微生物检验

5. 微生物检验 • 1．标本直接检查 • （1）抗原检查 利用免疫荧光技术和 • ELlSA法检测发病初期患者血液 • 及脑脊液中乙脑病毒抗原，结 • 果阳性有早期诊断意义。

6. （2）核酸检查 近年来临床上已广泛 采用逆转录聚合酶链式反应(RT- PCR)检测病毒核酸片段，有较高 的特异性和敏感性，特别适用于 抗体尚未阳转病人的早期快速诊 断。

7. 2.分离培养 • 从血液、脑脊液和脑组织中均可分离 • 到乙脑病毒。培养乙脑病毒可用C6／ • 36、BHK-21、等细胞，以C6／36最 • 常用。常用鹅血红细胞吸附试验、 • 乙脑病毒单克隆抗体免疫荧光试验 • 等方法检测培养结果。病毒分离培 • 养还可以采用乳鼠脑内接种的方法， • 但敏感性低于细胞分离法。

8. 3.抗体检测 • 人感染乙脑病毒后5-7d即出现IgM，随 • 后产生lgG血凝抑制抗体和中和抗体， • 感染后2周 lgM抗体达高峰。补体结合 • 抗体在第3-4周时才出现，半年后逐渐 • 消失，这种抗体无保护作用。

9. 患者血清及脑脊液中的特异性IgM抗 • 体。感染后第4天出现，2～3周达 • 高峰，阳性率可达90％以上。与血 • 凝抑制试验同时测定，符合率可达 • 95％。双份血清血凝抑制抗体效价 • 增高4倍可以确诊；单份血清效价 • 在1：320以上有诊断意义。

10. 补体结合抗体出现较晚，故不能作 为早期诊断指标。可用于近期感染 的诊断。单份抗体效价1：16有诊断 价值；双份抗体效价升高4倍可以确 诊。 应用乙脑MoAb致敏羊血细胞反向被 动血凝抑制试验，阳性率为83％。 方法简便快速，已有商品供应。

12. 培养特性 • 该病毒易在蚊体中增殖，蚊体胸内接 • 种增殖良好。乳鼠脑内接种登革病毒， • 经4-7日后，乳鼠可表现以迟缓性麻痹 • 为主的脑炎症状，并最终导致死亡。 • 灵长类动物如猴、猩猩、狒狒经皮内、 • 皮下及静脉接种病毒后引起隐性感染， • 但可产生免疫力。细胞培养以白纹伊 • 蚊的传代细胞(如C6／36)或地鼠肾细 • 胞等敏感。

13. 微生物检验 • 标本直接检查 • 1．抗原检查 应用ELISA法、免疫荧光 • 法、放射免疫法等检测标本中的病毒 • 抗原。 • 2．核酸检查 应用逆转录多聚酶链式反 • 应(RT-PCR)检测病毒核酸，并可检测 • 登革病型别。

14. 1.发病l-3天，常有病毒血症，病毒 • 滴度较高，故采集血清、白细胞 • 等标本可用于病毒分离培养。 • 2.细胞培养 常使用白纹伊蚊C6／36 • 等细胞株培养病毒，接种5—7天， • 直接进行病毒检测。

15. 2．动物接种 选用1—3日龄的小白 鼠，脑内和腹腔联合接种观察21 天。如出现行动迟缓耸毛、共济 失调、抽搐或瘫痪等表现时，提 示可能有病毒增殖。

16. 3．蚊虫胸腔接种 用白纹伊蚊和 埃及伊蚊做胸腔接种，将接种 蚊在28℃～30℃培养10天，取 蚊脑及唾液腺压碎涂片，用免 疫荧光技术检测病毒。

17. 抗体检测 • 常用的方法有补体结合试验、红细胞 • 凝集抑制试验及中和试验等。单份血 • 清补体结合抗体效价超过l：32，红细 • 胞凝集抑制试验抗体效价超过1：1280 • 者有诊断意义。双份血清效价增高4倍 • 以上，则可确诊。中和试验特异性较 • 高，中和指数超过50者为阳性。还可 • 用抗体捕获的ELISA法检测特异性lgM • 抗体，有助于登革早期诊断。

18. 第三节 森林脑炎病毒 • 森林脑炎是经蜱传播的自然疫源 • 性疾病，森林硬蜱为其主要传播 • 媒介。蜱也是储存宿主。本病亦 • 可经胃肠道传播。出现高热头痛、 • 脑膜刺激症、昏迷等症状。病死 • 率约20％—30％。病后可获持久 • 免疫力。

19. 微生物特性 • 呈球形，直径20～30nm，立体对称， • 单正链RNA，有包膜，动物感染范围 • 较广，以小鼠最为敏感，任何途径 • 接种均能感染。能在原代鸡胚细胞、 • 地鼠肾细胞中生长并引起细胞病变。 • 毒力差异较大，但抗原性较稳定。

20. 微生物检验 • 森林脑炎病毒检测方法与乙型脑炎 • 病毒相似。病毒分离仅用作死亡病 • 例的确诊。血清学检查可取病人早 • 期和恢复期双份血清做补体结合试 • 验、中和试验及酶联免疫吸附试验， • 观察抗体效价增长情况，恢复期抗 • 体效价增长4倍或4倍以上可确诊。