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标准曲线的制作与运用. —— 以“考马斯亮蓝 G-250 法测定蛋白质含量”为例 许良政 2007.5. 标准曲线的制作与运用. 一、标准蛋白质溶液的配制 实验指导: P160 具体方法: 精确称取结晶牛血清蛋白 10mg ,加水溶解并定容至 100ml ,即为 100 μ g/ml 的 标准蛋白质溶液. 标准曲线的制作与运用. 二、不同浓度梯度的标准蛋白质溶液的配制. 或 5min. 或 620nm. 标准曲线的制作与运用. 二、不同浓度梯度的标准蛋白质溶液的配制 注意: 1 、各管振荡程度尽量一致
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标准曲线的制作与运用 ——以“考马斯亮蓝G-250法测定蛋白质含量”为例 许良政 2007.5
标准曲线的制作与运用 一、标准蛋白质溶液的配制 • 实验指导:P160 • 具体方法: 精确称取结晶牛血清蛋白10mg,加水溶解并定容至100ml,即为100μg/ml的标准蛋白质溶液
标准曲线的制作与运用 二、不同浓度梯度的标准蛋白质溶液的配制 或5min 或620nm
标准曲线的制作与运用 二、不同浓度梯度的标准蛋白质溶液的配制 • 注意: 1、各管振荡程度尽量一致 2、振荡后放置3~4min 3、在595或620nm处比色,记录吸光度(OD值)
标准曲线的制作与运用 三、标准曲线的制作 (一)打开Excel
标准曲线的制作与运用 三、标准曲线的制作 (二)进入Excel工作表状态
标准曲线的制作与运用 三、标准曲线的制作 (三)在Excel工作表输入数据和说明文字
标准曲线的制作与运用 三、标准曲线的制作 (四)作图:1、用鼠标选中数据
标准曲线的制作与运用 三、标准曲线的制作 (四)作图:2、选中图表类型
标准曲线的制作与运用 三、标准曲线的制作 (四)作图:3、点“图表类型”对话框的“下一步”,出现如下对话框
标准曲线的制作与运用 三、标准曲线的制作 (四)作图:4、点对话框的“系列”选项
标准曲线的制作与运用 三、标准曲线的制作 (四)作图:5、嵌入系列(图表)名称
标准曲线的制作与运用 三、标准曲线的制作 (四)作图:6、点“下一步”操作,出现:
标准曲线的制作与运用 三、标准曲线的制作 (四)作图:7、再点“下一步”操作,出现:
标准曲线的制作与运用 三、标准曲线的制作 (四)作图:8、点“完成”操作,散点图在工作表中出现:
标准曲线的制作与运用 三、标准曲线的制作 (四)作图:9、用鼠标左键选中作图点
标准曲线的制作与运用 三、标准曲线的制作 (四)作图:10、选定作图点后,再点鼠标右键并选中“添加趋势线”:
标准曲线的制作与运用 三、标准曲线的制作 (四)作图:11、 单击“添加趋势线”
标准曲线的制作与运用 三、标准曲线的制作 (四)作图:12、确定
标准曲线的制作与运用 三、标准曲线的制作 (五)求直线方程:1、选中趋势线,点鼠标右键并选中“趋势线格式”:
标准曲线的制作与运用 三、标准曲线的制作 (五)求直线方程: 2、点“趋势线格式”,在下图的“选项”中选“显示公式”和“R的平均值”:
标准曲线的制作与运用 三、标准曲线的制作 (五)求直线方程: 3、确定 注:R2至少要达到0.999以上
标准曲线的制作与运用 四、标准曲线的运用 将所测得“吸光度”代入“直线方程”的y项,利用Excel的计算功能即可方便求出X项的“蛋白质浓度”: 换算公式:X=(Y-0.0005)/0.0075
标准曲线的制作与运用 四、标准曲线的运用 • 如何用Excel求“蛋白质浓度”
标准曲线的制作与运用 四、标准曲线的运用 • 如何用Excel求“蛋白质浓度”
标准曲线的制作与运用 四、标准曲线的运用 • 如何用Excel求“蛋白质浓度”
标准曲线的制作与运用 四、标准曲线的运用 • 如何用Excel求“蛋白质浓度”
标准曲线的制作与运用 四、标准曲线的运用 • 如何用Excel求“蛋白质浓度”
标准曲线的制作与运用 四、标准曲线的运用 • 如何用Excel求样本“蛋白质浓度”的平均值
标准曲线的制作与运用 四、标准曲线的运用 • 如何用Excel求样本“蛋白质浓度”的平均值
标准曲线的制作与运用 四、标准曲线的运用 • 如何用Excel求样本“蛋白质浓度”的平均值
标准曲线的制作与运用 四、标准曲线的运用 • 如何用Excel求样本“蛋白质浓度”的平均值
标准曲线的制作与运用 四、标准曲线的运用 • 如何用Excel求样本“蛋白质浓度”的平均值
标准曲线的制作与运用 四、标准曲线的运用 • 如何用Excel求样本“蛋白质浓度”的平均值
标准曲线的制作与运用 附:样本中“蛋白质含量”的换算
标准曲线的制作与运用 附:样本中蛋白质的提取与测定