E N D
1. Ocní Tkánová BankaVFN a 1. LF UK
3. OTB: získávání, príprava, uchovávání a distribuce tkání pro transplantace v ocním lékarství
4. IDEÁLNÍ ROHOVKA PRO TRANSPLANTACI nesmí být zdrojem kontaminace (ba, viry, priony)
zdravá, bez mechanických, degenerativních, ci jiných poškození
kvalita endotelu - pocet bunek (min. 2000 bunek na mm2)
refrakcne vhodná
bez antigen-prezentujících bunek
HLA typizovaná
neztluštelá (bez edému)
7. 2. MIKROBIOLOGICKÉ VYŠETRENÍ
8. 3. REGISTRACE TKÁNE evidence
archivace
9. •Makroskopické hodnocení•Biomikroskopie
10. 5. DEKONTAMINACE oplach ultracisou vodou
PVP-jód
thiosíran Na+
PBS (fosfátový pufr)
11. 7. MIKROSKOPICKÉ HODNOCENÍ trypanová modr (0.15%, 90s),
sacharóza – hypotonický roztok (0.9 and 1.8%, 2 min),
fosfátový pufr
12. Rohovka – anatomie, funkce ENDOTEL
1 bunecná vrstva (bariéra)
6000bek/mm2 pri narození ?3500/5l c postmitotický (G1) ?0.6%?/rok ? (2300/80l)
sekrece kolagenu
Na/K ATPáza
permeabilita, živiny pro stro , ZO
STROMA
transparence (paralel. usporádání vláken kolagenu), KC-MFB,FB + DC
13. Hodnocení endotelu
14. 9.TRANSPLANTACE diagnózy:
keratokonus
perforace roh. vredu
bulózní keratopatie
dystrofie (Fuchsova, makulární, PPCD)
leukom
rekeratoplastiky
15. 9.TRANSPLANTACE rizika
primární selhání
infekce
obnovení choroby
rejekcní reakce
rejekce
pomalá dekompenzace
keratolýza
16. TSE, PRIONOVÁ ONEMOCNENÍ
17. Lidský amnion,HAM (human amnion membrane) vlastnosti
podpora epitelizace
?migrace, ?adheze,
diferenciace, ? apoptózy
antiinfekcní (inh. proteáz, MMP, cystatin E)
inhibice fibrózy
anatomická bariéra
inhibice vaskularizace
cytoprotektivní (hsp)
použití
defekty epitelu povrchu oka
(Stevensuv-Johnsonuv sy, bulózní kertatopatie, nekrotizující keratitidy, OCP, poleptání, ulcerace rohovky....)
rekonstrukce povrchu oka
lokální terapie
18. PreparaceHAM
19. Laborator Ocní kliniky
20. ZPRACOVÁNÍ A UCHOVÁVÁNÍ TKÁNÍ (rohovka, prstenec, spojivka, epiretinální membrána, komorová voda) zamrazování (-70°C)
prímé zamrazování (KV) ? stanovení proteinu
v zamrazovacím médiu ? krájení ? vzorky IHC
zalévání do parafínu ? krájení ? vzorky IHC
zalévání do glutaraldehydu ? vzorky pro ElMi
21. IMUNOHISTOCHEMIE
22. IMUNOHISTOCHEMIE
23. OTISKOVÁ CYTOLOGIE SPOJIVKY (ROHOVKY) - jednoduchá, neinvazivní, netraumatizující metoda pro vyšetrení povrchové vrstvy tkáne prilnavost povrchové vrstvy bunek na vhodný materiál
zpracování vzorku
(fixace, barvení)
hodnocení
24.
25. Selhání limbálních kmenových bunek, LSCD
26. vede k prerustání spojivkového epitelu pres rohovku (nahrazení rohovkového epitelu spojivkovým) ? povrchová vaskularizace rohovky, destrukce bazální membrány rohovky, chron. zánetlivá infiltrace