جزازبندگی پیش یزدان مجوی مزن دست درنیک وبد جز بدوی

1. جزازبندگی پیش یزدان مجوی مزن دست درنیک وبد جز بدوی 1

2. هیبریداسیون سوماتیکی درونی انبه از طریق امتزاج پروتوپلاست تهیه کننده: مریم تهرانچی استاد راهنما: 2

3. مقدمه • درخت انبه بومی مناطق هند و برمه ،ویکی از مهم ترین محصولات درختی در مناطق استوایی و بدون یخبندان میباشد • ازمهمترین مشکلات پیش روی تولیدات این درخت ،کمبودپایه های خوب،ریزش زیادمیوه،طولانی بودن دوره نونهالی،بالا بودن هتروزیگوتی و تولید کم بذر میباشد. • امتزاج هیبریدی پروتوپلاست شرایطی فراهم میکند که ازطریق امتزاج سیتوپلاسمی و ژنتیکی،مشکلات اصلاح گیاهان را برطرف کرد. 3

4. هدف این مقاله توضیح روش های PEM (نوعی روش امتزاج پروتوپلاست)و پروتوپلاست برگی درهیبدریداسیون امتزاج سوماتیکی صرف نظراز هرگونه اهداف اصلاحی ژنتیکی برای 3 ترکیب مادری (+Tommy Atkins’ ‘Kensington Pride’,) و (‘Haden ‘+ ‘Kensington Pride) و (Keitt+Kensington pride )میباشد. 4

5. مواد و روش ها • ابندا برگ های 2 هفته ای رقم ‘Haden ‘+ ‘Kensington Pride به وسیله ی تیغ به صورت نوارهای باریک(0.2 تا0.5 mm) بریده،ضدعفونی ،کوبیده شده است. • برای بدست آوردن PEM های(توده های جنینی)باکیفیت بدون و لکه های سیاه،محیط کشت به صورت پی درپی به محیط های فرعی تازه ودر کشت فرعی آخربه سوسپانسیون بدون 2-4-D منتقل و کشت گردید. جداسازی پروتوپلاست 5

6. سپس محیط سوسپانسیون رااز شبکه های 250 میکرومتری عبورداده و با 50g (واحد سانتریفیوژ)در دقیقه سانتریفیوز کرده تا توده های سلولی را به شکل PEM دراورد. • سپس محلول هضم کننده دیواره سلول باPH 5.8 حاوی مانیتول،سلولاز1/5درصد، همی سلولز 1درصد ، PEM0.75 درصد و ماکروزیم 1.5 درصد با فیلتر استرلیزه 0.22 میکرومترفیلتر آماده و اضافه گردید. 6

7. در ادامه امتزاج پروتوپلاست برای هر3 رقم انجام شد و به طور خلاصه سوسپانسیون پروتوپلاست مذکور،تدریجی باسوسپانسیون PEM با نسبت 2به 1 ترکیب شد.سپس ماده PEG40 درصد تدریجا اضافه شده و در دمای اتاق به مدت 20 دقیقه آنکوبات شد. 7

8. بعد از امتزاج ،پروتوپلاست ها داخل آلژینات کلسیم در ظروف IPD 2.5*10به توان 4 ml جایگذاری شده سپس درمحیط کشت مایع حاوی 1 میلی گرم برلیتر 2-4-D و 3.5 میلی گرم کینتین قرارداده شد. • محیط کشت شامل محیط های MS و B5 به اضافه برخی مواد آلی بود 8

9. نتایج • بازده ی عملی پروتوپلاست از برگ های ارقام Haden’, ‘Tommy Atkins’ and ‘Keitt’ و PEM خورشی رقم Kensington Pride’ حاصل شد. • تا 18 درصد امتزاج 2تایی پروتوپلاست ها طی فرایند مشاهد شد • بالاترین مقدار تولید PEM در امتزاج ارقام ‘Haden’ + ‘Kensington Pride 4 بود • از50 گیاهچه ی ریشه دارشده فقط 3 جوانه درخاک توانستند جوانه انتهایی تولید کنند. 9

10. بیشترین مقادیر ریز کالوس های حاصل در محیط های کشت فرعی برای رقم Tommy Atkins’ +‘Kensington Pride’, وکمترین آن برای رقم شماره Haden ‘+ ‘Kensington Pride بود. • ازبین تمامی PEM انتخاب شده در2 محیط کشت متوالی جامد،فقط 242 عدد ازانها قادر به تکثیر بودندکه منجربه • جنین زایی،بلوغ جنین شدند • جوانه زنی آنها در حالت این • ویترو در مدت 3 ماه بود. 10

11. 11

12. بحث • دراین تحقیق ایجادهیبرید های سوماتیکی درونی انبه در فرم گیاهچه های این ویترو محقق شد. • اکثرگیاهان هیبریدی از طریق روش امتزاج پروتوپلاست ایجاد شد. • نسبت به دیگرتحقیقات که موفقیتی 5تا10 درصدی داشت این تحقیق موفقیت 81 درصدی داشت که رضایت بخش بود. • علارقم مقداربیشتر پروتوپلاست برگی نسبت به PEM ،مقدارکمتری از میکروکلنی های برگی تشکیل شد که به خاطر توانایی بیشترPEM در تقسیم سلولی است • پروتوپلاست معمولا ازروش های الکتریکی یا PEG مزدوج می یابد.که روش الکتریکی درباز زایی گیاه موثر بوده و روش PEG علارقم سمیت سلولی وازبین بردن پروتوپلاست طی مرحله ی شستن ،در فرایند امتزاج بسیار موثر تر بود. 12

13. چکیده • امتزاج پروتوپلاستیک در سطح ارقام انجام شد.پروتوپلاست جدا شده ی آنزیمی از برگ رقم گلخانه ای Tommy Atkins’, ‘Keitt’ and ‘Haden و توده ی پیش جنینی ‘Kensington استفاده شد. • پروتوپلاست ها مزدوج شده در آلژینات کلسیم جاگذاری شده و در مایع محیط کشت قرار داده شد. • بعداز 4 هفته دانه های آلژیناتی دیپلریمریزه شده و میکروکلنی های PEM را آزاد میکند. • بعداز2 محیط کشت متوالی توده های دارای رشد سریع PEM جدا شده و برای آنالیز PEMاستفاده شدند. 13

14. منابع 15

15. با سپاس و تشکر ویژه از شما 16