1 / 22

Fluorecenčná mikroskopia

Fluorecenčná mikroskopia. Mikroskop, princíp metódy, konjugáty, charakteristika,.

hadar
Download Presentation

Fluorecenčná mikroskopia

An Image/Link below is provided (as is) to download presentation Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author. Content is provided to you AS IS for your information and personal use only. Download presentation by click this link. While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server. During download, if you can't get a presentation, the file might be deleted by the publisher.

E N D

Presentation Transcript

  1. Fluorecenčná mikroskopia Mikroskop, princíp metódy, konjugáty, charakteristika, Ústav patológie

  2. Fluorescenčné techniky (IF) patria do skupiny imunohistochemických metód, ktoré umožňujú in situ identifikáciu antigénnych častí buniek alebo tkanivových štruktúr, vrátane sekréčnych produktov na základe špecifickej antigén – proti- látkovej interakcie. Ústav patológie

  3. Princíp metódy Princípom IF je spojenie látky, ktorá je schopná prívodom energie emitovať žiarenie s molekulou imunoglobulínu. Ústav patológie

  4. Luminiscencia Luminiscencia – vzniká, keď látka absorbuje žiarenie určitej vlnovej dĺžky a emituje žiarenie inej vlnovej dĺžky. Luminiscencia sa môže prejaviť ako fluorescencia, ak vyžarovanie pretrváva aj po prerušení excitácie. Ústav patológie

  5. Primárna fluorescencia – je jav, keď je látka schopná emitovať žiarenie bez prítomnosti fluorochrómu. Fluorochrómy – sú látky, ktoré sú sú po excitácii schopné emitovať žiarenie inej vlnovej dĺžky. Ústav patológie

  6. K látkam s najväčšou intenzitou fluorescen- cie patria fluoresceíny a rodamíny. Ideálna IF látka silno absorbuje svetlo v UV alebo modrej oblasti a musí mať schopnosť premeniť prevažnú časť absorbovaných lúčov na fluorescenciu v žlto-zelenej oblasti spektra, ktorá je pre oko najcitlivejšia. Ústav patológie

  7. UV Excitačné svetlo Emitované svetlo Ústav patológie

  8. Ústav patológie

  9. FITC- fluorescein isothiocyanat 495/520 TRITC – tetramethylrhodamine 570/590 DAPI 359/460 PJ - propidium jodid 536/516 Ústav patológie

  10. Konjugáty sú to proteíny s naviazaným fluorochrómom. FITC sa na proteín viaže kovalentnou väzbou s aminokyselinou lyzín pomocou thiokarbamidovej skupiny Ústav patológie

  11. OH O O FITC O C H N O lyzínový zvyšok v molekule protilátky C O H H - N - C - N - (CH ) - C - H 2 4 S N H tiokarbamidová skupina Ústav patológie

  12. F:P pomer • Ideálny pomer fluoresceínu a proteínu je 1 : 2. Vyšší pomer konjugátu môže spôsobiť nešpecifickú reakciu z dôvodu prítomnosti voľných záporne nabitých častíc fluoresceínu reagujúcich s kladne nabitým tkanivom. Ústav patológie

  13. Epi-fluorescenčný MIKROSKOP Epi – fluorescenčný svetlo dopadá na preparát Zdroj 50 – 100W ortuťová výbojka Dichroické zrkadlo druh interferenčného filtra, v postavení 45° 1áme UV lúče a prepúšťa emitované svetlo Fluoritové objektívy pracujú zároveň ako kondenzor, majú veľkú numerickú apertúru a výbornú priepustnosť pre UV svetlo ________________________________________________________ DABCO potláča zníženie intenzity fluorescencie Ústav patológie

  14. Princíp fluorescenčnej mikroskopie okulár 525 nm barierový filter 370-495 nm 490 nm dichroické zrkadlo excitačný filter zdroj objektív substrát Ústav patológie

  15. Metódy Priama Neriama Komplementová Ústav patológie

  16. Priama metóda Ústav patológie

  17. Nepriama metóda . Ústav patológie

  18. Komplementová Ústav patológie

  19. Ústav patológie

  20. Priama metóda, chromogén/marker FITC Ústav patológie

  21. Neriama metóda, chromogén/marker FITC (ASMA protilátky) Ústav patológie

  22. Neriama metóda, chromogén/marker FITC (ANA protilátky) Ústav patológie

More Related