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第 10 章 其他革兰阴性杆菌

第 10 章 其他革兰阴性杆菌. 第一节 嗜血杆菌属 第二节 鲍特菌属 第三节 布鲁菌属 第四节 巴斯特菌属 第五节 弗朗西斯菌属. 第一节 嗜血杆菌属（ Haemophilus ）. 嗜血杆菌属是一群没有动力、不形成芽胞、菌体呈球杆状的革兰阴性小杆菌，生长需求较高，在人工培养时需新鲜血液才能生长，故称嗜血杆菌。. 一、 分类. 流感嗜血杆菌 （ H .influenzae ） 副流感嗜血杆菌（ H .parainfluenzae ） 溶血嗜血杆菌 ( H .haemolyticus) 副溶血嗜血杆菌（ H .parahaemolyticus ）

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第 10 章 其他革兰阴性杆菌

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Presentation Transcript

  1. 第10章 其他革兰阴性杆菌

  2. 第一节 嗜血杆菌属 第二节 鲍特菌属 第三节 布鲁菌属 第四节 巴斯特菌属 第五节 弗朗西斯菌属

  3. 第一节 嗜血杆菌属（Haemophilus） • 嗜血杆菌属是一群没有动力、不形成芽胞、菌体呈球杆状的革兰阴性小杆菌，生长需求较高，在人工培养时需新鲜血液才能生长，故称嗜血杆菌。

  4. 一、分类 • 流感嗜血杆菌（H.influenzae） • 副流感嗜血杆菌（H.parainfluenzae） • 溶血嗜血杆菌(H.haemolyticus) • 副溶血嗜血杆菌（H.parahaemolyticus） • 杜克嗜血杆菌（H.ducreyi） • 埃及嗜血杆菌（H.aegyptius） • 嗜沫嗜血杆菌（H.aphrophilus） • 副嗜沫嗜血杆菌(H.paraphrophilus) • 迟缓嗜血杆菌（H.segnis）

  5. 二、临床意义 几种主要嗜血杆菌常栖部位及所致疾病

  6. 三、微生物学检验 • 生物学特性 • 临床标本采集 • 抗原检测及核酸检测 • 分离培养 • 鉴定

  7. 1.形态染色 G-小杆菌，呈多形性：球杆、长杆、丝状 无芽胞、无鞭毛、多数有菌毛，毒力株有荚膜 （一）生物学特性

  8. 营养要求高 需要X、V因子 生长温度为35℃ 初次培养，需5-10%Co2 多数能分解葡萄糖 最佳培养基： 巧克力琼脂 2. 培养特性

  9. 菌落特征：巧克力琼脂培养基灰白色，圆形，光滑，半透明的小菌落 流感嗜血杆菌巧克力琼脂养基菌落

  10. （二）临床检验程序 1.标本采集 • 在疾病早期采取标本，立即送检。 • 在取标本时以肉汤湿润，防止干燥。 • 对心内膜炎、患者取血液标本。 • 痰液标本应洗涤、消化，再接种。 • 不能立即送检应室温保存，不要冷藏。

  11. 2.分离培养 血液、骨髓：增菌后接种巧克力色血琼脂平板 有杂菌标本接种选择培养基： 巧克力琼脂中加入抗生素(万古霉素、 杆菌肽、氯林可霉素)?

  12. 3.鉴定 • 菌落形态、涂片染色特点 • 血平板卫星试验 • Ⅹ、Ⅴ因子需求试验

  13. 卫星现象 当流感嗜血杆菌与金黄色葡萄球菌在血平板上共同培养时，由于金黄色葡萄球菌能合成较多的Ⅴ因子，并弥散到培养基中 ，可促进流感嗜血杆菌生长，故在葡萄球菌周围生长的菌落较大，越远越小。 卫星现象(satellite phenomenon)

  14. 第二节 鲍特菌属（Bordetella）

  15. 一、分类 • 百日咳鲍特菌(B.pertussis) • 副百日咳鲍特菌（B.parapertussis） • 支气管鲍特菌(B.branchiseptica) • 鸟鲍特菌(B.avium) • 欣氏鲍特菌(B.hinzii) • 霍氏鲍特菌(B.holmesii)

  16. 二、临床意义 • 是百日咳的致病菌 • 一年四季均可发病，冬春季多发，小儿多于成人 • 传播途径：飞沫 • 传染源：患者 • 潜伏期：1~2周 • 致病因素：百日咳毒素(PT)、丝状血细胞凝集素 (FHA) 腺嘌呤环酶毒素(ACT)、气管细胞毒素、 皮肤坏死毒素

  17. 临床表现 • 卡他期：1~2周，明显卡他症状，传染性强，感染标本培养阳性率高 • 痉挛期：1~4周，阵发性剧烈咳嗽，支气管痉挛伴呕吐，直至咳出粘稠的痰液或呕吐为止，6个月以内婴儿可不出现阵发性剧烈咳嗽，细菌分离阳性率较低 • 恢复期：1~2周，阵咳减轻，渐趋停止。一般不侵入血流

  18. 三、微生物学检验 • 生物学特性 • 标本直接检查 • 分离鉴定与培养

  19. 1.形态染色 革兰阴性短小杆菌 无芽胞，有荚膜 支气管鲍特菌、鸟鲍特菌有鞭毛 （一）生物学特性 百日咳鲍特菌革兰染色

  20. 3种鲍特菌抗原因子

  21. 2.培养特性 • 专性需氧，营养要求高 ，生长时需要半胱氨酸和组氨酸，培养时应加入血液（15-25%），活性炭与离子交换树脂吸附多余脂肪。 • 最适生长温度为35℃～37℃ • 最适pH6.8～7.0 • 常用培养基：B-G（Bordet-Gengou)培养基（血液、甘油、马铃薯）,3-5天后呈细小，光滑、灰色水银滴状菌落，伴狭窄溶血环，多次传代后变为R型 • CCBA培养基 ：光滑，有光泽，水银滴样菌落。 • 无菌落出现，至少需要孵育7天才能报告阴性。

  22. 百日咳鲍特菌在CCBA培养基的菌落

  23. （二）临床检验程序 1.标本采集 • 咳碟法：将鲍金平板打开，对准平板咳嗽数次，直接收集飞沫 • 鼻咽拭子法 • 一般不侵入血流 2.标本直接检查 • 直接显微镜检查 • 抗原检测：丝状血细胞凝集素（FHA)与百日咳毒素（PT)抗体检测。 • 核酸检测 3.分离培养与鉴定：G－小杆菌，无动力，血平板与巧克力平板上不生长，鲍金培养基上生长缓慢，触酶（＋）与氧化酶（＋）。

  24. 标 本 直接检查（革兰染色） 血清学诊断，ELISA等 分离培养 DFA 抗原检出 鲍-金琼脂 核酸检测 可疑菌落 生化反应 DFA 核酸检测 菌落观察 镜 检 凝集反应 鲍特菌检验程序

  25. 6种鲍特菌生化特征

  26. 第三节 布鲁菌属（Brucella）

  27. 一、分类 • 羊布鲁菌（B.melitensis） • 牛布鲁菌（B.abortus） • 猪布鲁菌（B.svis） • 绵羊布鲁菌 (B.ouis) • 狗布鲁菌 (B.canis) • 森林鼠布鲁菌（B.neotomaes）

  28. 二、临床意义 • 传染源：病兽，以羊、牛、猪多见 • 传播途径：病兽的组织、尿、乳液、等通过人体的皮肤、呼吸道、消化道进入人体 • 易感人群：发病以青壮年为主，从事兽医、皮毛加工、屠宰的工人发病率较高 • 潜伏期：5~21日，亦可高达数月

  29. 致病物质 • 内毒素、透明质酸酶、荚膜 • 所致疾病 • 动物：母畜流产、乳腺炎、附睾炎等 • 孕期动物易感，易引起流产，以羊种布鲁菌毒力最强 • 人类：波浪热

  30. 消化道、呼吸道黏膜、皮肤及眼结膜 分泌物、乳品 人 发热、出汗、关节痛和全身乏力 菌血症 1～6W 潜伏期 内毒素 （70％） 繁殖入血 菌血症 进入肝、脾、骨髓（发热消退） （体温再次上升） 波浪热

  31. 三、微生物学检验 • 生物学特性 • 标本采集 • 标本直接检查 • 分离培养与鉴定

  32. 1.形色染色 革兰阴性短小球杆菌，两端钝圆，偶见两极浓染， 无动力、无芽胞、无荚膜 羊布鲁菌：氧化酶（＋）触酶（＋），能分解葡萄糖 2.抗原成分 A抗原、M抗原 （一）生物学特性 羊—1:20 牛—20:1 猪— 2:1 马尔他布鲁菌革兰染色 A:M

  33. 需氧，营养要求较高，初次分离需5%~10%的CO2，培养基中含硫胺、烟酸、 生物素等物质 生长温度为35℃ 最适pH6.7 生长缓慢（5~7天），初代分离更为迟缓，30天无菌生长可报告(—） 抵抗力较强 在干燥土壤，病畜器官与分泌物能存活数月，对光，热，消毒剂敏感 3.培养特性 马尔他布鲁菌血平板菌落

  34. （二）临床检验程序 1.标本采集 • 血、骨髓、尿、乳汁、关节滑膜液；病畜的子宫分泌物、流产动物羊水及器官标本 2.标本直接检查 • 显微镜检查 直接镜检 意义不大 • 凝集反应 玻片凝集、试管凝集 • PCR检测

  35. 3.分离培养与鉴定 • 血液及体液：双相培养基-30d无菌生长阴性 • 分泌物、脏器：选择培养基 • 血清或肝浸液培养基:2~3d可见细小、无色透明的光滑型菌落 • 血平板上不溶血 • 液体培养基 开始轻度混浊、两周后有沉淀

  36. 布鲁菌的生化特性 注：V 不定; (-) 大部分菌株阴性

  37. 第四节 巴斯德菌属（Pasteurella）

  38. 分类 • 多杀巴斯德菌（P.multocida） • 嗜肺巴斯德菌（P.pneumotropica） • 溶血巴斯德菌（P.haemolytica） • 产气巴斯德菌（P.aerogenes） • 鸡巴斯德菌（P.qallinarum） • 犬巴斯德菌（P.Canis） • 贝氏巴斯德菌（P.beffgae） • 达可马巴斯德菌（P.dagmatis） • 明立巴斯德菌（P.tomatts）

  39. 临床意义 • 为人兽共患病原菌，屠宰场的工人与兽医易感 • 常引起肺部感染、支气管炎、菌血症、脑膜炎、脑脓肿、化脓性关节炎、骨髓炎、阑尾脓肿、腹膜炎、产褥热、肝脓肿及伤口感染 • 近年来，家养宠物增多，被狗猫抓伤，该病较为多见

  40. 微生物学检验 • 生物学特性 • 标本直接检查 • 分离培养与鉴定

  41. 形态染色 革兰阴性球杆菌 无动力、无芽胞 生物学特性

  42. 分离培养 巧克力平板、血平板：白色不溶血小菌落，约0.5~1.5mm 鉴定 触酶阳性和氧化酶阳性，发酵葡萄糖产酸不产气，不发酵乳糖，能还原硝酸盐 多杀巴斯德菌血平板菌落

  43. 第五节 弗朗西斯菌属（Francisella） 分类 土拉弗朗西斯菌（F.tularesis） 新凶手弗朗西斯菌（F.novicida）

  44. 临床意义 • 流行病学 • 分布广泛，是野生动物中的自然疫源性疾病 • 为人兽共患病原菌（土拉弗朗西斯菌是引起土拉热病（野兔热）病原菌 • 人有高度的易感性（接触，污染空气、水、食物与蚊虻叮咬） • 所以在战争时期该菌被用作生物战剂 • 潜伏期3~5天

  45. 临床症状 • 发病急、高热（39~40℃） • 剧烈头痛、关节痛 • 甚至发生衰竭及休克、全身中毒症状

  46. 微生物学检验 • 生物学特性 • 分离培养与鉴定 • 检验注意事项

  47. 生物学特性 • 革兰阴性小杆菌，需氧菌 • 无芽胞、无鞭毛、无荚膜 • 普通培养基上不生长，常用卵黄培养基或胱氨酸血琼脂培养基 • 最适温度：35~37 ℃ • 最适pH 6.8~7.2 • 固体培养基或动物脏器制备涂片，G染色可见大量黏液连成一片薄细网状复红色，菌体玫瑰色为本菌重要形态学特征，可与其他G阴性菌鉴别。

  48. 生化鉴定：发酵碳水化合物及醇能力较弱。 能发酵葡萄糖和麦芽糖，产酸不产气；分解脲素，产生少量H2S； 触酶阳性；氧化酶阴性；不产生吲哚。不发酵乳糖、蔗糖、鼠李糖、阿拉伯糖、甘露醇、山梨醇。

  49. 分离培养注意事项 • 本菌属甲类菌种 • 专门实验室进行 • 工作人员应接受预防接种

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