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冨永将大・川崎浩平・井山佳美

送受信チーム. 冨永将大・川崎浩平・井山佳美. 目標 : gfp 発現のタイミングをコントロール. 1 時間タイマー. 1 hour. 5 時間タイマー. 4 hours…. 1 hour. Still inactive. active. 細胞間コミュニケーション. シグナル分子の蓄積. クオラムセンシング. クオラムセンシング. Sender cell produce AHL. Receiver cell AHL  gfp expression. pc. luxR. LuxI. pc. luxI. LuxR. AHL. plux.

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冨永将大・川崎浩平・井山佳美

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Presentation Transcript

  1. 送受信チーム 冨永将大・川崎浩平・井山佳美

  2. 目標:gfp発現のタイミングをコントロール 1時間タイマー 1 hour 5時間タイマー 4 hours… 1 hour Still inactive active

  3. 細胞間コミュニケーション シグナル分子の蓄積 クオラムセンシング

  4. クオラムセンシング Sender cell produce AHL Receiver cell AHL gfp expression pc luxR LuxI pc luxI LuxR AHL plux gfp 蓄積

  5. AHLの蓄積 通常AHL通信 LuxI LuxR AHL感受性変更通信 ？ LuxR

  6. AHL 求められること AHLs 感度の異なるAHL受信装置の作成 クロストークの利用 Part:BBa_F2620:Specificity http://partsregistry.org/Part:BBa_F2620:Specificity

  7. Quorum sensing AHL 基本構造 Autoinducer R:Group Autoinducer synthase 由来生物 Recepter Protein V.Fisheri LuxI LuxR (3OC6) P.aeruginosa lasR lasI (3OC12) P.aeruginosa ＋ RhlR RhlI (C3) (C6) R.leguminosarum cinR cinI (3OH14C)

  8. 求められること RhlI RhlI LuxI LasI? CinI? Part:BBa_F2620:Specificity http://partsregistry.org/Part:BBa_F2620:Specificity

  9. シグナル分子(=AHL)の変更 《クロストーク》 Autoinducer synthase LuxR plux gfp LuxI lasI cinI RhlI

  10. タイムディレイテスト 通信条件 • 温度 37℃、30℃ • 大腸菌株 JW1908、XL10GOLD • 菌数比 Receiver / Sender = 1 10 100

  11. タイムディレイテスト(クロストーク) lasI LuxI RhlI gfp LuxR plux 5×108 Cells Receiver Mix(t=0) 蛍光強度測定 37℃ or 30℃ 5×108 Cells ? Senders

  12. タイムディレイテスト(Cross-talk) Receiver-JW1908 Senders-XL10Gold ptet LuxR plux gfp plac LuxI plac lasI plac RhlI

  13. cross-talkの効果は？ XL10GOLD , Receiver ：　Sender= １　：　１ 37℃ 30℃ LuxI LuxI RhlI RhlI LasI LasI LasIのみ、delay発生＋低い

  14. タイムディレイテスト(TAG効果) Senders-XL10Gold Receiver-JW1908 plac LuxI ptet LuxR plux gfp plac LVA LuxI plac RhlI plac LVA RhlI

  15. LVA-Tagの効果は？ XL10GOLD , Receiver : Sender =1　：　1 (30℃) LuxI RhlI Tagなし Tagなし Tagつき Tagつき Tagの効果：最大値の低下

  16. LVA-Tagの効果は？ XL10GOLD , Receiver ：　Sender = １０　：　１（3０℃ ） LuxI RhlI Tagなし Tagなし Tagつき Tagつき Senderを少なくする→Tagの効果UP＋delay発生 AHL合成が少ないとき効果あり

  17. タイムディレイテスト(温度依存性) lasI LuxI RhlI gfp LuxR plux Receiver Mix(t=0) 蛍光強度測定 37℃ or 30℃ ? Senders

  18. 温度の影響は？ XL10GOLD , Receiver ：　Sender= 1:1 37℃ 30℃ LuxI LuxI RhlI RhlI LasI LasI LasI：30℃の方が強い

  19. タイムディレイテスト(株依存性) Receiver-JW1908 Senders-JW1908 Senders-XL10Gold ptet LuxR plux gfp plac plac LuxI LuxI plac plac lasI lasI plac plac RhlI RhlI

  20. 株の影響は？ Receiver ：　Sender = 1　：　1 （37℃） JW1908 XL10GOLD RhlI RhlI LuxI LuxI LasI LasI

  21. タイムディレイテスト(菌数比の影響) lasI LuxI RhlI gfp LuxR plux Receiver Mix(t=0) 蛍光強度測定 30℃ ? Senders Receiver / Sender (R/S) = 1 =10 =100

  22. 菌数比の影響は？ 30℃、JW1908 RhlI LasI S/R=10 S/R=1 S/R=10 S/R=1 S/R=100 S/R=100

  23. 実験の流れ テスト準備（8/17~） バラバラなパーツの組み直し CrrosTalkテスト（9/2~） Lux Las Rhl Cin Lux Las Rhl Cin タイムディレイテスト（液体培地）(9/8~9/25） Today タイムディレイテスト(固体培地)（9/26~）

  24. タイムディレイテスト（固体培地spot） ptet LuxR plux gfp XL10GOLD , Receiver / Sender = 1, 37℃ LasI LuxI RhlI 2h後 5h後 8h後 結果予想図 →輪の広がる速度に差が出る Receiver-JW1908

  25. New Parts plac plac plac plac plac RhlI cinI luxI RhlI luxI plac lasI BBa_K084008 BBa_K0840012 BBa_K084009 BBa_K084014 LVA LVA BBa_K084010 BBa_K084007 LVA

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