Técnicas de Control y Esterilización

1. Técnicas de Control y Esterilización SUMARIO: Generalidades. Áreas del laboratorio. Técnicas de control y esterilización

2. GENERALIDADES • Para el estudio práctico, y la manipulación de los microorganismos en el laboratorio de microbiología, es preciso cumplir en primer lugar determinadas técnicas que garanticen seguridad para el personal humano a posible exposición de microorganismos patógenos. • El trabajo en el laboratorio de microbiología abarca en general tres areas: • Área de esterilización : Donde corresponde realizar la limpieza y esterilización de la cristalería usada en el trabajo práctico. • Área de siembra : Donde en condiciones de esterilidad ambiental e instrumental, se realizan siembras y resiembras de microorganismos y todas aquellas operaciones que requieren estricta asepsia. • Área de trabajo principal: Donde se realizan los análisis y experimentos necesarios, tales como tinción, observación microscópica, preparación de muestras, entre otras cosas.

3. Equipo necesario para el trabajo microbiológico. • El equipo básico para el trabajo de laboratorio en microbiología lo constituyen. • Campana bacteriológica • Campana de flujo laminar cuando es necesario • Mechero o incinerador • Incubadora bacteriológica • Autoclave • Horno esterilizador • Agitador de tubos • Centrífuga

4. EQUIPO DE SEGURIDAD NECESARIO EN UN LABORATORIO DE INVESTIGACIÓN • Extinguidores en lugares accesibles • Basureros cerrados • Lava – ojos • Extractor de vapor • Incinerador • Recipientes con desinfectantes y descontaminantes • Campana de flujo laminar y / o de bioseguridad • Equipo adecuado para descarte de material contaminado y de solventes

5. Técnicas microbiológicas: • Técnicas de esterilización y control de microorganismos. • Técnicas de cultivo. • Técnicas de microscopía.

6. Importancia del control microbiano. • Prevenir la transmisión de la infección y la enfermedad. • Prevenir la contaminación o la proliferación de microorganismos nocivos. • Prevenir el deterioro o la destrucción de materiales por los microorganismos. • Los microorganismos se eliminan, inhiben o matan por medio de: • Agentes Físicos. • Agentes químicos.

8. PREPARACIÓN Y ESTERILIZACIÓN DEL MATERIAL En Microbiología se define esterilización como la destrucción o eliminación total de todos los microorganismos vivos en un objeto o material, incluidas las endosporas bacterianas. La esterilidad es un estado absoluto, no hay grados de esterilidad. El material que se va a esterilizar debe prepararse de tal manera que se conserve sin contaminar una vez esterilizado:

9. El material de vidrio, como tubos, matraces, frascos, entre otros se cierran con algodón graso o tapones metálicos para evitar la entrada o salida de los microorganismos. Además, cuando se usa algodón, a de cubrirse éste con un papel impermeabilizado. En el caso de las pipetas, se les coloca en la boquilla un trocito de algodón que actuará como filtro, evitando la contaminación del operario con los microorganismos de la muestra y que éste a su vez contamine la muestra. Una vez preparadas, se introducen en estuches o cajas metálicas, o bien se envuelven individualmente en papel para ser posteriormente esterilizadas. Todo el material de vidrio se esteriliza con calor seco, generalmente en un horno Pasteur.

10. El material de plástico desechable ya se suministra estéril y listo para su uso. Por ejemplo, las placas de Petri se introducen en bolsas de plástico selladas y se esterilizan con óxido de etileno o radiaciones. Las soluciones y medios de cultivo líquidos se envasan en matraces o tubos y se esterilizan, generalmente, en autoclave.

11. TÉCNICAS El método más comúnmente empleado para destruir los microorganismos es el calor, entre otras razones porque es el más económico y el más fácil de controlar. El calor utilizado con este fin puede aplicarse en forma de calor seco o de calor húmedo. El calor seco destruye los microorganismos por efectos de oxidación y se requieren temperaturas muy elevadas. El calor húmedo elimina los microorganismos a temperaturas menores, ya que la presencia de agua acelera la rotura de los puentes de hidrógeno responsables de la estructura tridimensional de las proteínas, haciendo que éstas se desnaturalicen y pierdan por tanto su funcionalidad.

12. CALOR SECO La esterilización por calor seco puede hacerse por flameado o mediante estufas de aire caliente. Flameado: Se emplea para esterilizar asas e hilos de siembra, pinzas, espátulas, etc. Consiste en someter directamente a la acción de la llama de un mechero Bunsen los utensilios que se vayan a esterilizar. Este método es rápido y su eficacia es altísima, sin embargo no se puede aplicar a objetos termolábiles.

13. ESTERILIZACIÓN POR AIRE CALIENTE Esterilización por aire caliente: Se lleva a cabo en estufas de aire caliente y consiste en colocar los objetos que se van a esterilizar, debidamente protegidos para que no se contaminen una vez esterilizados, en el interior de una estufa. Este procedimiento se utiliza para esterilizar material de vidrio: pipetas, matraces, tubos, etc. U otros materiales termorresistentes. Las temperaturas a las que se someten estos materiales son muy elevadas (160 - 180ºC durante cerca de 2 horas).

14. CALOR HÚMEDO El calor húmedotambién se utiliza para la destrucción de los microorganismos siendo, mucho más eficaz que el calor seco; con este tratamiento las enzimas se desnaturalizan rápidamente, al igual que las membranas celulares. Además, el vapor de agua, especialmente si se genera a sobrepresión, es un eficaz transmisor de calor al interior de la célula microbiana. Se puede aplicar utilizando varios métodos: ebullición, vapor fluente y vapor saturado a presión: