1 / 65

利用细菌控制大豆 根病技术研究

利用细菌控制大豆 根病技术研究. 段玉玺. 沈阳农业大学植物线虫学研究室 2007 年 9 月 5 日. 大豆胞囊线虫 Soybean Cyst Nematode (SCN). 大豆胞囊线虫田间为害状. 根部为害状. 胞　　囊. 根部为害状. 侵入侧根的二龄幼虫. 侵入大豆根部中柱鞘内 的二龄幼虫. 大豆胞囊线虫二（ A ， B ）、三（ C ， D ）、四（ E ）龄幼虫. 大豆胞囊线虫成熟后突破根组织. 大豆胞囊线虫 卵囊内的卵及二龄幼虫. 大豆根腐病 （ Soybean Root Rot ）. 细菌悬液. 细菌发酵滤液. 温室试验.

isla
Download Presentation

利用细菌控制大豆 根病技术研究

An Image/Link below is provided (as is) to download presentation Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author. Content is provided to you AS IS for your information and personal use only. Download presentation by click this link. While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server. During download, if you can't get a presentation, the file might be deleted by the publisher.

E N D

Presentation Transcript

  1. 利用细菌控制大豆根病技术研究 段玉玺 沈阳农业大学植物线虫学研究室 2007年9月5日

  2. 大豆胞囊线虫 Soybean Cyst Nematode (SCN)

  3. 大豆胞囊线虫田间为害状 根部为害状 胞　　囊 根部为害状

  4. 侵入侧根的二龄幼虫 侵入大豆根部中柱鞘内 的二龄幼虫 大豆胞囊线虫二（A，B）、三（C，D）、四（E）龄幼虫 • 大豆胞囊线虫成熟后突破根组织 大豆胞囊线虫 卵囊内的卵及二龄幼虫

  5. 大豆根腐病 （Soybean Root Rot）

  6. 细菌悬液 细菌发酵滤液 温室试验 根病生防细菌 细菌的109cfu/ml悬液 不同靶标 大豆根病生防细菌的筛选

  7. 对照（活J2） 处理（死亡J2）

  8. 菌株R0118（A.菌落形态; B.葡萄糖发酵; C.亚甲蓝染色; D.革兰氏染色; E.鞭毛染色; F.芽孢染色）

  9. 菌株R0140 （A.菌落形态; B.葡萄糖发酵; C.亚甲蓝染色; D.革兰氏染色; E.鞭毛染色; F.芽孢染色）

  10. 菌株R0173 （A.菌落形态; B.亚甲蓝染色; C.革兰氏染色; D.鞭毛染色; E.芽孢染色）

  11. 菌株R0223（A.菌落形态; B.葡萄糖发酵; C.亚甲蓝染色; D.革兰氏染色; E.鞭毛染色; F.芽孢染色）

  12. 菌株R0277 （A.菌落形态; B.亚甲蓝染色; C.革兰氏染色; D.鞭毛染色; E.芽孢染色）

  13. 菌株R0463 （A.菌落形态; B.葡萄糖发酵; C.亚甲蓝染色; D.革兰氏染色; E.鞭毛染色; F.芽孢染色）

  14. 菌株R0471 （A.菌落形态; B.亚甲蓝染色; C.革兰氏染色; D.鞭毛染色; E.芽孢染色）

  15. 菌株R0495 （A.菌落形态; B.葡萄糖发酵; C.亚甲蓝染色; D.革兰氏染色; E.鞭毛染色; F.芽孢染色）

  16. 菌株R0671（A.菌落形态; B.亚甲蓝染色; C.革兰氏染色; D.鞭毛染色; E.芽孢染色）

  17. 菌株R0675 （A.菌落形态; B.葡萄糖发酵; C.亚甲蓝染色; D.革兰氏染色; E.鞭毛染色; F.芽孢染色）

  18. 处理菌株 Strains 死亡的线虫数（条） The dead number of J2 校正死亡率 Corrected mortality （%） I II III 平均 r030048 r030060 r030066 r030121 r030260 r030348 r030361 r030398 对照CK 无菌水CK 7 4 9 8 5 6 3 7 4 1 9 5 10 6 8 8 4 8 2 2 6 6 6 8 7 9 2 7 4 1 7.33Aa 5.00Bb 8.33Aa 7.33Aa 6.67Ab 7.67Aa 3.00Bb 7.33Aa 3.33Bb 1.33Bb 60.00% 25.04% 75.00% 60.00% 50.00% 65.07% -0.05% 60.00% － － 表2-４不同菌株发酵液对大豆胞囊线虫J2的影响 Table2-4 The effect of fermentation of different stains to J2 of SCN

  19. 菌株发酵液对大豆胞囊线虫J2的毒性作用

  20. a ab a a a a a a b b 对大豆胞囊线虫的作用 10株已鉴定细菌的发酵滤液对大豆胞囊线虫J2的作用

  21. 2.6%-48.6% 2.6%-23.8% 44株细菌的发酵滤液对大豆胞囊线虫J2的作用

  22. 微生物工作者 植保工作者 传统研究 根瘤菌 创新研究 各种生防因子 生防活性 固氮结瘤能力 方 手 法 段 内生工程菌株 固氮 防病 提高防效

  23. 64株产芽孢细菌：64、Snb2、417、454、 476、611、620 786株 79株 15株根瘤菌：L396 1.筛选对大豆根腐病原真菌的有拮抗活性目的生防细菌

  24. 茄腐镰刀菌 尖孢镰刀菌 立枯丝核菌 腐霉菌 Snb2对4种大豆根腐病菌的拮抗作用

  25. 腐霉菌 茄腐镰刀菌 L396对大豆根腐病菌的拮抗作用

  26. 2.活性菌株菌悬液对二龄幼虫的致死率测定

  27. 3.目的细菌菌株抑菌谱的测定 薯芋黑斑病菌 番茄灰霉病菌 黄瓜菌核病菌 黄瓜枯萎病菌 葡萄白腐病菌 水稻赤霉病菌 水稻恶苗病菌 水稻纹枯病菌 玉米大斑病菌 玉米小斑病菌 烟草赤星病菌 小麦根腐病菌 (注：上：对照；左：Snb2；右：L396；)

  28. 4.目的生防细菌发酵液对大豆胞囊线虫J2的致死作用测定4.目的生防细菌发酵液对大豆胞囊线虫J2的致死作用测定

  29. 5.温室盆栽防效 对照根部平均胞囊量为36个,最多达57个； Snb2处理的大豆根部平均胞囊量为13.5个，防治效果达到62. 5%； 菌株L396处理的大豆根部平均胞囊量为26.5个；

  30. 鉴定项目 Snb2 L396 菌落形态 菌落大，圆形至不规则形，边缘褶皱，表面干燥，中间凹陷，灰白色，不产色素 菌落较小，呈圆形，边缘光滑，乳白色，凸起，有光泽，有粘液，直径2-4mm，不产色素 菌体形态 短杆状 杆状，较粗，内有聚-β-羟基丁酸盐颗粒 菌体大小（μm） 1.32±0.68(1.25~2.5)×0.65±0.25(0.5~0.9) 3.46±1.24(1.75~5.35)×1.56±0.38(1.1~1.95) 芽孢染色 有芽孢，椭圆形，间生，偶有端生，胞囊不膨大 无芽孢 革兰氏染色 ＋ － 鞭毛 周生多鞭毛 微纤毛 荚膜 － － 抗酸染色 ＋ ＋ 生防细菌 L396 和 Snb2的形态观察 注：“－”代表阴性；“＋”代表阳性；

  31. 特 征 Snb2 L396 苯丙氨酸解氨酶 － ＋ V-P测定 ＋ － 3-酮基乳糖测定 － － 运动性 ＋ ＋ 明胶水解 ＋ ＋ 甲基红 ＋ ＋ 牛奶胨化 产酸 还原 淀粉水解 ＋ ＋ 硝酸盐还原 － － 注：“－”代表阴性；“＋”代表阳性； 脲 酶 － ＋ 葡萄糖氧化发酵 ＋ ＋ 接触酶 ＋ ＋ 氧化酶 － － 厌氧性测定 ＋ ＋ 柠檬酸盐利用 ＋ ＋ 丙酸盐利用 － － 目的菌生理生化性状鉴定

  32. A B C D E F G H I J K L396的鉴定 A．亚甲蓝染色 B．革兰氏染色 C．鞭毛染色 D．芽孢染色 E．淀粉水解 F．甲基红 G．柠檬酸利用 H．明胶液化 I．脲酶测定 J．葡萄糖氧化发酵 K．V-P测定 L. 荚膜染色 L

  33. A B C E D F I H G L J K Snb2的鉴定 A．亚甲蓝染色 B．革兰氏染色 C．鞭毛染色 D．芽孢染色 E．淀粉水解 F．甲基红 G．柠檬酸利用 H．明胶液化 I．脲酶测定 J．葡萄糖氧化发酵 K．V-P测定 L. 荚膜染色

  34. 初步鉴定结果： Snb2: 芽孢杆菌属（Bacillus sp.）； L396: 中华根瘤菌属（Sinorhizobium sp.）.

  35. M Snb2 L396 2500 2000 1500 1000 500 300 16SrDNA的PCR扩增产物 Snb2 16S rDNA全序列共有1488bp ；L396 16S rDNA全序列共有1438bp；

  36. 菌株Snb2 16S rDNA序列比对的部分结果

  37. 菌株L396 16S rDNA序列比对的部分结果

  38. 菌株Snb2 为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）； 菌株L396为费氏中华根瘤菌（Sinorhizobium fredii）。

  39. 氨卞青霉素 链霉素 氯霉素 氨卞青霉素 青霉素 庆大霉素 红霉素 卡那霉素 新霉素 卡那霉素 链霉素 新霉素 青霉素 氯霉素 庆大霉素 A B 两出发菌株对八种抗生素的敏感性测定 A.L396 B.Snb2 红霉素 标记抗生素的筛选

  40. 菌株L396原生质体热灭活温度、处理时间与致死率间的关系菌株L396原生质体热灭活温度、处理时间与致死率间的关系 温度（℃） 处理时间（min） 45 60 75 90 120 150 180 致死率（％） 50 20．2 30．6 69．4 94．1 100 100 100 55 38．1 58．7 94．5 100 100 100 100 60 60．2 100 100 100 100 100 100 L396原生质体热灭活

  41. 溶菌酶浓度对出发菌株原生质体形成的影响 L396：1.5mg/mL； Snb2：2.0mg/mL；

  42. 酶解温度对出发菌株原生质体形成的影响

  43. 菌龄对出发菌株原生质体形成的影响

  44. L396的形成率为57.17％； Snb2的形成率为43.53％；

  45. 菌株Snb2原生质体释放过程的观察 菌株L396原生质体释放过程的观察 原生质体的释放过程

  46. 出发菌株在不同种类再生培养基上的再生率

  47. 菌株L396 菌株Snb2 出发菌株原生质体在HCNB上的再生菌落

  48. 获得398个菌株，经过6次转代培养，最终有49个融合子能够保持稳定的生长；

  49. Rh5 Rh3 Snb2 L396 Rh4 Rh25 Snb2 Snb2 出发菌株与部分融合子的菌落形态差异

More Related