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空军军医大学基础医学院 2018 年 11 月 24 日

2018 年全国医科院校研究生院联盟博士论坛. CRISPR/Cas9 基因编辑系统变形记 -- 表达载体花 式设计和 改建的技巧分享. 杨国栋. 空军军医大学基础医学院 2018 年 11 月 24 日. 特异性，是生命科学最基本的一条规律，我们始终在努力发现并运用。 ---XXXXXX. 基因研究的主要内容. 敲除. 表达调控. 编辑. CRISPR/Cas9 简介. Synthetic Biology 简介. Designing and building novel biological systems.

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空军军医大学基础医学院 2018 年 11 月 24 日

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Presentation Transcript

  1. 2018年全国医科院校研究生院联盟博士论坛 CRISPR/Cas9基因编辑系统变形记--表达载体花式设计和改建的技巧分享 杨国栋 空军军医大学基础医学院 2018年11月24日

  2. 特异性，是生命科学最基本的一条规律，我们始终在努力发现并运用。特异性，是生命科学最基本的一条规律，我们始终在努力发现并运用。 ---XXXXXX

  3. 基因研究的主要内容 敲除 表达调控 编辑

  4. CRISPR/Cas9简介

  5. Synthetic Biology简介 Designing and building novel biological systems

  6. CRISPR/Cas9 system in Zhang Lab: CRISPR v2 Zhang's lab is focused on using synthetic biology to develop technologies for genome and epigenome engineering to study neurobiology.

  7. CRISPR/Cas9 system in Zhang Lab: CRISPR v2 tracRNA:crRNA to sgRNA

  8. CRISPR/Cas9 system in Zhang Lab: CRISPR v2

  9. CRISPR/Cas9 system in Zhang Lab: CRISPR v2 5’…（N5）GAGACG…3’ 3’…（N1）CTCTGC… 5’ 5’…CGTCTC（N1）…3’ 3’…GCAGAG（N5）… 5’ BsmB1: 非回文，有方向 剪切位点不在核心区 两个BsmB1位点可以切出不同尾 两个反方向的BsmB1位点可以将酶切位点切除

  10. Take-home tips (1) • Chimeric sgRNA • PAM • Filler • Enzyme (BsmB1) • 2A peptide

  11. CRISPR/Cas9 system in Zhang Lab: SAM系统 Synergistic Activation Mediators

  12. Take-home tips (2) • RNA aptamer fusion • RNA binding protein: RNA • dCas9 • Selection markers

  13. Modified CRISPR/Cas9 system in our lab EF1α NLS NLS dCas9 dCas9-NLS EF1α EZH2 PCP PCP EZH2 PCP-EZH2 U6 sgRNA sgRNA sgRNA-PP7

  14. Modified CRISPR/Cas9 system in our lab

  15. Take-home tips (3) Synthetic Biology Envision (设想) + Elements (素材) + Engineering (组装) 仿生 Bio-inspired …… 引进 改进 创建 连接 重组 合成 Powerful tools

  16. Acknowledgements Zhang Lab NSFC Addgene Lab members, especially Yumei Gong& XutaoChen

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