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动物免疫和多克隆抗体的制备

动物免疫和多克隆抗体的制备. 多克隆抗体 (polyclonal antibody,pcAb) ： 天然抗原刺激多种 B 淋巴细胞克隆产生的多种抗体的混合物. 多克隆抗体的产生示意图. 多克隆抗体的制备. 将制备好的免疫原按照一定的免疫程序接种给所选择的动物，该动物在含有多种抗原表位的抗原刺激下，体内多个 B 细胞克隆被激活并产生针对某一抗原多种不同表位的抗体，其混合物为多克隆抗体. 一、免疫动物的选择. 抗原来源与动物种属的关系 种属差异越远，免疫原性越强 动物个体的选择 适龄、健康、体重符合要求 抗原的性质. 多克隆抗体制备的步骤. 抗原制备. 免疫动物.

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动物免疫和多克隆抗体的制备

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Presentation Transcript

  1. 动物免疫和多克隆抗体的制备

  2. 多克隆抗体(polyclonal antibody,pcAb)：天然抗原刺激多种B淋巴细胞克隆产生的多种抗体的混合物 多克隆抗体的产生示意图

  3. 多克隆抗体的制备 将制备好的免疫原按照一定的免疫程序接种给所选择的动物，该动物在含有多种抗原表位的抗原刺激下，体内多个B细胞克隆被激活并产生针对某一抗原多种不同表位的抗体，其混合物为多克隆抗体

  4. 一、免疫动物的选择 抗原来源与动物种属的关系 种属差异越远，免疫原性越强 动物个体的选择 适龄、健康、体重符合要求 抗原的性质

  5. 多克隆抗体制备的步骤 抗原制备 免疫动物 采血 收集血清

  6. 免疫方法 常用注射方法 • 皮下注射 注射到皮下组织内 • 皮内注射 注入表皮与真皮之间 • 足底注射 • 肌肉注射 • 静脉注射 • 腹腔注射

  7. 单克隆抗体 • 单克隆抗体是指由一个B细胞分化增殖的子代细胞（浆细胞）产生的针对单一抗原决定簇的抗体 • 这种抗体的重链、轻链及其V区独特型的特异型性、亲和力、生物学性状及分子结构均完全相同

  8. 单抗与多抗

  9. 二、免疫程序 免疫原的剂量 中间剂量范围内，免疫原剂量增加可获得高效价抗体 免疫间隔时间 第一次和第二次间隔两周左右，二次免疫后2周左右采血，检测抗体水平 免疫途径 皮内、皮下、肌肉、静脉、腹腔、淋巴结

  10. 抗体的鉴定和保存

  11. 抗体的保存 2℃～8℃保存：短期保存 冰冻保存：保存1-5年 真空干燥保存：保存5～10年

  12. 目的 1、掌握免疫原的制备方法 2、掌握家兔背部皮下多点注身免 疫的方法

  13. 实验材料 新西兰大白兔 ISA206佐剂 抗原 注射器、毛剪等

  14. 佐剂的作用方法 • 形成抗原贮存库，使抗原缓慢释放，延长抗原在局部组织的滞留时间，较长时间使抗原与免疫细胞接触并激发对抗原的应答 • 增加抗原的表面积，增高抗原的免疫原性，辅助抗原暴露并将能刺激特异性免疫应答的抗原表位递呈给免疫细胞 • 促进局部的炎性反应，增强吞噬细胞的活性，促进免疫细胞的增殖与分化，诱导细胞因子的分泌

  15. 油水乳剂 水包油乳剂流动性高，有良好的相容性，可诱导强而短期的免疫反应

  16. 油包水乳化剂能诱导强而长期的免疫，免疫过程只需要一次注射即可维持整个生长期的保护，但有时能引起局部反应。油包水乳化剂能诱导强而长期的免疫，免疫过程只需要一次注射即可维持整个生长期的保护，但有时能引起局部反应。

  17. 水包油包水乳化剂粘度低，能提高短期和长期的免疫反应，外部水相中的抗原就象水制剂一样可立即作用于免疫系统，而内部水相的抗原就象在油包水乳剂中一样缓慢释放。水包油包水乳化剂粘度低，能提高短期和长期的免疫反应，外部水相中的抗原就象水制剂一样可立即作用于免疫系统，而内部水相的抗原就象在油包水乳剂中一样缓慢释放。

  18. 弗氏佐剂 • 弗氏完全佐剂： 矿物油（液体石蜡）+乳化剂（羊毛脂）+灭活的结核分枝杆菌或卡介苗 • 弗氏不完全佐剂： 不含结核杆菌

  19. 步 骤 1、培养细菌，甲醛0.8%灭活，37℃，24h 2、灭活菌经PBS洗涤两遍（4 ℃ ，5000rpm，10min），加等量PBS重悬 3、加佐剂充分乳化：混合前将抗原与佐剂预热致相同的温度，注射器来回推动25次 4、兔背部剪毛，4x10cm2 5、背部皮下多点注射：20点，0.05ml/点 6、在初次免疫高峰后加强免疫 7、加强免疫后7-10天，凝集实验检测抗体凝集效价，ELISA检测抗体滴度

  20. 作业 • 动物免疫应注意哪些事项？ • 什么是佐剂，有什么特点？ • 简述单克隆抗体和多克隆抗体的区别。

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