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ガレクチン ‐ ３のノックダウンによる ラット神経幹細胞の分化抑制

ガレクチン ‐ ３のノックダウンによる ラット神経幹細胞の分化抑制. 物質・環境工学科 　　　　　　　　　　　岩館研究室　 E107603 　　大住　博. 神経細胞. グリア細胞. 神経幹細胞 (Neural Stem Cell) 神経系を構成する神経細胞やグリア細胞への分化能をもち、自己増幅できる細胞。. 自己複製. 神経幹細胞. 赤 ： βⅢ 陽性細胞 ( 神経細胞 ) 緑 ： GFAP 陽性細胞 ( グリア細胞 ) 青 ： DAPI( 核 ). 赤 ： nestin 陽性細胞 ( 神経幹細胞 ) 青 ： DAPI （核）. 神経幹細胞における分化過程.

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ガレクチン ‐ ３のノックダウンによる ラット神経幹細胞の分化抑制

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  1. ガレクチン‐３のノックダウンによるラット神経幹細胞の分化抑制ガレクチン‐３のノックダウンによるラット神経幹細胞の分化抑制 物質・環境工学科 　　　　　　　　　　　岩館研究室　E107603　　大住　博

  2. 神経細胞 グリア細胞 神経幹細胞(Neural Stem Cell) 神経系を構成する神経細胞やグリア細胞への分化能をもち、自己増幅できる細胞。 自己複製 神経幹細胞 赤：βⅢ陽性細胞(神経細胞)緑：GFAP陽性細胞(グリア細胞)青：DAPI(核) 赤：nestin陽性細胞(神経幹細胞)青：DAPI（核） 神経幹細胞における分化過程

  3. control 100 GFAP 陽性細胞 （グリア細胞） βIII 陽性細胞 80 （神経細胞） 60 分化率（％） 40 20 0 Control +Lactose +Lactose 青：DAPI　（核） 赤：βⅢ 陽性細胞　（神経細胞） 緑：GFAP 陽性細胞　（グリア細胞） 神経幹細胞分化時におけるLactoseの影響

  4. ：ガレクチン ：タンパク質 ：糖鎖 ：βガラクトシド マトリックス 細胞外 細胞 ガレクチンの構造 ガレクチン ガレクチンの機能

  5. mRNA siRNA (small interfering RNA) RISC(RNA-induced silencing complex) 細胞 核 センス鎖 アンチセンス鎖 RNA干渉の原理

  6. mRNA Lipofectamine2000 siRNA 二本鎖RNAとLipofectamine2000の複合体 核 RISC 細胞質 細胞膜 siRNAの導入方法

  7. 神経幹細胞 B-27 supplementを含むNeuroBasal培養液 2×105個 1×106個 複合体 siRNA ＋ Lipofectamine 2000 RNA抽出 逆転写 LAMP 法 免疫染色 siＲＮＡの導入効率の実験方法

  8. 35% 11% LAMP法による発現結果

  9. Control siRNA G3-4 青：DAPI　（核） 赤：βⅢ陽性細胞　（神経細胞） 緑：GFAP陽性細胞　（グリア細胞） 免疫染色

  10. 発現性を 抑えられた NSCをグリア細胞に特異的に分化させる 他のガレクチン もしくは2つ以上のガレクチン • RNA干渉を行った神経幹細胞はLAMP法により発現性を抑えられたことが確認できた。 • NSCをグリア細胞に特異的に分化させるという新しい現象が得られ、中枢神経系への分化過程におけるガレクチン‐3の機能解明に重要な情報が得られたと思われる。 • 神経細胞に特異的に分化させるためには他のガレクチンもしくは2つ以上のガレクチンが関係していると思われる。 結論

  11. 神経細胞 グリア細胞 神経幹細胞 ガレクチンファミリー

  12. control + 0.1M lactose 青：DAPI　（核） 赤：βⅢ陽性細胞　（神経細胞） 緑：GFAP陽性細胞　（グリア細胞） 神経幹細胞分化過程におけるlactoseの影響 (7day)

  13. ① ②　 　　 　③　　　 　④ ①分子量マーカー ②actin ③lipofectamine only ④lipofectamine +100nMsiRNAG3-4 bp bp 1353 1078 872 603 418 434 310 281 234 194 siRNAの確認結果

  14. RNAiの利点と欠点

  15. Lipofectamine+scramble siRNA lipofectamine+siRNA G3-4 赤:nestin（神経幹細胞） 緑：GFAP（グリア細胞） 青：DAPI（核）　　 赤：βⅢ（神経細胞） 緑：GFAP（グリア細胞） 青：DAPI（核） 免疫染色

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