UGent.be/

  35. Het verhaal van een staal…in het lab Testosteron Direct: 13C/12C d-waarde T, metaboliet of precursor (Andro/Etio/Adiol) d-waarde endogeen steroid onafhankelijk T (11OHAndro, Pregnandiol) Ddwordt berekend en geëvalueerd Gevolg: invloed dieet (C4 ↔ C3) wordt beperkt DoCoLab – Faculty of Medicine and Health Sciences– GE06 http://www.DoCoLab.UGent.be/

  36. Dankwoord Alle collega’s van DoCoLab Het Departement Cultuur, Jeugd, Sport en Media – Dienst Medisch Verantwoord Sporten van de Vlaamse Gemeenschap DoCoLab – Faculty of Medicine and Health Sciences– GE06 http://www.DoCoLab.UGent.be/

More Related