医学微生物学

医学微生物学 实验一细菌形态学

本次实验内容 一、实验室规则二、油镜的使用三、细菌的基本形态和特殊结构的观察四、革兰氏染色法五、自然界中细菌的分布

一、实验室规则 （一）实验前要做好实验预习，进实验室只带必要的文具、讲义，并穿工作服。（二）实验室内应保持清洁、安静，实验时要认真严肃，禁止抽烟、饮食和开玩笑。

（三）爱护实验器材，注意节约实验材料，实验室内任何物品不得带出室外。（三）爱护实验器材，注意节约实验材料，实验室内任何物品不得带出室外。（四）注意安全，若带菌材料污染桌面、地板、书籍和衣物或误吸入口，应立即报告教师进行处理。

（五）实验中待培养的材料应放在培养区；实验用过的带菌材料如吸管、玻片等应放在消毒缸、消毒箱等消毒区，不得放在桌上或冲洗于水槽内。（五）实验中待培养的材料应放在培养区；实验用过的带菌材料如吸管、玻片等应放在消毒缸、消毒箱等消毒区，不得放在桌上或冲洗于水槽内。

（六）实验完毕，桌面应整理清洁，洗手后方可离室。值日同学负责湿性打扫实验室，并关好水、电、门窗。（六）实验完毕，桌面应整理清洁，洗手后方可离室。值日同学负责湿性打扫实验室，并关好水、电、门窗。

二、油镜的使用 (一)、油镜头的识别油镜头的下缘，一般刻有一黑圈，标有油 90、100、oel、oil等字样。显微镜的接物镜有低倍镜头，高倍镜头和油镜头，其中油镜头的放大倍数最大。

(二）油镜的原理： 滴镜油后可以增加油镜视野的亮度。

（三）镜检要领 把载玻片固定于载物台上，使油镜头对准镜筒。于载玻片上滴一小滴液体石腊，眼睛从镜筒侧面看，旋转粗调节器，使镜筒下降浸入镜油并贴近标本，但勿触及玻片。

（四）油镜的保护办法 镜检完毕后，把镜筒升高，用擦镜纸把油镜头上的镜油擦净。

三、细菌基本形态的观察 细菌的基本形态可分为球菌、杆菌、螺形菌（包括弧菌）三类。

1．球菌： 如葡萄球菌经结晶紫染色后为球状，常堆集成葡萄串状，呈紫色。

葡萄球菌

肺炎球菌

链球菌

2．杆菌： 如大肠杆菌经番红染色后呈淡红色杆状，两端钝圆，散在排列。

大肠杆菌

3．螺形菌： 如霍乱弧菌经稀释复红液染色后呈红色弧形，菌体微弯，如逗点状，或呈眉毛状，散在排列。幽门螺杆菌呈螺旋状、U状、S状及海鸥展翅状。

幽门螺杆菌

四、革兰氏染色 （一）细菌涂片的制作（二）染色：单染色法复染色法革兰氏染色法抗酸染色法

（一）细菌涂片标本的制作 1．涂片：取清洁无油载玻片一张，将接种环用火焰烧红灭菌，待冷后取一环菌液轻轻涂抹在玻片上，制成直径约1cm大小薄层，然后将接种环灭菌。

2．干燥： 涂片置室温自然干燥，必要时可将标本面朝上，放在离火焰较高处微微烘干，但切勿在火焰上直烤。

3．固定： 标本面朝上，用钟摆样速度来回通过火焰三次。

（二）革兰氏染色法步骤 1．初染：在上述已固定的涂片上，滴加结晶紫染液，染色1分钟，水洗。 2．媒染：滴加革兰氏碘液，作用1—3分钟，水洗。

3．脱色：滴加 95％酒精，并频频摇动玻片，至无紫色脱出为止（约20秒），水洗。 4．复染：加番红染液，复染半分钟，水洗，用吸水纸印干后，油镜检查。

1 初染: 结晶紫染色液, 1分钟 • 媒染: 革兰氏碘液, 1分钟 • 脱色: 95%酒精, 15-20秒 • 复染: 番红染色液, 30秒

（三）革兰氏染色法 1、结果观察：革兰氏阳性菌---兰紫色革兰氏阴性菌---红色 2、原理 3、意义

五、细菌的特殊构造： 1、鞭毛 2、荚膜 3、芽胞 4、菌毛

鞭毛 Flagellum 化学组成：鞭毛蛋白功能：运动器官与致病有关鉴定分类细菌

变形杆菌（鞭毛）

荚膜 Capsule 化学组成：产气荚膜杆菌多糖或多肽功能：抗吞噬作用粘附作用抗有害物质损伤作用肺炎链球菌

芽胞 Spore 功能与医学上意义：对外界的抵抗力增加可发芽成繁殖体有致病性有鉴别作用应以杀死芽胞为灭菌效果的指标

六、自然界中细菌的分布 目的要求 1．通过实验对细菌在自然界的分布有一感性认识。 2．初步建立无菌观念，认识到无菌操作技术在医疗实践和微生物学实验中的重要性。

(一)、空气中细菌的检查 (二)、鼻腔中及书籍上细菌的检查 (三)、检查手指皮肤消毒前后的细菌

作业： 1、请画图示意细菌的基本形态和特殊结构。（标明：细菌名称、染色法、放大倍数） 2、填空。

1 初染: 结晶紫染色液, 1分钟 • 媒染: 革兰氏碘液, 1分钟 • 脱色: 95%酒精, 15-20秒 • 复染: 番红染色液, 30秒