实验 10 氨基酸的薄层层析

1. 实验10 氨基酸的薄层层析

2. 一、目的与要求 1.熟悉用层析技术分离不同物质的原理 2.掌握薄层层析的基本操作方法

3. 二、实验原理 薄层层析（thin layer chromatography, TLC）是将吸附剂（或称固相支持物,如硅胶G、硅藻土、氧化铝、氧化镁、纤维素粉等）均匀地铺在玻璃板上使其成薄层。将待分析的样品点加到薄层板的一端，然后把该端浸入适宜的展层剂（如苯酚-水、正丁醇-冰醋酸-水等）在密闭的层析缸中展层。

4. 由于各种氨基酸结构和性质的不同，其在吸附剂表面的吸附能力各异，吸附力大的易被吸附剂吸附，而较难被展层剂所解吸；吸附力小的则易被展层剂携带至较远的距离。这样，氨基酸在吸附剂和展层剂之间反复多次的被吸附与解吸附，使不同的氨基酸得以分离，并通过茚三酮反应显色作鉴别。由于各种氨基酸结构和性质的不同，其在吸附剂表面的吸附能力各异，吸附力大的易被吸附剂吸附，而较难被展层剂所解吸；吸附力小的则易被展层剂携带至较远的距离。这样，氨基酸在吸附剂和展层剂之间反复多次的被吸附与解吸附，使不同的氨基酸得以分离，并通过茚三酮反应显色作鉴别。

5. 三、操作部分 • 1. 点样 • 取内径约0.5mm管口平整的毛细玻管3支，分别吸取甘氨酸、亮氨酸及混合氨基酸液（含甘氨酸、赖氨酸、亮氨酸），在距薄层板底端2.5cm处、间距1cm宽的位置上轻触点样，点样处干后在原点样处重复点加1～2次。

6. 2. 展层 • 在层析缸中加入展层剂约1.5cm深，加盖平衡30min。将薄层板点样端浸入展层剂中，加盖密闭展层。当展层剂前沿到达薄层板的2/3高度时，取出薄层板，在玻板背面划下展层剂前沿位置，用电吹风（热风）将薄层板吹干（最好对玻板背面吹）。 • 3. 显色 • 用喉头喷雾器向薄层板上均匀喷洒0.5% 茚三酮丙酮溶液，热风吹干至各层析斑点显现。

7. 四、结果与计算 展层剂前沿 亮氨酸 甘氨酸 展层方向 赖氨酸 原点 氨基酸薄层层析示意图

8. Rf值=

9. 五、注意事项 • 制备的薄层板应厚薄均匀，表面光滑无气泡； • 点样各原点分布均匀，各点直径不超过2mm； • 薄层板置层析缸中时各点样原点切勿浸入展层剂中。