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食品仪器分析检验技术. 紫外 - 可见分光光度法. 紫外 -- 可见分光光度法概述 紫外 -- 可见分光光度法是根据物质分子对波长为 200-760nm 这一范围的电磁波的吸收特性所建立起来的一种定性、定量和结构分析方法。操作简单、准确度高、重现性好。 分光光度法是基于物质对光的选择性吸收,其理论依据就是 朗伯比耳定律 : A=Kcb 在食品分析中的主要应用: 食用护色剂的测定(亚硝酸盐与硝酸盐) 食用漂白剂的测定(亚硫酸盐) 食用防腐剂的测定(苯甲酸和山梨酸) 其它成分测定 ( 金属元素、蛋白质、维生素等). 要喝火锅汤在开涮半小时内.
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食品仪器分析检验技术 紫外-可见分光光度法
紫外--可见分光光度法概述 紫外--可见分光光度法是根据物质分子对波长为200-760nm这一范围的电磁波的吸收特性所建立起来的一种定性、定量和结构分析方法。操作简单、准确度高、重现性好。 分光光度法是基于物质对光的选择性吸收,其理论依据就是朗伯比耳定律: A=Kcb 在食品分析中的主要应用: • 食用护色剂的测定(亚硝酸盐与硝酸盐) • 食用漂白剂的测定(亚硫酸盐) • 食用防腐剂的测定(苯甲酸和山梨酸) • 其它成分测定(金属元素、蛋白质、维生素等)
要喝火锅汤在开涮半小时内 腌菜时间超过一个月更安全
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一、护色剂 • 护色剂也称着色剂或呈色剂,主要指一些能够使肉与肉制品呈现良好色泽的物质,最常用的是硝酸盐和亚硝酸盐。 • 亚硝酸盐和硝酸盐添加在制品中后转化为亚硝酸,亚硝酸分解出亚硝基(-NO),亚硝基会很快与肌红蛋白反应生成鲜艳的、亮红色的亚硝基肌红蛋白(MbNO),亚硝基肌红蛋白遇热后,放出琉基(-SH),变成了具有鲜红色的亚硝基血色原,从而赋予食品鲜艳的红色。
亚硝酸盐对抑制微生物的增殖有一定作用,与食盐并用可增加抑菌,对肉毒梭状芽抱杆菌有特殊抑制作用。但是人体摄入过多的亚硝酸钠,30min即出现恶心、呕吐、全身无力、皮肤青紫等中毒症状,严重者昏迷、抽搐、呼吸衰竭而死亡。我国因硝酸钠、亚硝酸钠严重污染或以“工业盐”(亚硝酸钠)作为食盐误食引起恶性食物中毒事故屡有发生。同时,亚硝酸盐与仲胺反应生成具有致癌作用的亚硝胺。所以,在肉制品加工中使用护色剂必须严格控制其使用量,确保食用安全。亚硝酸盐对抑制微生物的增殖有一定作用,与食盐并用可增加抑菌,对肉毒梭状芽抱杆菌有特殊抑制作用。但是人体摄入过多的亚硝酸钠,30min即出现恶心、呕吐、全身无力、皮肤青紫等中毒症状,严重者昏迷、抽搐、呼吸衰竭而死亡。我国因硝酸钠、亚硝酸钠严重污染或以“工业盐”(亚硝酸钠)作为食盐误食引起恶性食物中毒事故屡有发生。同时,亚硝酸盐与仲胺反应生成具有致癌作用的亚硝胺。所以,在肉制品加工中使用护色剂必须严格控制其使用量,确保食用安全。 • FAO(联合国粮食及农业组织)规定以亚硝酸钠计ADI(每日允许摄入量)0~0.2mg/kg,以硝酸钠计ADI为0~5mg/kg。 • 硝酸盐和亚硝酸盐的测定方法很多,公认的测定法为盐酸萘乙二胺法 、镉柱法。
亚硝酸盐的检测—盐酸萘乙二胺法 【原理】 样品经(亚铁氰化钾-乙酸锌)沉淀蛋白质、(加水加热-冷却)除去脂肪后,在弱酸条件下亚硝酸盐与对氨基苯磺酸重氮化后,再与盐酸萘乙二胺偶合形成紫红色物质,颜色深浅与亚硝酸根含量成正比 。其最大吸收波长为538nm。
它们的亚硝酸盐含量是多少呢?吃了会不会对我们的身体有害?你能帮我测出其中的含量吗?它们的亚硝酸盐含量是多少呢?吃了会不会对我们的身体有害?你能帮我测出其中的含量吗?
在分析测试前你需要准备什么? • 组织捣碎机 • 活性炭 • 绞肉机 • 分光光度计 • 1、亚铁氰化钾溶液 • 2、乙酸锌溶液 • 3、饱和硼砂溶液 • 4、0.4%对氨基苯磺酸溶液(避光保存) • 5、0.2%盐酸萘乙二胺溶液(避光保存) • 6、亚硝酸钠标准溶液 • 7、亚硝酸钠标准使用液
【样品处理】 • 将试样用去离子水洗净,晾干后,取可食部切碎混匀。将切碎的样品用四分法取适量,用组织捣碎机制成匀浆备用 • 火腿肠用绞肉机绞碎制成匀浆备用 取适量匀浆试样加入硼砂液→沸水浴15分钟→加亚铁氰化钾-乙酸锌(沉淀蛋白质)→定容、静置→撇去脂肪层→过滤(弃去初滤液和不溶物)→滤液待测
【标准曲线绘制】 50ml比色管 1 2 3 4 5 6 7 亚硝酸钠μg/mL 0.0 2.0 4.0 6.0 8.0 10.0 12.0 0.4%对氨基苯磺酸 2mL 静置 4分钟 0.2%盐酸萘乙二胺 1.0mlL 加水 定容 静置15分钟发色 15分钟 测每个的吸光度值(于538nm下,用2cm比色皿)绘制标准曲线 【样品测定】 吸40mL→于50mL比色管→按标准曲线操作→538nm测定→以标准曲线上查样品的含量
硝酸盐的检测—镉柱法 【原理】样品经沉淀蛋白质、除去脂肪后,溶液通过镉柱,使硝酸根离子被还原成亚硝酸根离子,再按照亚硝酸盐的测定方法测得亚硝酸盐总量,由总量减去亚硝酸盐含量即得硝酸盐含量。 在镉柱中,镉定量地将NO3-还原成NO2—而镉被氧化成氧化镉,经使用后的镉柱,用稀盐酸及水除去表面的氧化镉可重新使用。
说明与讨论 (1)本法为国家标准方法,最低检出限为1.4mg/kg。 (2)在制取海绵状镉和装填镉柱时最好在水中进行,勿使镉粒暴露于空气中以免氧化。镉柱每次使用完毕后,应先以25mL0.1mol/L HCl洗涤,再以水洗2次,每次25mL,最后用水覆盖镉柱。 (5)镉是有害的元素之一,在制作海绵状镉或处理镉柱时,其废弃液中含有大量的镉,不要将这些有害的镉放入下水道污染水源和农田,要经过处理之后再放入下水道。另外,不要用手直接接触镉,同时不要弄到皮肤上,一旦接触,立即用水冲洗。
二、漂白剂 • 漂白剂是指可使食品中有色物质经化学作用分解转变为无色物质,或使其褪色的食品添加剂。有还原型漂白剂和氧化型漂白剂两类。还原型漂白剂有:二氧化硫、亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、低亚硫酸钠、焦亚硫酸钠等,氧化型漂白剂有:过氧化氢、次氯酸等。 • 目前,在我国食品行业中,使用较多的是二氧化硫和亚硫酸盐。两者对人体健康有一定影响,因此在食品中添加应加以限制。1994年FAO/WHO规定了亚硫酸盐的ADI值为0~0.7mg/kg体重。并要求在控制使用量的同时还应严格控制SO2的残留量。
我国《食品添加剂使用卫生标准》GB2760-1996规定,亚硫酸盐可使用于葡萄酒、果酒,用量为0.25g/kg,残留量(以二氧化硫计)不得超过0.5g/kg。最大使用量:蜜饯、葡萄糖、食糖、冰糖、糖果、液体葡萄糖、竹笋、蘑菇及蘑菇罐头为0.40-0.60g/kg,薯类淀粉为0.20g/kg;残留量(以二氧化硫计):竹笋、蘑菇及蘑菇罐头不得超过0.04g/kg,液体葡萄糖不得超过0.2g/kg,蜜饯、葡萄、黑加仑浓缩汁不得超过0.05g/kg,薯类淀粉不得超过0.03g/kg。当溶液为 0.5-1%时,即产生毒性,一方面有腐蚀作用,另一方面破坏血液凝结作用并生成血红素,最后神经系统发生麻痹现象。 • 测定二氧化硫和亚硫酸盐的方法有:盐酸副玫瑰苯胺比色法、滴定法、碘量法、高效液相色谱法和极谱法等,其中常用的是前两种方法。
亚硫酸盐—盐酸副玫瑰苯胺光度法 【原理】 亚硫酸盐与四氯汞钠反应生成稳定的络合物,再与甲醛及盐酸副玫瑰苯胺作用生成紫红色络合物 ,于波长550nm处有最大吸收峰,且在一定范围内其色泽深浅与亚硫酸盐含量成正比,故可比较定量 。
HgCl2 + 2NaCl → Na2HgCl4(吸收液) Na2HgCl4 +SO2 +H2O →[HgCl2SO3]2- + 2H+ +2NaCl [HgCl2SO3]2- + HCHO → HgCl2 + HOCH2·SO3H 3HOCH2SO3H + 盐酸副玫瑰苯胺 → 紫红色络合物 吸收液用氯化汞与氯化钠作用生成四氯汞钠,当样品中的SO2与吸收液作用之后,生成一种稳定的络合物(可防止SO2的损失),这种络合物与甲醛及盐酸副玫瑰苯胺作用生成紫红色络合物,颜色的深浅与SO2浓度成正比,可在550nm下比色测定。
【样品处理】 1) 水溶性固体样品的处理(各种罐头类样品) 称取捣碎均匀样10g→用少量水溶解后转移到100mL容量瓶中→加0.5N NaOH4mL→摇匀→5min后加0.5N H2SO44mL→加Na2HgCl420mL→定容100mL→过滤备用 2) 淀粉类样品的处理(粉条、粉皮等) 称取粉碎均匀样10g→少量水溶解转移到100mL容量瓶中→加Na2HgCl420mL→浸泡4小时以上(若上层液不澄清,要加入亚铁氰化钾及乙酸锌溶液各2.5mL)→用水定容→过滤备用 3) 液体样品处理 吸取样液10ml→于100ml容量瓶中→加Na2HgCl4 20mL→定容→过滤备用
【标准曲线的绘制】 25ml比色管 1 2 3 4 5 6 SO2标液2μg/mL 0.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0ml 吸收液 10 9 8 7 6 5mL 氨基磺酸铵12g/L 1mL 1mL0.2%甲醛 1mL 显色剂 1mL 定容→静置20分钟→于550nm处测定→绘制标准曲线 【样品分析】 吸滤液5mlL→比色管中→加吸收液5ml→加0.2%甲醛1mL→显色剂1mL→混匀→定容静置20分钟→于550nm测定→根据样品的波长从标准曲线查相应SO2含量
[注意事项] (1)此反应的最适反应温度为20-25℃,温度低灵敏度低,所以标准系列管和样品在相同温度下显色; (2)亚硫酸和食品中的醛、酮和糖相结合,以结合型的亚硫酸存在于食品中。加碱是将食品中的二氧化硫释放出来,加硫酸是为了中和碱,这是因为总的显色反应是在微酸性条件下进行的。 (3)盐酸副玫瑰苯胺中的盐酸用量对显色有影响,加入盐酸量多,显色浅;加入量少,显色深,所以配制试剂时一定要按操作进行; (4)测定样品颜色较深的样品,可用10%活性炭脱色; (5)样品加入Na2HgCl4吸收液于100ml容量瓶中加水至刻度,摇匀,此液在24小时内很稳定,于4℃可使用一周; (5)此法测SO2采用HgCl2毒性很强,故实验时应注意安全。近几年有科技报道采用EDTA(乙二胺四乙酸)试剂代替四氯汞钠,可以做实验加以证实。
中和滴定法 • 原理:亚硫酸盐在酸性条件下加热,蒸出二氧化硫,然后用双氧水溶液吸收并氧化成硫酸,再用标准碱溶液滴定至终点橄榄色,然后根据消耗碱液计算出样品中SO2的含量。 • 我国为什么不采用中和滴定法作为国标,而是采用比色法为国标,且比色法中四氯汞钠又有毒性,这主要是因为中和法测SO2在样品处理时较麻烦,而且要通入N2,条件比较苛刻,所以采用比色法测定SO2,且准确度也较高。
三、 防腐剂—苯甲酸 [原理] 样品中苯甲酸在酸性溶液中可以随水蒸气蒸馏出来,与样品中非挥发性成分分离,用碱液吸收苯甲酸,然后用强酸在加热的条件下进行激烈氧化,使除苯甲酸以外的其它有机物氧化分解,将此氧化后的溶液再次蒸馏,用碱液吸收苯甲酸,第二次所得的蒸馏液中基本不含除苯甲酸以外的其它杂质。根据苯甲酸钠在225nm有最大吸收,故测定吸光度可计算出苯甲酸含量。(适用于牛奶等有机物含量高的样品) 样品中加1mL磷酸经水蒸汽蒸馏,得到的馏液主要是苯甲酸,还有其它酸物,再加入0.2N的K2Cr2O7和4N的H2SO4,将其它酸性物质氧化,再经过蒸馏,得到无杂物的苯甲酸,在225nm下测定。
山梨酸—硫代巴比妥酸比色法 【原理】 样品中的山梨酸在酸性溶液中,用水蒸汽蒸馏出来,经硫酸-K2Cr2O7氧化成丙二醛,再与硫代巴比妥酸反应生成红色物质,颜色的深浅与山梨酸含量成正比。(530nm下测定) 【操作方法】 ⑴ 样品制备 称取100g左右的样品→加蒸馏水250ml→在高速捣碎机上打浆→定容500ml→过滤→收集滤液
⑵ 山梨酸的提取 准确吸取两份滤液各20ml→分别放入两个250ml蒸馏瓶中→一个瓶加1mL磷酸、无水硫酸钠20g、水70ml、玻璃珠3粒→另一瓶加1N NaOH5mL、无水硫酸钠20g、水70mL、玻璃珠3粒→蒸馏→分别用装有10mL0.1N NaOH的100mL容量瓶接收馏液→当馏液收集到80mL停止蒸馏,用少量水洗涤冷凝管→定容→分别吸10mL溶液→分别置于两个100mL容量瓶→用0.01N NaOH定容→供样液、空白测定用 ⑶ 测定 准确吸样液、空白液2mL→于25mL比色管中→加水3mL→加2mL(K2Cr2O7+硫酸)混合液→在100℃水浴5分钟→加0.5%硫代巴比妥酸2mL→沸水浴加热7分钟→冷却→定容→于1cm比色杯在530nm处比色 ⑷ 标准曲线绘制
四、双硫腙比色法 1、铅的测定原理样品经消化后,在pH=8.5~9.0时Pb2+与双硫腙生成红色配合物,可被三氯甲烷、四氯化碳等有机溶剂萃取。红色的深浅与铅离子的含量成正比。加入盐酸羟胺、氰化钾、柠檬酸铵,可防止Fe2+、Cu2+、Zn2+等干扰。λ=510nm处测A
双硫腙比色法 2、锌的测定原理在pH=4.0~5.5时Zn2+与双硫腙生成紫红色络合物,溶于CCl4,加入硫代硫酸钠可防止Cu2+、Hg2+、Pb2+、Bi2+、Ag+、Cd2+的干扰。λ=520nm处测A
双硫腙比色法 3、汞的测定在pH=1~2酸性条件下,Hg2+与双硫腙生成橙红色配合物,用氯仿萃取,加入盐酸羟胺掩蔽铁、锌的干扰。λ=492nm处测A 4、镉的测定碱性溶液中,Cd2+与双硫腙反应生成红色螯合物,用氯仿萃取。λ=518nm处测A
双硫腙比色法测定铅含量 • 样品经消化后,在pH8.5~9.0的碱性条件下,铅离子与双硫腙生成红色配合物,可溶于三氯甲烷中。此红色配合物的深浅与铅离子的浓度成正比,可与标准系列比较定量。加入柠檬酸胺、氰化钾和盐酸轻胺等,防止铁、铜、锌等离子干扰。主要反应式为
2)仪器和试剂 • (1)仪器 • ①分光光度计。 • ②所用玻璃仪器均用10%~20%硝酸浸泡24h以上,用自来水反复冲洗,最后用水冲洗干净。 • (2)试剂 • A氨水 (1十1)。 • B盐酸 (1十1)。 • C酚红指示液 (1g/L):称取0·10g酚红,用少量多次乙醇溶解后移人I00mL容量瓶中并定容至刻度。
D 三氯甲烷 (不应含氧化物)。 • ①·检查方法:量取l0mL三氯甲烷,加25mI,新煮沸过的水,振摇3min,静置分层后,取10mL水液,加数滴碘化钾溶液 (150g/L)及淀粉指示液,振摇后应不显蓝色。 • ②·处理方法:于三氯甲烷中加入1/20~1/10体积的硫代硫酸钠溶液(200g/L)洗涤,再用水洗后加入少量无水氯化钙脱水后进行蒸馏,弃去最初及最后的1/10馏出液,收集中间馏出液备用。 • E 盐酸轻胺溶液 (200g/L):称取209盐酸轻胺,加水溶解至50mL,加2滴酚红指示液,加氨水 (1十1),调pH至8·5~9·0(由黄变红,再多加2滴),用二硫踪-三氯甲烷溶液提取至三氯甲烷层绿色不变为止,再用三氯甲烷洗2次,弃去三氯甲烷层,水层加盐酸 (1十1)呈酸性,加水至100mL。
F 柠檬酸镀溶液 (200g/L):称取509柠檬酸铰,溶于100mL水中,加2滴酚红指示液,加氨水 (1十1),调pH至8·5~9·0,用二硫腺-三氯甲烷溶液提取数次,每次10~20mL,至三氯甲烷层绿色不变为止,弃去三氯甲烷层,再用三氯甲烷洗2次,每次5mL,弃去三氯甲烷层,加水稀释至250mL。 • G 氰化钾溶液 (100g/L):称取10·0g氰化钾,用水溶解后稀释至100mL。 • H 淀粉指示液:称取0·5g可溶性淀粉,加5mL水搅匀后,慢慢倒人100mL沸水中,随倒随搅拌,煮沸,放冷备用。临用时配制。
I 硝酸 (1十99):量取lmL硝酸,加入99mL水中。 • J 双硫腙三氯甲烷溶液 (0·5g/L):保存冰箱中,必要时用下述方法纯化。 • 称取0·5g研细的双硫腙,溶于50mL三氯甲烷中,如不全溶,可用滤纸过滤于250mL分液漏斗中,用氨水 (1十99)提取3次,每次100mL,将提取液用棉花过滤至500mL分液漏斗中,用盐酸 (1十1)调至酸性,将沉淀出的双硫腙用三氯甲烷提取2~3次,每次20mL,合并三氯甲烷层,用等量水洗涤2次,弃去洗涤液,在50℃水浴上蒸去三氯甲烷。精制的双硫腙置硫酸干燥器中,干燥备用。或将沉淀出的二硫腙用200、200、100mL三氯甲烷提取三次,合并三氯甲烷层为双硫腙溶液。
K 双硫腙使用液:吸取l·0mL双硫腙溶液,加三氯甲烷至l0mL混匀。用lcm比色杯,以三氯甲烷调节零点,于波长5l0nm处测吸光度 (A),用下式算出配制100mL双硫腙使用液 (70%透光率)所需双硫腙溶液的毫升数 (V)。
L 硝酸-硫酸混合液 (4十1)。 • M 铅标准溶液:精密称取0.1598g硝酸铅,加10mL硝酸 (1十99),全部溶解后,移人100mL容量瓶中,加水稀释至刻度。此溶液每毫升相当于1.0mg铅。 • N 铅标准使用液:吸取l·0mL铅标准溶液,置于100mL容量瓶中,加水稀释至刻度。此溶液每毫升相当于10·0ug铅。
3)操作步骤 • (1)样品消化 • ①硝酸-硫酸法:称取已搅拌均匀的样品20.0g于500mL凯氏烧瓶中,放数粒玻璃珠,加浓硝酸、浓硫酸各l0mL,先以小火缓慢加热,待剧烈作用停止后,加大火力,待内溶物开始变棕色时,立即补加浓硝酸,直至溶液透明不再转深为止,继续加热数分钟至浓白烟逸出,冷却后加入20mL蒸馏水,继续加热至浓白烟逸出止,冷却。将内溶物转入100mL容量瓶中,用重蒸馏水定容至刻度。同时做空白试验。
②灰化法:粮食及其他含水分少的食品:称取20.0g样品,置于石英或瓷柑祸中,先在微火上加热至炭化,然后移入马福炉中,500℃灰化3h,放冷,取出柑塌,加硝酸 (l十1)lmL,润湿灰分,用小火蒸干,在500℃灼烧lh,放冷,取出柑锅。再加入2mL硝酸 (1十1),5mL水,加热煮沸,使灰分溶解,冷却后移人100mL容量瓶中,用水洗涤坩埚,洗液并入容量瓶中,加水至刻度,混匀备用。 • 含水分多的食品或液体样品:称取5.0g或吸取5.00mL样品,置于蒸发皿中,先在水浴上蒸干,再上述方法操作。
(2)铅标准曲线的绘制 分别吸取0.00、0.10、0.20、0.30、0.40、0.50mL铅标准使用液 (相当0、1、2、3、4、5ug/mL铅),置于125mL分液漏斗中,各加1%硝酸溶液lmL,加水至20mL。加2mL柠檬酸铰溶液 (20g/L),lmL盐酸轻胺溶液 (200g/L)和2滴酚红指示液,用氨水 (1十1)调至红色,再各加2mL氰化钾溶液 (100g/L),混匀。各加5.0mL双硫腙使用液,剧烈振摇lmin,静置分层后,三氯甲烷层经脱脂棉滤人lcm比色杯中,以三氯甲烷调节零点,于波长5l0nm处测吸光度,绘制标准曲线或计算一元回归方程。
(3)样品溶液及试剂空白的测定 吸取10.0mL消化后的样品溶液和同量的试剂空白液,分别置于125mL分液漏斗中,各加水至20mL。依铅标准曲线绘制操作顺序进行,最后于波长510nm处测得吸光度值,并与铅标准曲线比较定量。
X——样品中铅的含量,mg/kg (或mg/L); • m1——测定用样品消化液中铅的质量,ug; • m2——试剂空白液中铅的质量,ug; • V1——测定用样品消化液体积,mL • V2——样品消化液的总体积,mL
二硫腙比色法测定金属元素的方法要点 二硫腙(Dithizone)的性质: • 1)溶解特性:二硫腙(Dithizone),紫黑色结晶粉末,可溶于CHCl3及CCl4中;不溶于水,又不溶于酸,微溶于乙醇,可溶于氨碱性水溶液。 • 2) 易氧化: 二硫腙在有氧化剂(例如Fe3+、Cu2+等)存在,日光照射下易氧化为二苯硫卡巴二腙,此氧化物不溶于酸性或碱性水溶液,但溶于CHCl3或CCl4中,呈黄色至棕色,不与金属起鳌合反应。市售的二硫腙中常含有此化合物,故使用时必需精制纯化。另外, 为了防止样品中的Fe3+或Cu2+氧化二硫腙,应在水溶液中加入还原剂盐酸羟胺。
3) 二硫腙与金属离子的反应 二硫腙含有活泼的H+,能以一元酸或二元酸的形式与金属离子反应。大多数金属离子与二硫腙的反应生成单取代二硫腙盐。只有在碱性溶液中或二硫腙用量不足时才可能生成二取代二硫腙盐。 4) 二硫腙盐的萃取性能: 主要决定于水相中的pH值和二硫腙试剂的浓度。稳定性较高的二硫腙盐,如Pt,Pd,Au,Ag,Hg,Cu等的二硫腙盐,可从强酸性溶液中萃取;Bi、Zn、In、Sn等的二硫腙盐则可以从微酸性溶液中萃取;而Co、Ni、Pb和Cd等的二硫腙盐只能从中性或碱性溶液中萃取。
5)选择性: 二硫腙可与许多金属离子起反应,故其选择性不高,但可以通过控制pH值和应用掩蔽剂来提高它的选择性。常用的掩蔽剂有:EDTA,硫氰化物,氰化物,柠檬酸盐和酒石酸盐等。 • 6) 比色特性: 二硫腙与不同的金属离子所生成的金属鳌合物颜色从紫红色到橙黄色不等,当有机相(如氯仿, 四氯化碳)中过量的二硫腙很少时进行比色测定,近似于单色法;一般的情况下有机相中都有过量的二硫腙,此时的比色测定称为混色法,故要求二硫腙使用液的浓度都很低,一般在0.001%~0.0005%(W/V)。