230 likes | 333 Views
Arabidopsis thaliana tip120/cand1 T-DNS inszerciós mutáns jellemzése. A TIP120 fehérje szerepe a transzkripcióban. A fehérjeszintézis fő lépései. DNS. Transzkripció. RNS. Transzláció. Fehérje. Az eukarióta gének transzkripciója. Három fő lépés: iniciáció elongáció termináció.
E N D
Arabidopsis thaliana tip120/cand1 T-DNS inszerciós mutáns jellemzése
A fehérjeszintézis fő lépései DNS Transzkripció RNS Transzláció Fehérje
Az eukarióta gének transzkripciója Három fő lépés: • iniciáció • elongáció • termináció
INICIÁCIÓ • A transzkripció megindításához szükséges fehérjefaktorok egy komplexet hoznak létre transzkripciós iniciációs komplex • A komplex kapcsolatba lép a gén promóter régiójával, ezáltal lehetővé teszi az RNS szintézist
Hat általános fehérjefaktor vesz részt a transzkripciós iniciációban: • TFIID • TFIIA • TFIIB • TFIIE • TFIIF • TFIIH
Transzkripciós iniciációs komplex Polimeráz II TFIIF TFIID TFIIB TFIIA TATA-box
A TIP120 fehérje • TBP-vel kölcsönható faktor • 1230 aminosavból álló polipeptidlánc • A polimeráz II és a TFIID TBP alegységét köti össze
RNS-polimeráz II TIP120 TBP
Arabidopsis tip120 gén • a gén expressziója igen alacsony • elsősorban osztódó szövetekben aktív
Az ubiquitin • erősen konzervált • 76 aminosavból áll • globurális fehérje Az ubiquitin számos sejtfolyamat,pl. endo-citózis,transzkripció, DNS hibajavítás előfeltétele.
E3 E2 E1 ubiquitin célfehérje
SCF-komplex Négy alegység: • Skp1 • Cullin/Cdc53 • F-boksz fehérje ! • Rbx1/Hrt1/Roc1
CUL1 • Az SCF-komplex összeszerelődését szabályozza • Nagy része a TIP120-szal alkot komplexet TIP120 a fő cullin kötő fehérje
CAND1 Cullin-Associated Nedd8-Dissociated protein1 TIP120=CAND1
A TIP120/CAND1 fehérje tehát részt vesz -a transzkripció iniciációjában -a fehérjedegradáció szabályozásában
Mutáns növények fenotípusának jellemzése • Törpe növés • Kisebb virág, kései virágzás • Redukált szaporítóképesség • Gyökérnövekedés intenzitása a normálisnál kisebb
A PCR reakció stratégiája LB21 T-DNS 5’ H911A H911B 3’
H911A+H911B primerekkel végzett reakció eredménye H911B+LB21 primerekkel végzett reakció eredménye col dw het
Összefoglalás • Törpenövés, redukált szaporítóképesség • T-DNS inszerció tip120/cand1 génben • Gyökérnövekedés kisebb • Homozigóta inszerció törpe fenotípus