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SFRP4 过表达对结肠癌细胞株 HCT116 基因表达谱的影响

SFRP4 过表达对结肠癌细胞株 HCT116 基因表达谱的影响. 复旦大学附属肿瘤医院病理科 黄 丹. 研 究 背 景. 研究背景. 结直肠癌的发病率. CA Cancer J Clin. 2008; 58: 161-179. 研究背景. Wnt 信号通路. 研究背景. 分泌型卷曲相关蛋白 SFRP. 一组分泌型糖蛋白家族 SFRPs 有五个家族成员在人类组织中表达 定位于染色体 8p 12 ～ 11.1 包括一个特有的同源半胱氨酸富含域（ CRD ）的 N- 末端和一个 C- 末端。 （除 SFRP3 以外）. 研究背景.

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SFRP4 过表达对结肠癌细胞株 HCT116 基因表达谱的影响

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  1. SFRP4过表达对结肠癌细胞株HCT116基因表达谱的影响SFRP4过表达对结肠癌细胞株HCT116基因表达谱的影响 复旦大学附属肿瘤医院病理科 黄 丹

  2. 研 究 背 景

  3. 研究背景 结直肠癌的发病率 CA Cancer J Clin. 2008; 58: 161-179

  4. 研究背景 Wnt信号通路

  5. 研究背景 分泌型卷曲相关蛋白SFRP • 一组分泌型糖蛋白家族 • SFRPs有五个家族成员在人类组织中表达 • 定位于染色体8p 12～11.1 • 包括一个特有的同源半胱氨酸富含域（CRD）的N-末端和一个C-末端。 （除SFRP3以外）

  6. 研究背景 分泌型卷曲相关蛋白SFRP • 通过与Wnt信号的蛋白质相互作用以阻止它们结合到Fz蛋白或与Fz形成无功能复合物而阻碍Wnt信号

  7. 研 究 目 的 • 检测SFRP4基因转染肠癌细胞株HCT116后基因表达谱的变化，深入探讨SFRP4在结直肠癌发生中的作用机制。

  8. 技术路线 pcDNATM 3.1-SFRP4重组质粒 双酶切鉴定 转染HCT116后 筛选稳定表达株 WB鉴定SFRP4表达 基因芯片检测（Pathway分析）

  9. 结果 • pcDNATM 3.1-SFRP4质粒的构建及稳定转染株的鉴定 • 芯片生物信息学分析 • RT-PCR验证部分基因芯片的结果

  10. EcoRI和HindIII双酶切重组质粒后凝胶电泳图 pcDNA3.1载体大小为5500bp， SFRP4基因片段大小为1056bp

  11. Western Blot 检测pcDNATM 3.1-SFRP4质粒稳定转染HCT116细胞后SFRP4的表达 0道为pcDNA3.1空载体，1和2道为pcDNA3.1-SFRP4

  12. pcDNATM 3.1-SFRP4质粒的构建及稳定转染株的鉴定 • 芯片生物信息学分析 • RT-PCR验证部分基因芯片的结果

  13. 上调的MAPK家族基因

  14. 下调的TNF家族基因

  15. 凋亡相关基因的改变

  16. pcDNATM 3.1-SFRP4质粒的构建及稳定转染株的鉴定 • 芯片生物信息学分析 • RT-PCR验证部分基因芯片的结果

  17. RT-PCR验证基因芯片结果 1，细胞转染SFRP4前；2，细胞转染SFRP4后。 β-actin作为对照。

  18. 讨论 • 我们通过基因芯片技术对基因组进行高通量的研究，通过生物信息学分析，我们筛选出比较重要的p38MAPK信号通路相关基因、TNF家族基因和凋亡有关基因的变化来探讨SFRP4对肿瘤细胞的作用机制。

  19. 讨论 • MAPK信号通路参与细胞增殖、分化及凋亡的调控，并在细胞恶性转化的病理过程中发挥重要作用 • 肿瘤坏死因子（TNF）家族是一类具有广泛生物学活性的分子，具有抗肿瘤、调节细胞生长分化等作用。它能直接抑制肿瘤增殖和诱导凋亡，有较强抗肿瘤的作用 • 结直肠癌细胞表达SFRP4后，促进凋亡和抑制凋亡的因子同时发生改变，提示其对凋亡的调控是一个复杂的过程。

  20. 谢谢！

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