1 / 35

АЛГОРИТМ ДИАГНОСТИКИ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ В РЕСПУБЛИКЕ БЕЛАРУСЬ

АЛГОРИТМ ДИАГНОСТИКИ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ В РЕСПУБЛИКЕ БЕЛАРУСЬ. Черновецкий М.А., заведующий лабораторией вирусологии и бактериологии ГУ РНПЦ детской онкологии, гематологии и иммунологии, кандидат медицинских наук, доцент. ИСТОРИЯ ВОПРОСА.

hector
Download Presentation

АЛГОРИТМ ДИАГНОСТИКИ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ В РЕСПУБЛИКЕ БЕЛАРУСЬ

An Image/Link below is provided (as is) to download presentation Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author. Content is provided to you AS IS for your information and personal use only. Download presentation by click this link. While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server. During download, if you can't get a presentation, the file might be deleted by the publisher.

E N D

Presentation Transcript

  1. АЛГОРИТМ ДИАГНОСТИКИВИЧ-ИНФЕКЦИИ В РЕСПУБЛИКЕ БЕЛАРУСЬ Черновецкий М.А., заведующий лабораторией вирусологии и бактериологии ГУ РНПЦ детской онкологии, гематологии и иммунологии, кандидат медицинских наук, доцент

  2. ИСТОРИЯ ВОПРОСА • Открытие возбудителя (ВИЧ-1) – 1983 год Л.Монтанье; 1984 год – Р.Галло. • В 1986 году появились сообщения об открытии варианта ВИЧ-2.

  3. ОСНОВНЫЕ СТРУКТУРНЫЕ КОМПОНЕНТЫ ВИЧ • Геномная РНК (две одноцепочечные молекулы) • Нуклеопротеины p7, Vpr • Латеральный белок Vpx (ВИЧ-2) • Белок gp 41(ВИЧ-1) • Белок gp36 (ВИЧ-2) • Матриксный белок p17 • Нуклеоидный белок p24 (ВИЧ-1) • Комплекс ферментов (полимераза,обратная транскриптаза, интеграза, РНК-за Н) • Мембранные белки клеточного происхождения

  4. Основные диагностические маркеры ВИЧ-инфекции • Специфические антитела (классов IgA,IgM и IgG) кповерхностным (envelope –gp41 и gp36) белкамвирусов, к нуклеоидному белку p24, к полимеразе (pol) • Нуклеоидный белок p24 • РНК ВИЧ 1 и РНК ВИЧ-2

  5. Принцип определения и виды диагностических тест-систем • Иммуноферментный – использование твердофазного микропланшета с целью выявлением специфических маркеров ВИЧ-инфекции с использованием ферментной метки (пероксидаза корня хрена - HRP) • Радиоиммунный – использование микропробирок с целью выявления специфических маркеров ВИЧ-инфекции с использованием радиактивной метки (йод125) • Хемолюминесцентный анализ – использование различных вариантов твердой фазы (планшет либо пробирка) с целью выявлением специфических маркеров ВИЧ-инфекции с использованием люминесцентной метки (изолюминол, акридин)

  6. Основные варианты иммуноферментной диагностики • Изолированное определение суммарных антител (класса IgM и IgG) к поверхностным белкам ВИЧ-1 и ВИЧ-2 • Одновременноеопределение суммарных антител (класса IgM и IgG) к поверхностным белкам ВИЧ-1 и ВИЧ-2 а также антигена р24. (Перспективным направление является использование pol-белка)

  7. Подтверждение специфичности обнаружения маркеров ВИЧ-инфекции • Используется метод иммуноблоттинга – выявление спектра антител к различным антигенам ВИЧ-1 и ВИЧ-2 за счет взаимодействия белков, нанесенных на диагностическую мембрану, со специфическими антителами в исследуемом биоматериале с последующей визуализацией антиген-антительного блока при помощи фермент-хромогенного комплекса.

  8. Молекулярно-биологическая диагностика ВИЧ-инфекции • Выявление консервативных участков генома ВИЧ-1 и ВИЧ-2 при помощи амплификационного анализа с использованием различных вариантов методов полимеразной (ПЦР) и лигазной цепной реакции (ЛЦР) в качественном и количественном варианте. • Филогенетический анализ выявленных геномов ВИЧ-1 и ВИЧ-2. • Определение устойчивости к антитретровирусным препаратам, связанной с изменениями генома ВИЧ.

  9. Основной нормативно-правовой документ • Приказ Министерства здравоохранения №351 от 16 декабря 1998 года содержащий приложение №15 «Лабораторное обеспечение диагностики ВИЧ-инфекции»

  10. Уровни лабораторной диагностики • Лаборатории 1-го уровня (серологические) – проводят скрининговое обследование предусмотренных контингентов населения на наличие маркеров ВИЧ методом ИФА. • Лаборатории 2-го уровня (арбитражные) – проводят скрининговые и арбитражные исследования первично-серопозитивных проб. • Лаборатория 3-го уровня (референс-лаборатория) проводит скрининговые, арбитражные и подтверждающие исследования.

  11. Алгоритм исследования проб на маркеры ВИЧ-инфекции • Первичная серологическая апробация крови нам наличие маркеров ВИЧ-инфекции. • Ретестирование одного и того же образца при первичном выявление маркеров ВИЧ-инфекции. • Арбитражное исследование (в лабораториях 2-го и 3-го уровней) повторной пробы в случае подтверждения первично-положительного образца при вышеуказанном ретестировании.

  12. Экспресс-метод серологического обследования • Выявление специфических белков (антител и антигенов) помощи иммунохроматографического анализа с применением антител, меченных коллоидным золотом, либо окрашенных латекс-частиц. Время проведения анализа - 5-10 минут Время учета результатов - до 15 минут

  13. Принцип метода иммуно-хроматографического анализа • Взаимодействие определяемых специфических белков ( ВИЧ-антител) с меченными колоидным золотом (либо крашенными латекс-частицами) соответствующими протеинами (ВИЧ-антигенами), с последующей миграцией вдоль нитроцеллюлозной мембраны и образованием визуально детектируемых комплексов за счет контакта вышеобразованного блока «анти-ВИЧ+ВИЧ-антиген,меченный коллоидным золотом либо крашенными латекс-частицами» с нанесенными на мембрану специфическими ВИЧ-антигенами.

  14. Вариантрезультата иммуно-хроматографического анализа Интактная диагностическая кассета Образец Контроль ВИЧ1 ВИЧ-2

  15. Вариант результата иммуно-хроматографического анализа ВИЧ-отрицательная диагностическая кассета Образец Контроль ВИЧ1 ВИЧ-2

  16. Вариант результата иммуно- хроматографического анализа ВИЧ-1положительная диагностическая кассета Образец Контроль ВИЧ1 ВИЧ-2

  17. Вариант иммуно- хроматографического анализа ВИЧ-2 положительная диагностическая кассета Образец Контроль ВИЧ1 ВИЧ-2

  18. Вариант иммуно- хроматографического анализа ВИЧ- и ВИЧ-2 положительная диагностическая кассета Образец Контроль ВИЧ1 ВИЧ-2

  19. Вариант иммуно- хроматографического анализа Недействительная диагностическая кассета Образец Контроль ВИЧ1 ВИЧ-2

  20. Вариант иммуно- хроматографического анализа Недействительная диагностическая кассета Образец Контроль ВИЧ1 ВИЧ-2

  21. Схема иммуно- хроматографического анализа (HIV ½ 3.0SD)

  22. Документы, регламентирующие использование экспресс-тестов для диагностики ВИЧ-инфекции в РБ • Приказ МЗ РБ №1008 от 324.09.2010 года «Об утверждении клинического протокола профилактики ВИЧ-инфекции от матери к ребенку» - разрешено использование экспресс-тестов на маркеры ВИЧ-инфекции для обследования беременных женщин, поступивших на роды с неизвестным ВИЧ-статусом.

  23. Документы, регламентирующие использование экспресс-тестов для диагностики ВИЧ-инфекции в РБ • Решение Странового координационного комитета по взаимодействию с Глобальным фондом для борьбы со СПИДом, туберкулезом и малярией №37 от 25.08.2011 года и №40 от 24.08.2012 года одобрено использование экспресс-тестов для диагностики ВИЧ-инфекции в рамках тестирования групп риска при проведении дозорного эпиднадзора.

  24. ВОПРОС? • Можно ли и нужно ли внедрять экспресс-тесты для диагностики ВИЧ-инфекции в рамках серологической апробации крови различных контингентов населения Республики Беларусь?

  25. Результаты изучения целесообразности использования экспресс-тестов при определении наличия антител к ВИЧ 1/2 Проект международной технической помощи «Разработка Плана обеспечения устойчивости национальных ответных мер в отношении ВИЧ/СПИДа. Изучение целесообразности внедрения экспресс –диагностики ВИЧ в Беларуси среди определенных групп населения» Русанович А.В.

  26. Рабочая группа (приказ МЗРБ от 27.03.2012 № 330)

  27. Обязательные контингенты, подлежащие тестированию на наличие антител к ВИЧ • доноры крови, органов и тканей • Заключенные • беременные женщины • дети, рожденные ВИЧ-положительными матерями • пациенты с ИППП • потребители наркотиков • пациенты по эпидемиологическим и клиническим показаниям, включая медицинский персонал • лица при поступлении в образовательные учреждения Министерства обороны • призывники Министерства внутренних дел и Министерства обороны • иностранные граждане

  28. Тестирование на наличие антител к ВИЧ 1/2 • методом ИФА с использованием тест-систем ИФА рекомбинантHIV 1/2 производства СПОО «Фармленд», Республика Беларусь, и ДС-ИФА-анти-ВИЧ-унифицированный, производства МПО «Диагностические системы», Российская Федерация, • экспресс – тесты на основе метода хроматографического анализа с использованием коллоидного золота для определения антител к ВИЧ1/2 в цельной крови - набор для экспресс-анализа ВИЧ (HIV) в крови HIV-1/HIV-2 AB тест производства «AUDIT DIAGNOSTICS – «Мульти-Тест», Беларусь,

  29. Результаты исследований • с 31 мая по 13 ноября 2012 года было протестировано 1900 человек. • положительный результат – 93 случая • в 3-х случаях при отрицательном результате ИФА экспресс-тесты показали положительный результат • в 1 случае при положительном результате ИФА экспресс-тест показал отрицательный результат

  30. Результаты тестирования на наличие антител к ВИЧ

  31. Выводы • экспресс-тесты на ВИЧ на основе метода хроматографического анализа с использованием коллоидного золота по специфичности сопоставимы с ИФА; • имеют примерно одинаковую стоимость; • не требуют использования высокотехнологичного оборудования и труда высококвалифицированных сотрудников; • позволяют получить результат исследования в течение 15- 20 минут. • Могут применяться в любой группе населения, не зависимо от возраста и гендерной принадлежности. • Использование экспресс-теста на ВИЧ для рутинного скрининга населения вместо первичного ИФА приведет к сокращению расходов на транспортировку образцов крови в лабораторию и снизит количество людей с незавершенной верификацией диагноза «ВИЧ-инфекция».

  32. Экспресс-тесты на основе метода иммунохроматографического анализа с использованием коллоидного золота для определения антител к ВИЧ 1/2 могут быть использованы • в случаях экстренных ситуаций по медицинским показаниям, когда необходимо неотложно знать ВИЧ-статус пациента; • при проведении дозорного эпиднадзора среди групп риска; • в наркологических диспансерах при обследовании наркопотребителей; • при рутинном скрининге населения.

  33. Положительный результат в экспресс-тесте на наличие антител к ВИЧ 1/2 для верификации диагноза следует подтвердить в ИФА и иммуноблоттинге, при этом результат в экспресс-тесте нужно учитывать как первично положительный анализ в ИФА. • В рамках разработки и переработки нормативных правовых актов, регламентирующих работу по профилактике, лечению и диагностике ВИЧ-инфекции считаем целесообразным включение в них в качестве одного их методов определения маркеров ВИЧ-инфекции экспресс-тестов на основе использования метода иммунохроматографического анализа.

  34. Результаты тестирования по крови и слюне

More Related