我国生化药的现状、发展趋势及质量控制

1. 我国生化药的现状、发展趋势及质量控制 天津市药品检验所 黄哲甦

2. 一、概述 生化药品一般系指从动、植物及微生物提取的，和用化学合成或用现代生物技术制得的一类天然药物，如氨基酸及其衍生物、多肽、蛋白、酶、辅酶、多糖、核苷酸及其衍生物等生命基本物质。该类生化药物具有针对性强、毒副作用低、易为人体吸收等特点。尤其对严重危害人类健康和生命的疾病，如心脑血管病、肿瘤、病毒疾患和糖尿病等方面有其独特的治疗效果。因而深受人们的关注，并且日益受到各国医药界的重视。

3. 二、生化药品分类： • 按国家教委指定的生化制药专业教科书的规定范围：氨基酸及其衍生物、酶和辅酶、核苷酸及其衍生物、多肽、蛋白、多糖、脂类等。

4. 二、生化药品分类 • 1、氨基酸及其衍生物 氨基酸是生命体重要的组成部分---蛋白质的基本组成单位，生命活动表现出各种生理功能，主要取决于蛋白质分子中的氨基酸的排列顺序以及形成特定的三维空间结构。

5. 正 常 生命体 健康 维持 解 聚 蛋白质 氨基酸 缺失 代 谢 聚 合 生命体 疾病 代谢紊乱 紊 乱 二、生化药品分类

6. 二、生化药品分类 • 根据以上描述，氨基酸类药物是治疗蛋白质代谢紊乱和缺乏所引起的一系列疾病的生化药，也是有高等营养价值的蛋白质补充剂，有着广泛的生化作用和临床疗效。

7. 二、生化药品分类 • 2、多肽和蛋白质 多肽和蛋白质是生物体内广泛存在的重要生化物质，具有多种多样的生化功能。目前，多肽类生化药的发展正在朝着临床应用十分广泛和有效的道路前进。多肽类激素和活性肽都是细胞自制的、含调节生理和代谢效能的微量有机物，常用的氨基酸有20多种。如：胸腺素有40个肽，目前正在一个个的合成，除原料药胸腺素外，已逐步合成胸腺三、四、五、八、九、二十四肽等。

8. 二、生化药品分类 • 随着生物技术的深入发展，生命的奥秘已经逐步被揭开，用重组技术生产的蛋白质药物正以惊人的速度突飞猛进。FDA已批准30多个重组药物，如insulin、rhGH。蛋白质是构成生物体的一类最重要的有机含氮化合物，是塑造一切细胞和组织的基本材料，是生命的物质基础。 随着现代rTPA、干扰素-2a、α -2b、a-N3、β-1b、r、r-1b；EPO-a、β；1L-2、GSF、GM-CSF……2005年，全球为600多亿美元，从原占医药的4%迅速提高至11%。

9. 二、生化药品分类 • 3、酶与辅酶 酶是具有催化功能的蛋白酶。酶类药物是直接用酶的各种剂型以改变体内酶的活力或改变体内某些生理活性物质和代谢产物的数量等，从而达到治疗某些疾病的目的。

10. 二、生化药品分类 • 4、多糖 多糖是由单糖缩合而成的链状结构物质。在自然界中存在的多糖起结构作用或作为一种能量的储存形式而起重要作用，所有多糖都可被酸水解而产生单糖或单糖的衍生物。

11. 二、生化药品分类 • 5、核酸类药物 • 核酸是生命的物质基础，它不仅是携带各种生物所特有的遗传信息，而且影响生物的蛋白质合成和脂肪、糖类的代谢。

12. 磷酸 核苷酸 核酸 嘌呤 碱基 嘧啶 二、生化药品分类

13. 二、生化药品分类 • 除以上以天然的形式存在的外，尚有它们的类似物、衍生物或它们的聚合物亦均属于核苷类药物，主要在干扰抗肿瘤代谢、干扰抗病毒代谢、放射病、血小板减少症、白细胞减少症、急慢性肝炎、心脑血管、肌肉萎缩、代谢障碍等疾病中发挥作用。

14. 二、生化药品分类 • 6、脂质类 • 脂质是脂肪、类脂及其衍生物的总称。广泛存在于动物、植物、微生物等生物体中。该类药物的种类繁多，结构差异，性能差别很大。一般分为：胆酸类、不饱和脂肪酸类、磷脂类、固醇类、色素类。故药理作用和临床应用各不相同。

15. 三. 2010年版二部药典和国家标准中生化药的现状和各类生化药的分配情况 • 1、氨基酸及其衍生物（2010版药典） 乙酰半胱氨酸 、乙酰半胱氨酸颗粒、喷雾用乙酰半胱氨酸、乙酰谷酰胺、乙酰谷酰胺注射液、门冬氨酸、门冬酰胺、门冬酰胺片、甘氨酸、甘氨酸冲洗液、丙氨酸、甲硫氨酸、甲硫氨酸片、色氨酸、色甘酸钠、色甘酸钠气雾剂、色甘酸钠滴眼液、异亮氨酸、苏氨酸、谷氨酸、谷氨酸片、谷氨酸钠、谷氨酸钠注射液、谷氨酸钾注射液、谷丙甘氨酸胶囊、苯丙氨酸、组氨酸、亮氨酸、盐酸赖氨酸、盐酸精氨酸、盐酸精氨酸片、盐酸精氨酸注射液、胱氨酸、胱氨酸片、脯氨酸、 酪氨酸、精氨酸、缬氨酸。

16. 三. 2010年版二部药典和国家标准中生化药的现状和各类生化药的分配情况 • 2、酶与辅酶（2010版药典） • 门冬酰胺酶（埃希）、注射用门冬酰胺酶（埃希）、门冬酰胺酶（欧文）、注射用门冬酰胺酶（欧文）、抑肽酶、注射液抑肽酶、尿激酶、注射用尿激酶、细胞色素C溶液、细胞色素C注射液、注射用细胞色素C、玻璃酸酶、注射用玻璃酸酶、胃蛋白酶、胃蛋白酶片、胃蛋白酶颗粒、含糖胃蛋白酶、胰蛋白酶、注射胰蛋白酶、胰酶、胰酶肠溶片、胰酶肠溶胶囊、胰激肽原酶、辅酶Q10、辅酶Q10片、辅酶Q10软胶囊、辅酶Q10注射液、辅酶Q10胶囊、凝血酶冻干粉、糜蛋白酶、注射用糜蛋白酶。

17. 三. 2010年版二部药典和国家标准中生化药的现状和各类生化药的分配情况 • 3、核苷酸及其衍生物（2010版药典） • 三磷酸腺苷二钠、三磷酸腺苷二钠注射液、注射用三磷酸腺苷二钠、肌苷、肌苷口服溶液、肌苷片、肌苷注射液、肌苷胶囊、肌苷葡萄糖注射液、肌苷氯化钠注射液、注射用肌苷、更昔洛韦、更昔洛韦氯化钠注射液、注射用更昔洛韦、利巴韦林、利巴韦林口服液、利巴韦林片、利巴韦林含片、利巴韦林注射液、利巴韦林胶囊、利巴韦林颗粒、利巴韦林滴眼液、利巴韦林滴鼻液、利巴韦林葡萄糖注射液、注射用利巴韦林、利巴韦林氯化钠注射液、泛昔洛韦、泛昔洛韦片、泛昔洛韦胶囊 、阿昔洛韦、阿昔洛韦片、阿昔洛韦乳膏、阿昔洛韦咀嚼片、阿昔洛韦胶囊、阿昔洛韦滴眼液、阿昔洛韦颗粒、注射用阿昔洛韦、胞磷胆碱钠、胞磷胆碱钠注射液、胞磷胆碱钠葡萄糖注射液、胞磷胆碱钠氯化钠注射液、注射用胞磷胆碱钠、盐酸伐昔洛韦、 盐酸伐昔洛韦片、盐酸伐昔洛韦胶囊、盐酸阿糖胞苷、注射用盐酸阿糖胞苷、腺苷钴胺、腺苷钴胺片。

18. 三. 2010年版二部药典和国家标准中生化药的现状和各类生化药的分配情况 • 4、多肽（2010版药典） 五肽胃泌素、五肽胃泌素注射液、甲状腺粉、甲状腺片、垂体后叶粉、垂体后叶注射液、鲑降钙素注射液、缩宫素注射液、生长抑素、注射液用生长抑素。

19. 三. 2010年版二部药典和国家标准中生化药的现状和各类生化药的分配情况 • 5、蛋白（2010版药典） 尿促性素(HMG)、注射用尿促性素、明胶、吸收性明胶海绵、重组人生长激素、重组人生长激素溶液、注射用重组人生长激素、重组人胰岛素、重组人胰岛素注射液、精蛋白重组人胰岛素注射液、胰岛素、中性胰岛素注射液、精蛋白锌胰岛素注射液、绒促性素(HCG)、注射用绒促性腺素、硫酸鱼精蛋白、硫酸鱼精蛋白注射液、

20. 三. 2010年版二部药典和国家标准中生化药的现状和各类生化药的分配情况 • 6、多糖（2010版药典） • 右旋糖酐20、右旋糖酐20-葡萄糖注射液、右旋糖酐20-氯化钠注射液、右旋糖酐40、右旋糖酐40-葡萄糖注射液、右旋糖酐40氯化钠注射液、右旋糖酐70、右旋糖酐70-葡萄糖注射液、右旋糖酐70氯化钠注射液、肝素钠、肝素钠注射液、肝素钠乳膏。

21. 三. 2010年版二部药典和国家标准中生化药的现状和各类生化药的分配情况 • 7、其它（2010版药典） 大豆油（供注射用）、牛磺酸片、牛磺酸胶囊、牛磺酸散、牛磺酸颗粒、牛磺酸滴眼液、前列地尔、注射用前列地尔。

22. 三. 2010年版二部药典和国家标准中生化药的现状和各类生化药的分配情况 • 8、氨基酸及其衍生物（国家标准） 乙酰半胱氨酸（供滴眼剂用）、乙酰半胱氨酸滴眼液、门冬氨酸钾镁片、小儿盐酸赖氨酸颗粒、复方谷氨酰胺肠溶胶囊、复方亮氨酸颗粒（3AA）、复方盐酸赖氨酸片、复方氨基酸注射液（6AA）、复方氨基酸注射液（17AA-1）、复方氨基酸注射液(9AA)、复方胱氨酸片、盐酸赖氨酸片、盐酸赖氨酸散、氨酪酸片、复方赖氨酸颗粒、对乙酰氨基酚颗粒 。

23. 三. 2010年版二部药典和国家标准中生化药的现状和各类生化药的分配情况 • 9、酶与辅酶（国家标准） 木瓜酶、纤溶酶、纤溶酶注射液、注射用纤溶酶、注射用辅酶Ⅰ、复方胰酶片、复方胰酶散、复方菠萝蛋白酶肠溶片、复方淀粉酶口服溶液、复方凝乳酶、复方凝乳酶胶囊、复方磷酸酯酶、复方磷酸酯酶肠溶片、菠萝蛋白酶肠溶胶囊、辅酶Ⅰ、淀粉酶、淀粉酶口服溶液、维酶素、唯酶片、唯酶胶囊、溶菌酶口腔药膜、中性蛋白酶、中性蛋白肠溶片、降纤酶。注射用降纤酶、菠萝蛋白酶、菠萝蛋白酶肠溶片、弹性酶肠溶胶囊。

24. 三. 2010年版二部药典和国家标准中生化药的现状和各类生化药的分配情况 • 10、核苷酸及其衍生物（国家标准） 二丁酰环磷腺苷钙、注射用二丁酰环磷腺苷钙、ATP-2Na片、ATP-2Na-氯化镁注射液、利巴韦林眼膏、阿糖胞苷、注射用阿糖腺苷、注射用三磷酸腺苷辅酶胰岛素、注射用阿糖腺苷、注射用核糖核酸、注射用脱氧核苷酸钠、核酪口服溶液、核酪注射液、核糖核酸Ⅲ、脱氧核苷酸钠、脱氧核苷酸钠片、脱氧核苷酸注射液。环磷腺苷葡胺注射液注射用腺苷钴胺、核糖核酸Ⅰ、 注射用核糖核酸Ⅰ、聚肌苷酸、聚胞苷酸、 聚肌胞注射液、 氟脲苷、注射用氟脲苷、 注射用复合辅酶、 三磷酸胞苷二钠、 三磷酸胞苷二钠注射液、注射用三磷酸胞苷二钠、核糖核酸Ⅱ、 注射用核糖核酸Ⅱ、注射用抗肿瘤免疫核糖核酸、 注射用抗乙肝免疫核糖核酸。

25. 三. 2010年版二部药典和国家标准中生化药的现状和各类生化药的分配情况 • 11、多肽（国家标准第九册） • 小牛脾提取物注射液、小牛脾提取物溶液、肝水解肽注射液、注射用促肝细胞生长素、科博肽注射液、促肝细胞生长素溶液、氨肽素、 • 氨肽素片、氨肽素硫酸锌片、科博肽、注射用科博肽、氨碘肽滴眼液、 • 脑苷肌肽注射液、眼氨肽注射液、眼氨肽滴眼液、缩宫素溶液、薄芝糖肽注射液、 蹄甲多肽、 蹄甲多肽片、脑蛋白水解物注射液、肌氨肽苷注射液、小牛血去蛋白提取物注射液、骨肽注射液、转移因子溶液、转移因子口服溶液、转移因子注射液、转移因子胶囊、注射用转移因子、氨碘肽注射液、胸腺肽溶液、胸腺肽注射液、注射用胸腺肽、蜂毒、 蜂毒注射液、 鹿瓜多肽注射液、 复方骨肽注射液、骨肽片、聚明胶肽注射液、复方脑蛋白水解物片、复方吡拉西坦脑蛋白水解物片、脑蛋白水解物（口服用）、脑蛋白水解物片。

26. 三. 2010年版二部药典和国家标准中生化药的现状和各类生化药的分配情况 • 12、蛋白（国家标准） 口服水解蛋白、口服水解蛋白粉（低苯丙氨酸）、水解蛋白口服液

27. 三. 2010年版二部药典和国家标准中生化药的现状和各类生化药的分配情况 • 13、多糖（国家标准） • 肝素钠含片、肝素钠乳膏、肝素钠维E乳膏、肠多糖、肠多糖片、灵杆菌多糖、金葡菌素注射液、注射用灵杆菌多糖、胃膜素胶囊、复方硫酸软骨素片、银耳孢糖、银耳孢糖肠溶胶囊、硫酸软骨素（供注射用）、硫酸软骨素注射液、硫酸软骨素A钠、硫酸软骨素A钠胶囊、硫酸软骨素滴眼液、灵孢多糖注射液、甘露聚糖、甘露聚糖口服溶液、 甘露聚糖片、甘露聚糖注射液、甘露聚糖胶囊、银杏蜜环口服溶液、盐酸氨基葡萄糖、云芝胞内糖肽、云芝胞内糖肽口服溶液、云芝胞内糖肽片、香菇菌多糖、香菇菌多糖片、云芝胞内糖肽胶囊。

28. 四、我国生化药的发展历程、存在的问题、发展趋势和重点四、我国生化药的发展历程、存在的问题、发展趋势和重点 • 1、发展历程： 我国生化制药是建国后逐渐发展起来的，经多年努力，已初具规模。1978年，经国务院批准，生化药品归商业部食品局管理。至90年代，生化药管理已经历了十几个春秋，亦伴随着十年改革的成长过程，由初建逐步走向健康发展的轨迹。92年经核实有三证的企业180余家，95年产值达20多亿人民币，品种100多种。生产手段逐步从传统的生物提取向新技术、现代生物技术迈进。目前，1990-2000年，又掀起企业的重组、剥离、合并。随着改革的不断深入，生化药品在2000年后又进入了一个新的时期，除部分独立地以生化药为主的生产企业外，还有相当部分的生产企业，往往是生化药、西药、中药均有生产的状况。尽管如此，2005年生化药年产值近200亿人民币，出口额为4.78亿美元，近40亿人民币，形势十分喜人，无论在数量、质量上有长足的进步。

29. 四、我国生化药的发展历程、存在的问题、发展趋势和重点四、我国生化药的发展历程、存在的问题、发展趋势和重点 • 2、存在的问题仍然十分突出：（1）产品低水平重复较严重，仿制品较多，自主创新产品十分匮乏；（2）产品结构老化，质量不高，新技术、新方法用的不多；（3）国内研制新药十分散，无规划，信息、经费不足，缺少创新人才；（4）新成果、新技术、新产品，因观念、体制和政策不协调，无统一规划，故新产品难以推广；（5）专利瓶颈的制约。

30. 四、我国生化药的发展历程、存在的问题、发展趋势和重点四、我国生化药的发展历程、存在的问题、发展趋势和重点 3、按照《我国生物产业发展十一五规划》的要求，随着新 世纪，生命科学研究、生物技术不断地取得重大的突破，生 物医药企业面临着十分有利的机遇。（1）发展目标十分明 确：2020年，我国生物药物占全国总数的1/3，1600亿至 2000亿；（2）我国生物药物的资源十分丰富，据国家统 计，有药用动植物为12800种（包括海洋药物）；（3）我 国人口增多，经济增长迅速，人民收入提高，医药需求增 长，市场潜力巨大。

31. 五、生化药的质量控制 （一）氨基酸类药物： 1、氨基酸的定性鉴别 《中国药典》2010年版采用薄层色谱法和红外光谱法鉴别各种氨基酸。薄层色谱法基本采用硅胶G薄层板，与对照品的主斑点进行比较；红外光谱法将氨基酸压制成KBr片，测定其红外吸收图谱与标准图谱比较定性。

32. 五、生化药的质量控制 • 2、氨基酸特殊杂质及安全性检查 氨基酸原料中所含的特殊杂质一般为一些其他种类的氨基酸，目前《中国药典》2010年版采用薄层色谱法进行限量检查；将样品溶液配制成一定浓度的供试品溶液，取一定量供试品液稀释后作为对照液，在同一硅胶G薄层板上，选择一定的展开剂及显色剂，一般规定供试品所显杂质斑点的颜色不得深于对照品的主斑点，以此限制其他氨基酸的含量。另《中国药典》2010年版收载的氨基酸基本规定了细菌内毒素的检查，各别品种如门冬氨酸仍采用热原检查，以次控制安全性。

33. 五、生化药的质量控制 • 3、氨基酸含量测定 除谷氨酸和胱氨酸外，《中国药典》2010年版 均采用非水酸碱滴定法，即用冰醋酸作溶剂，高氯酸标准溶液滴定，电位法确定终点。本法适用于常量氨基酸的含量测定。对于各种复方氨基酸制剂中的氨基酸含量目前采用以下方法：

34. 五、生化药的质量控制 (1)柱前衍生法：PITC衍生法、OPA-FMOC衍生法、 AQC衍生法、DABS-CI衍生法、NBD-F衍生法、 DNFB衍生法; (2)柱后衍生法（氨基酸分析仪法）：茚三酮衍 生检测法、OPA衍生检测法； (3)直接分析法：电化学检测法、蒸发光散射检测法。

35. 五、生化药的质量控制 （二）蛋白质、多肽类药物 1、定性鉴别 蛋白质、多肽类药物可根据其各自的物理、化学性质、生理作用等采用不同的方法如显色反应、色谱法、动物试验等进行鉴别。以胰岛素为例：《中国药典》2010年版二部收载的自猪胰脏中提取制得的胰岛素 和用基因工程技术制备的重组人胰岛素为高纯度的蛋白质，具有降血糖作用，为重要的蛋白质类药物。对胰岛素的鉴别采用两种方法：

36. 五、生化药的质量控制 • （1）HPLC法，比较供试品与对照品主峰的保留值。 • （2）肽图分析法，使用专一性较强的V8蛋白水解酶作用于特殊的肽链位点，将蛋白质裂解成较小的片段，以0.2mol/L硫酸盐缓冲液（pH2.3）-乙腈（90:10）为流动相A,乙腈-水（50:50）为流动相B;梯度洗脱，规定供试品溶液的肽图谱与对照品溶液的肽图谱一致。经V8酶水解胰岛素、对其分子碎片中的肽图进行分析，能确定不同种属的胰岛素，该法专属性强。

37. 五、生化药的质量控制 • 2、特殊杂质及安全性检查 对蛋白质类药物中所含的一些相关蛋白质杂质的检查一般采用电泳法和液相色谱法。较早胰岛素中有关蛋白质的检查，用聚丙烯酰胺凝胶电泳法，通过配制不同浓度的标准液与供试品液，经电泳后，比较供试品与标准品各色带的颜色与位置进行限量检查。《中国药典》2010年版二 部，参照USP32、EP6.0由SDS-PAGE改为分离度较好的HPLC法，使用C18柱，梯度洗脱及系统适用性试验。胰岛素中所含的大分子蛋白质杂质，以亲水改性硅胶为填充剂，进行分子排阻色谱分离检查。

38. 五、生化药的质量控制 • 3、蛋白质含量测定法 蛋白质是一条或多条多肽链组成的生物大分子。不同品种应针对自身蛋白质特性选择适宜的测定方法并作相应方法学验证，同时应尽可能选用与待测品种蛋白质结构相同或相近的蛋白质作对照品。《中国药典》2010年版二部附录共收载了以下六种方法：

39. 五、生化药的质量控制 • （1）凯氏定氮法 • （2）福林酚法（Lowry） • （3）双缩脲法 • （4）2,2’-联喹啉-4,4’-二羧酸法（BCA法）（5）考马斯亮蓝法（Bradford法） • （6）紫外-可见分光光度法。

40. 五、生化药的质量控制 • 4、效价测定 一些蛋白质药物的原材料来源于人、动物的组织或者体液，或者通过发酵而来，其组分不明确、按照化学药品的质控方式很难控制其质量。对无适当理化方法检定、常规化学测定方法较难建立，不能控制其质量的药品，生物检定是反映产品质量的重要指标，具有专属性，当前英国、美国及中国药典都有收载。 例如：

41. 五、生化药的质量控制 生化药名 生测方法 应用 收载标准 HMG FSH大鼠卵巢增重法 鉴别 ChP 2005 尿促性素 LH大鼠精囊增重法 效价测定 ChP 2005 HCG绒促性素 雌幼小鼠子宫增重法 效价测定 ChP 2005 垂体后叶 大鼠血压升高法 效价测定 ChP 2005 促皮质素 大鼠肾上腺内维C降低 效价测定 14th册 小牛脾提取物 家兔升高白细胞法 活性检查 9th册

42. 五、生化药的质量控制 生化药名 生测方法 应用 收载标准 rhGH重组人生长激素 去垂体大鼠体重法和胫骨法工艺验证ChP 2005 降钙素大鼠血钙法工艺验证ChP 2005 孕马血清促性腺激素雌幼大鼠卵巢增重法效价测定BP2007 升压素大鼠血压升高法鉴别USP29 人胰高血糖素兔血糖升高法工艺验证BP2007 人红细胞生成素 小鼠网织红细胞计数 效价测定 ChP 2005

43. 五、生化药的质量控制 • (三)酶类药物 酶是活体细胞产生的一类特殊蛋白质，是专一性很强的生物催化剂，可分为单纯酶和结合酶。在申报酶类新药时，除按一般蛋白质要求进行分子量、等电点等测定外，要根据酶的催化特性，测定酶促反应动力学的有关数据。酶类药物的效价测定一般以其生物学作用为基础，选用特定的底物，在一定条件下比较供试品和相当的标准品所产生的特定反应，通过等反应剂量间比例的运算，测得供试品中活体成分的效价。

44. 五、生化药的质量控制 • 目前较多地以分光光度法作为辅助测定手段。中国药典2010年版的胰蛋白酶、糜蛋白酶、胃蛋白酶等均采用此法测得效价。如胰蛋白酶能专一地作用于赖氨酸、精氨酸等碱性氨基酸的羧基组成的肽键、酰胺键及酯键，也可水解间位羟基苯酸酯及脂肪酸酯，以及变性蛋白如酪蛋白、血红蛋白等。因此可选用酪氨基或含有碱性氨基酸的酰胺、酯等为底物测定酶活力。因酪蛋白可被很多蛋白水解酶水解，缺乏专一性，，故目前均采用专属性较高的合成底物。中国药典以N-苯甲酰-L-精氨酸乙酯为底物，在胰蛋白酶的作用下，酯键被水解为N-苯甲酰-L-精氨酸，在253nm波长处的吸光度随酶促反应递增，根据吸光度的变化率计算胰蛋白酶的单位数。

45. 五、生化药的质量控制 • 尿激酶是由新鲜人尿经分离提纯后制得的一种碱性蛋白水解酶，其效价《中国药典》一直采用“气泡上升法”。原理为利用本品激活纤维蛋白溶酶原，使其转化为纤维蛋白溶酶。而纤维蛋白原在凝血酶作用下，转变成纤维蛋白凝块，此凝块在纤维蛋白溶酶作用下，水解为可溶性小分子多肽，以尿激酶的浓度为横坐标，纤维蛋白凝块的溶解时间为纵坐标，双对数作标准曲线求得供试品效价。该法简便、准确、快速。目前酶类药物分析方法整体上还停留在根据它们各自的生物学作用设计的生物测定法水平。

46. 五、生化药的质量控制 • (四)多糖类药物 • 多糖的分子量很大，常带负电荷，水合度较大，水溶液具有一定的粘度，能被酸或酶水解成单糖和低聚糖或其他组分多糖的成分。含糖醛酸和氨基糖基的多糖，如肝素、透明质酸等均具有酸性。多糖类分子中单糖组成的不同，糖苷键的连接方式和位置的不同以及相对分子质量的不同等构成了不同生理功能和生物活性。多糖类药物的理化特性主要包括比旋度、特性粘数、分子量测定、纯度检查及含量测定等。

47. 五、生化药的质量控制 • 1、分子量测定 • 多糖的相对分子质量可用以下方法测定： （1）高效液相色谱法 《中国药典》2010年版二部附录 V H收载了 用分子排阻色谱法测定多糖的分子量与分子量分布。测定应选用与供试品大小相适应的色谱柱填充剂，与供试品分子结构与性质相同的或相似的对照品和适宜的GPC软件 。采用GPC专用软件，可或得供试品归一化色谱图，微分、积分分子量分布图，各时间点的分子量（片段数据）和各种平均分子量，根据供试品需要选择各项测定结果。 （2）其他测定法 例如用粘度计测定特性粘度，从而推算平均相对 分子质量。用超速离心分析法，根据沉降系数（S）和扩散系数（D）,推算平均相对分子质量等。

48. 五、生化药的质量控制 • 2、含量测定 糖类药物的含量测定方法有比色法、紫外-分光光度法、高效液相色谱法、气相色谱法、生物测定法等。例如：硫酸软骨素钠，《中国药典》2010年版，采用高效液相色谱法，用专一性很强且灵敏的酶解法分离硫酸软骨素呈——A、B、C。再用离子色谱柱法很好分离硫酸软骨素成B、C和A。使用硫酸软骨素钠对照品，按外标法以硫酸软骨素B、C和A的峰面积之和计算。该法的特点，只能测猪软骨素（A/C有固定值 ），因国外来源很杂（牛、猪、禽、海洋动物），灵敏度优于USP 和EP的电泳法、EP为滴定时，因无专属性使将其它多糖混杂于方法中，使硫酸软骨素含量偏高。

49. 五、生化药的质量控制 • 另肝素可根据其抗凝血作用，采用生物检定法，比较肝素标准品与供试品延长新鲜兔血或兔、猪血浆凝结时间的作用，来测定供试品的效价。

50. 五、生化药的质量控制 • (五)核酸和核苷酸类药物 核酸是由数十个到数十万个核苷酸连接而成的高分子化合物，核酸组成中的碱基嘌呤化合物和嘧啶化合物都具有抗肿瘤作用。