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Chg.-ODN 的免疫刺激作用

Chg.-ODN 的免疫刺激作用. CPG 概念. 为非甲基化的胞嘧啶鸟嘌呤二核苷酸重复序列，即 CpG 基序。 一种免疫佐剂 作用靶点 TLR9 细胞免疫，体液免疫. Th1 免疫应答. 慢性乙型肝炎患者细胞免疫低下 HBV 免疫耐受，持续感染 肿瘤微小残留病的清除. CPG 提高 PBMC 中 Th1 细胞. Th1 占淋巴细胞百分比. CPG 提高 PBMC 中 Th1 、 Tc1 细胞百分率. *. *. * ： 与对照组比较， P<0.05. CPG 刺激 BPMC 分泌细胞因子. *. * ： 与对照组比较， P<0.05.

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Chg.-ODN 的免疫刺激作用

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Presentation Transcript

  1. Chg.-ODN的免疫刺激作用

  2. CPG概念 • 为非甲基化的胞嘧啶鸟嘌呤二核苷酸重复序列，即CpG 基序。 • 一种免疫佐剂 • 作用靶点TLR9 • 细胞免疫，体液免疫

  3. Th1免疫应答 • 慢性乙型肝炎患者细胞免疫低下 • HBV免疫耐受，持续感染 • 肿瘤微小残留病的清除

  4. CPG提高PBMC中Th1细胞

  5. Th1占淋巴细胞百分比

  6. CPG提高PBMC中Th1 、Tc1细胞百分率 * * *：与对照组比较，P<0.05

  7. CPG刺激BPMC分泌细胞因子 * *：与对照组比较，P<0.05

  8. CPG诱导PBMC杀伤靶细胞 • 收集CPG活化的PBMC • 细胞毒性实验：效应细胞为CPG活化的PBMC；靶细胞为CFSE预染的K562细胞。对照组效应细胞为未经CPG活化的PBMC。 • 效：靶＝20：1，混合培养2h。流式细胞术检测靶细胞死亡率。

  9. CPG诱导PBMC杀伤靶细胞

  10. CFSE染色靶细胞 • 浓度为5μmol/ L 的CFSE （2羧基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺酯）工作液 • 取对数生长期的靶细胞浓度108/ L • 细胞悬液与等体积CFSE 工作液混合 • 37 ℃孵育10 min。 • 离心洗涤两次后 • 悬浮细胞备用

  11. CFSE染色靶细胞

  12. 实验结果 CpG活化PBMC对K562细胞的杀伤作用(N=5) CPG活化PBMC 16.85±5.14 % 　　对照组　　　　8.62±2.83 % * *：与对照组比较，P<0.05

  13. CIK细胞杀伤靶细胞

  14. CIK细胞杀伤靶细胞

  15. 研究背景 通过主动免疫、过继特异性免疫、过继非特异性免疫等方式，清除慢性乙肝患者体内残存的HBV，达到治疗效果。

  16. 研究背景 B淋巴细胞具有抗原递呈细胞的性质，同时具有CpG-ODN受体：TLR-9。本研究探讨CpG-ODN诱导B淋巴细胞成为高效APC，使之具有类似于树突状细胞功能的可行性。

  17. TOLL受体

  18. TOLL受体在血细胞中的表达

  19. 活化B细胞负载核心抗原 • 磁珠分选B淋巴细胞 • CPG活化B淋巴细胞 • 核心抗原肽:FLPSDFFPSV-FITC • 流式细胞仪、荧光显微镜检测抗原负载状况

  20. 磁珠分选B细胞 分选前B细胞 7.89% 分选后B细胞 89.6%

  21. 活化B细胞负载抗原肽

  22. 活化B细胞负载核心抗原 荧光显微镜观察B细胞负载HBcAg18-27肽

  23. APC与T细胞作用机制

  24. CPG对B细胞抗原递呈相关分子的作用研究 • CpG2006、2216由上海生物工程技术服务有限公司合成，全硫代化修饰 • 对照组为含10%FCS的RPMI1640＋外周血PBMC，细胞量107/孔，37℃、5%CO2、48小时 • 实验组加入CpG2006或CpG2216，终浓度均为1umol/mL，余同上

  25. CD69表达率（%） T淋巴细胞 B淋巴细胞 CpG提高淋巴细胞CD69表达 * * *：与对照组比较，P<0.05

  26. B细胞CD80、CD86表达 对照组 加CPG-ODN组 加CPG-ODN组

  27. CD80、CD86表达率（%） CD80 CD86 CpG提高B细胞表面CD80、CD86的表达 * * * * *：与对照组比较，P<0.05

  28. B细胞MHC-Ⅰ、MHC-Ⅱ表达 对照组 加CPG-ODN组

  29. MHC表达量（MFI） MHC-ⅠMHC-Ⅱ CpG提高B细胞表面MHC-Ⅰ、MHC-Ⅱ的表达 * * * * *：与对照组比较，P<0.05

  30. 活化B细胞诱导CTL • 负载了抗原的活化B细胞与淋巴细胞混合培养(含IL-2的RPMI1640培养液). • 收集细胞,以五聚体技术检测HBV特异性CTL. • 实验组特异性CTL为0.50±0.19%，对照组为0.20±0.10%。

  31. 特异性CTL诱导 Pro5TM MHC Pentamers检测对照组和实验组HBcAg18-27抗原特异性CTL（Q2-1区）。前者为对照组（未加APC），后者为实验组（加APC）。

  32. 结论 • CpG能够活化B细胞，对T细胞无明显的作用 • CpG能够提高B细胞表面抗原递呈相关分子的表达 • CPG诱导PBMC产生高水平的IFN-γ • CPG诱导淋巴细胞向Th1、Tc1分化 • CPG增强PBMC对K562细胞的杀伤作用 • 通过B细胞介导, CPG可诱导特异性CTL

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