1 / 11

PNRF-104-AI-1/07

Ochrona przed zwyrodnieniem układu nerwowego: rola peptydów endogennych, L-argininy i kwasów tłuszczowych jako potencjalnych czynników modulujących czynność mitochondriów, zwiększających żywotność mózgu poddanego działaniu bodźców stresowych. PNRF-104-AI-1/07.

eudora
Download Presentation

PNRF-104-AI-1/07

An Image/Link below is provided (as is) to download presentation Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author. Content is provided to you AS IS for your information and personal use only. Download presentation by click this link. While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server. During download, if you can't get a presentation, the file might be deleted by the publisher.

E N D

Presentation Transcript


  1. Ochrona przed zwyrodnieniem układu nerwowego: rola peptydów endogennych, L-argininy i kwasów tłuszczowych jako potencjalnych czynników modulujących czynność mitochondriów, zwiększających żywotność mózgu poddanego działaniu bodźców stresowych. PNRF-104-AI-1/07

  2. Jednostki realizujące projekt: Uniwersytet Jagielloński, Colegium Medicum, Wydział Lekarski Team Leader: Prof. Aldona Dembinska-Kieć School of Pharmacy, University of Oslo Team leader: Prof. Arild C. Rustan Department of Nutrition Institute of Basic Medical Sciences University of Oslo Team leader: Prof. Rune Blomhoff Institute of Medicine, Section of Medical Biochemistry, University of Bergen Team leader: Prof. Rolf K. Berge

  3. Wstęp Choroba Alzheimera jest jedną z najbardziej powszechnych chorób neurodegeneracyjnych, dotykającą starzejące się społeczeństwo. Jest to forma demencji o złożonej etiologii, prowadząca do postępującej utraty zdolności poznawczych oraz umiejętności uczenia się. Jedną z głównych neuropatologicznych cech choroby Alzheimera jest degeneracja mitochondrów i apoptoza komórek na skutek akumulacji białka beta-amyloidu.

  4. Cel projektu Celem projektu jest badanie nowych potencjalnych możliwości terapii i mechanizmów neuroprotekcji, przy użyciu peptydów humaninowych, L-argininy i substratów energetycznych, mających zdolność modulowania i podtrzymywania funkcji mitochondriów.

  5. Przeprowadzenie badań Naukowcy wchodzący w skład konsorcjum badali metaboliczne mechanizmy działania antyapoptotycznego i neuroprotekcyjnego peptydów humaninowych, oraz innych związków bioaktywnych, takich jak L-arginina i kwasy tłuszczowe na modelach komórek (gleju, śródbłonka) narażonych na czynniki prozapalne i proapoptotyczne. Badania były prowadzone również na modelach zwierzęcych, obejmujących myszy reporterowe NF-kappa beta-lucyferaza, oraz myszy transgeniczne o zwiększonej ekspresji TNF-alfa.

  6. Metody badawcze Badania metabolizmu komórkowego: - metabolizm mitochondrialny (substraty: glukoza i kwas palmitynowy) - potencjał błony mitochondrialnej Bioimiger (BD), cytometria - potencjał energetyczny mitochondriów – elektroda tlenowa - generacja ATP w mitochondriach Badania ekspresji genów metodą mikromacierzy: badania przesiewowe na macierzach Affimetrix i Agilent badania wybranego szlaku (apoptozy) na macierzy TLDA (w oparciu o real-time PCR 7900 HT TaqMan Applied Biosystems Badania czynnościowe na zwierzętach

  7. Wyniki Pomiar potencjału błony mitochondrialnej(BD Bioimager 855 microscopy) ■ ß-amyloid istotnie statystycznie obniża  w komórkach LN-18, Daoy oraz w mysich astrocytach C8-D1A ■TNF-αobniża w ludzkich komórkach endotelialnych wyizolowanych z żyły pępowinowej HUVEC ■Peptydy humaniny nie wpływają na toksyczny efekt wywołany ß-amyloidem z wyjątkiem  HNM i 13IleHN10b, które obniżają  we wszystkich analizowanych typach komórek. Pomiar potencjału błony mitochondrialnej (fluocytometr przepływowy BD Canto II) Pomiar funkcji energetycznej mitochondriów(elektroda tlenowrażliwa Oxygraph-2k OROBOROS) ■Wybrane peptydy humaniny, kwasy tłuszczowe oraz L-arginina nie wpływają znacząco na proces oddychania mitochondrialnego w komórkach LN18, Daoy, C8-D1A oraz HUVEC. ■ ß-amyloid obniża generację ATP w kom. LN-18, Daoy oraz w C8-D1A. ■TNF-αnie wplywa na generację ATP w kom. HUVEC. ■ peptydy humaniny nie wykazują protekcyjnego działania w procesie generacji ATP we wszystkich analizowanych liniach komórkowych. ■Zaobserwowano obniżenie generacji ATP po inkubacji z EPA and TTA w kom. HUVEC poddanych działaniuTNF-α L-arginina nie wplywa na generację ATP w analizowanych typach komórek Pomiar generacji ATP(metoda luminescencji z wykorzystaniem kitu: ATP Lite,Parkin Elmer Kit)

  8. Regulacja genów apoptozy na modelach komórkowych

  9. Regulacja genów apoptozy na modelu myszy reporterowych NF-kappa - beta-lucyferaza

  10. Testy czynnościowe

  11. Podsumowanie • Na modelach komórkowych wykazano, że badane peptydy humaninowe oraz inne badane związki bioaktywne (kwasy tłuszczowe) mają znaczenie neuroprotekcyjne uczestnicząc w regulacji nie tylko procesu apoptozy ale również procesu zapalnego. • Wstępna analiza wyników ekspresji genów metodą mikromacierzy, uzyskanych w doświadczeniach na zwierzętach, prowadzonych we współpracy z partnerami z Norwegii wydaje się potwierdzać te wyniki. • W wyniku realizacji projektu opublikowano 4 publikacje, 32 streszczenia na konferencje międzynarodowe. Przygotowywane są kolejne manuskrypty prac do druku.

More Related