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人工诱导的细胞融合，在六十年代作为一门新兴技术而发展起来。由于它不仅能产生同种细胞融合，也能产生种间细胞的融合，因此细胞融合技术目前被广泛应用于细胞生物学和医学研究的各个领域。基因型相同的细胞融合成的杂交细胞称为同核体（ homokaryon ）；来自不同基因型的杂交细胞则称为异核体（ heterokaryon ）。. 实验四、细胞融合. 细胞融合不仅可用于基础研究，而且还有重要的应用价值，在植物育种方面已经成功的有萝卜 + 甘蓝、粉蓝烟草 + 郎氏烟草、番茄 + 马铃薯等等。.
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人工诱导的细胞融合，在六十年代作为一门新兴技术而发展起来。由于它不仅能产生同种细胞融合，也能产生种间细胞的融合，因此细胞融合技术目前被广泛应用于细胞生物学和医学研究的各个领域。基因型相同的细胞融合成的杂交细胞称为同核体（homokaryon）；来自不同基因型的杂交细胞则称为异核体（heterokaryon）。人工诱导的细胞融合，在六十年代作为一门新兴技术而发展起来。由于它不仅能产生同种细胞融合，也能产生种间细胞的融合，因此细胞融合技术目前被广泛应用于细胞生物学和医学研究的各个领域。基因型相同的细胞融合成的杂交细胞称为同核体（homokaryon）；来自不同基因型的杂交细胞则称为异核体（heterokaryon）。 实验四、细胞融合
细胞融合不仅可用于基础研究，而且还有重要的应用价值，在植物育种方面已经成功的有萝卜+甘蓝、粉蓝烟草+郎氏烟草、番茄+马铃薯等等。
细胞融合另一个重要应用就是制备单克隆抗体，单克隆抗体可以用作诊断试剂，治疗疾病和运载药物，具有准确，高效，简易，快速等优点。因此，融合细胞的研究为生物学无论在基础理论上或生产实践上开辟了一条新的道路。这一技术已成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物新品种培育的重要手段。
1.正常小鼠脾脏中含有不同的B淋巴细胞 2.一个B淋巴细胞只能分泌一种特异性的抗体 3.在体外培养条件下，B淋巴细胞不能无限增殖 4.小鼠的骨髓瘤细胞可以无限增殖，但不能分泌抗体
『目的要求』 1、了解细胞融合的原理。 2、掌握细胞融合的实验方法 『实验用品』 血球计数板、水浴锅、离心机、光学显微镜、载玻片、50%PEG溶液、GNK液、生理盐水、鸡血红细胞
『实验原理』 在通常情况下，两个细胞接触并不发生融合现象，因为各自存在完整的细胞膜。在某些诱导物（如仙台病毒、聚乙二醇等）的诱导下，使亲本细胞膜发生一定的变化，能使两个或多个或更多的细胞融合。细胞融合过程，首先是在诱导物的作用下出现细胞凝集现象。然后，在细胞粘连处发生融合，而成为多核细胞。最后，经有丝分裂，细胞核进行融合，遂形成新的杂种细胞。
诱导细胞融合的主要方法有： 1. 病毒诱导融合：有许多种类的病毒能介导细胞融合，最常用的是灭活的仙台病毒（HVJ），为RNA病毒。病毒诱导细胞融合的过程有：首先是细胞表面吸附许多病毒粒子，接着细胞发生凝集，几分钟至几十分钟后，病毒粒子从细胞表面消失，而就在这个部位邻接的细胞的细胞膜融合，胞浆相互交流，最后形成融合细胞。
2. 化学融合剂诱导融合：化学融合剂主要有高级脂肪酸衍生物、脂质体、钙离子、水溶性高分子化合物、水溶性蛋白质和多肽，其中最常用的是聚乙二醇（PEG）。PEG用于细胞融合至少有两方面的作用：①可促使细胞凝结；②破坏互相接触处的细胞膜的磷脂双分子层，从而使相互接触的细胞膜之间发生融合，进而细胞质沟通，形成一个双核或多核融合细胞。
PEG诱导融合的机理：PEG由于含有醚键而具负极性，一些正极化集团能形成氢键。当PEG分子足够长时，可作为邻近原生质表面之间的分子桥而使之粘连。PEG也能连接Ca2＋等阳离子。Ca2＋可在一些负极化基团和PEG之间形成桥，因而促进粘连。在洗涤过程中，连接在原生质体膜上的PEG分子可被洗脱，这样将引起电荷的紊乱和再分布，从而引起原生质体融合。高Ca高pH由于增加了质膜的流动性，因而也大大提高了融合频率。洗涤时的渗透压冲击对融合也可能起作用。PEG诱导融合的机理：PEG由于含有醚键而具负极性，一些正极化集团能形成氢键。当PEG分子足够长时，可作为邻近原生质表面之间的分子桥而使之粘连。PEG也能连接Ca2＋等阳离子。Ca2＋可在一些负极化基团和PEG之间形成桥，因而促进粘连。在洗涤过程中，连接在原生质体膜上的PEG分子可被洗脱，这样将引起电荷的紊乱和再分布，从而引起原生质体融合。高Ca高pH由于增加了质膜的流动性，因而也大大提高了融合频率。洗涤时的渗透压冲击对融合也可能起作用。
3. 电融合：是指细胞在电场中极化成偶极子，并沿着电力线排列成串，然后用高强度、短时程的电脉冲击穿细胞膜而导致细胞融合。
『实验内容和方法』 1、鸡红细胞悬液的制备。 2、1200r/min离心5min，去上清，再以上述条件离心洗涤两次。 3、将沉淀加入5ml GKN液，混匀。 4、计数，稀释至每毫升1.5×106个。 5、悬液1ml放入37℃预热。同时将50%PEG液预热。 6、待温度恒定后，在1ml细胞悬液中慢慢逐滴加入0.5ml50%PEG液，边加边摇匀，放入水浴锅中。 7、细胞融合20-30min后，加入GKN液至5ml，静止于水浴锅中10min左右。 8、取出离心管，1200r/min离心3min，使细胞完全沉降。去上清，加GKN液，再离心一次。 9、去上清，加少量GKN液，混匀，取少量悬液于载玻片上观察细胞融合情况。 10、实验绘图：
『思考题』 一、细胞融合率受那些因素影响？ 二、在进行细胞融合时要注意那些问题？
