1 / 17

Инициация трансляции

Инициация трансляции. Инициация трансляции. Стартовый кодон fMet. SD -последовательность Шайна-Далгарно Shine-Dalgarno. Ген. мРНК. AGGAGG 4-7 нп AUG. 3 ’. Сайт связывания рибосомы. Конструирование экспрессионного вектора. Р. SD ATG. Ap r. Ген. ATG- вектор. Пташне, США. Ori.

hamlin
Download Presentation

Инициация трансляции

An Image/Link below is provided (as is) to download presentation Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author. Content is provided to you AS IS for your information and personal use only. Download presentation by click this link. While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server. During download, if you can't get a presentation, the file might be deleted by the publisher.

E N D

Presentation Transcript

  1. Инициация трансляции

  2. Инициация трансляции Стартовый кодон fMet SD-последовательность Шайна-Далгарно Shine-Dalgarno Ген мРНК AGGAGG 4-7 нпAUG 3’ Сайт связывания рибосомы

  3. Конструирование экспрессионного вектора Р SD ATG Apr Ген ATG-вектор Пташне, США Ori

  4. Использование BamHI сайта кодирующая область SD----ATGGATCC ATG TACCTAG ATG TAC S1 нуклеаза кодирующая часть кодирующая часть + SD---CATATG --CATATG SD----CATATG Стыковка кодирующей последовательности гена с ATG-кодоном Использование NdeI сайта

  5. Гибридные сайты связывания рибосом Р ATG-- SD Apr tt Ori

  6. Р SD ATG Apr tt ATG-вектор Ori Что плохо ?

  7. Р Ген SD ATG tt

  8. Р AUG Ген SD ATG AUG SD SD Вторичная структура РНК в области сайта связывания рибосомы существенна для инициации трансляции! Неэффективная инициация Эффективная инициация

  9. Р Маркер Ген SD ATG Возможные способы преодоления Р Ген SD ATG Гибридный, легко тестируемый продукт Вектора для статистического конструирования Фирс, Бельгия. Что плохо ?

  10. Другая возможность Вектора для конструирования генов гибридных белков Р Ген SD ATG Apr tt Ori Что плохо ?

  11. Целевой продукт Целевой продукт нечто нечто N N С С Образуется химерный белок Это может быть «якорем» Как расщепить? BrCN Met Сайт распознавания для протеиназы Asp-Asp-Asp-Asp-Lys Энтеропептидаза Что плохо?

  12. ИНТЕИНЫ What is Protein Splicing? Protein splicing is defined as the excision of an intervening protein sequence (the INTEIN) from a protein precursor and the concomitant ligation of the flanking protein fragments (the EXTEINS) to form a mature extein host protein and the free intein (Perler 1994). Protein splicing results in a native peptide bond between the ligated exteins (Cooper 1993). Extein ligation differentiates protein splicing from other forms of autoproteolysis and conserved intein motifs differentiate inteins from other types of in-frame sequences present in one homolog and absent in another homolog.

  13. IMPACT™ VECTORS Intein Mediated Purification with an Affinity Chitin-binding Tag

  14. pTYB 11

  15. Р Ген SD1----ATG---------SD2-------TGATG tt Конструирование гибридных оперонов с частично перекрывающимися генами Stop trpE Трансляционное сопряжение trpE-trpD CGAACAGGAGACTTTCTGATGTGT SD trpD Start trpD TGATG Перекрывание кодонов Abr Ori

More Related