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第三章 菌种的生产与保藏. 菌种，好比农作物的种子，是食用菌生产的根本，其优劣直接影响食用菌的产量和质量。因此，从事食用菌菌种工作的单位都必须认真做好菌种的培育和保藏工作。. 一、菌种培育技术. 人工培育的菌种有母种、原种和栽培种之分。 1 ）母种（一级菌种）： 用孢子分离或组织分离等培育的菌丝体称为母种。 2 ）原种（二级菌种）： 把母种扩大到木屑、棉籽壳等为主的培养料上的菌种称为原种。 3 ）栽培种（三级菌种） ：由原种扩大培养成为生产上使用的菌种称为栽培种。 4 ）菌种： 实质上就是经过人工培养并进一步繁殖的食用菌的纯菌丝体。. 食用菌的制种程序. 孢子分离.
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第三章 菌种的生产与保藏 菌种，好比农作物的种子，是食用菌生产的根本，其优劣直接影响食用菌的产量和质量。因此，从事食用菌菌种工作的单位都必须认真做好菌种的培育和保藏工作。
一、菌种培育技术 人工培育的菌种有母种、原种和栽培种之分。 1）母种（一级菌种）：用孢子分离或组织分离等培育的菌丝体称为母种。 2）原种（二级菌种）：把母种扩大到木屑、棉籽壳等为主的培养料上的菌种称为原种。 3）栽培种（三级菌种）：由原种扩大培养成为生产上使用的菌种称为栽培种。 4）菌种：实质上就是经过人工培养并进一步繁殖的食用菌的纯菌丝体。
食用菌的制种程序 孢子分离 种菇 接种→母种（一级） 组织分离 接种→ →原种（二级） 培养 接种→→栽培种（三级） 培养 经过这样三级培养，食用菌菌丝数量大大增加。 一般1支试管菌种可繁殖4~6瓶原种，每瓶原种又可扩大繁殖60~100瓶栽培种。
原种、 栽培种
食用菌的制种程序 栽培种
(一) 菌种生产常用的设备和用具 菌种生产必须在严格的无菌条件下进行。为了保证制种的成功，除必须掌握制种技术外，还需要一些基本的设备和用品。 1、接种设备 ⑴ 接种室 要求: ①关闭严密，便于熏蒸、消毒； ②空间不宜过大，一般长、宽、高均为2m即可; ③接种室外面最好有一个缓冲室； ④墙壁、天花板和地面都要平整、光洁； ⑤内装有紫外灯和日光灯。
1、接种设备 ⑵接种箱 当菌种生产量不大时，可在接种箱内进行。它是用木条作成框架，以3mm厚的玻璃作箱壁。 要求： ①关闭严密，便于熏蒸； ②装有日光灯和紫外灯。 优点：搬动方便，操作人员不会受有毒气体危害。 缺点：容量小。
1、接种设备 ⑶超净工作台 原理：超净工作台是利用过滤除菌的原理，先将空气过滤，得到无菌空气，然后将无菌空气从风洞打出，使工作台范围内成为无菌状态。 要求：放置工作台的房间要清洁，空气流动小，最好安装灭菌灯。 优点：有效可靠，操作使用方便，在夏季接种时，使操作人员感到舒适。 每台3000元左右，有条件的食用菌专业户，可选用这种先进的接种设备。
(一) 菌种生产常用的设备和用具 2、灭菌设备 1）手提式：容量小，适于斜面试管及玻璃器皿等； 2）立式： 容量大，投资大； 3）卧式：容量大，投资大； 4）家用24或26 cm压力锅：母种、原种培养基 。 Ⅰ高压蒸气灭菌锅 2）、3）一般在菌种场或研究所应用。 优点：省时、省燃料、 效果好
灭菌设备 Ⅰ高压蒸气灭菌锅
(一) 菌种生产常用的设备和用具 2、灭菌设备 Ⅱ 常压灭菌锅 目前农村生产栽培种的必备设备，实际上是一种大型蒸笼式煮灶。底部为铸铁大锅，上部为圆形木桶，桶内装数层供放培养基的格架。桶盖装有活络搭及密闭的橡皮圈，由于锅内温度最高是100℃，所以灭菌时间需维持10~12h，才能达到灭菌效果。
(一) 菌种生产常用的设备和用具 3、培养设备 ⑴ 培养室 大小：不宜过大，一般以20℃~25℃，培养5000~6000瓶菌种为宜，太大不易保温和管理。 要求：干净、通风、保温，应设有调温设备，使室温保持在20℃~25℃。门窗应设铁纱，以防鼠、虫为害。 ⑵ 生化培养箱 是专业工厂生产的恒温电器设备，用于培养母种或少量原种，可以根据需要任意温度调节。
菌种瓶：盐水瓶、罐头瓶 原种、栽培种 聚丙稀袋 聚乙稀袋 菌种袋 (一) 菌种生产常用的设备和用具 4、培养菌种的容器 母种：试管，常用规格20×180~200mm，18×180mm等。 规格有：12~15×30~35 cm，17×35~45 cm
(一) 菌种生产常用的设备和用具 5、接种工具 移植菌种于培养基上的工具称接种工具，主要有以下几种： 接种针、环、刀、钩、铲、锄、枪等；
(一) 菌种生产常用的设备和用具 6、常用的消毒药品 ⑴ 70%酒精：一般用于手、种菇表面消毒； ⑵ 0.1%升汞：常用于玻璃器皿、非金属器械及种菇表面消毒； ⑶ 0.1%KMnO4：一般用于用具、器皿消毒；
(一) 菌种生产常用的设备和用具 6、常用的消毒药品 ⑷ 5%石炭酸：喷洒墙壁、地面及擦洗桌面等，也可用来苏尔代替； ⑸ 2%来苏尔、新洁尔灭：用法同上； ⑹甲醛（福尔马林）：用于菇房和接种箱等空气消毒； 方法：关闭门窗消毒，自行气化； 用量：10mL甲醛＋5g KMnO4／立方米。
(一) 菌种生产常用的设备和用具 (二) 母种生产技术 1、母种培养基 食用菌母种培养基的种类繁多，由于不同营养类型的食用菌对营养物质的要求不同，所以，在培养不同食用菌母种时，应选择适宜该菌种的培养基。 母种培养基要求营养丰富、完全、氮源、维生素的比例应高。 现将食用菌常用的母种培养基列举如下 ：
(一) 菌种生产常用的设备和用具 (二) 母种生产技术 ⑴ 配方 ①马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA） 马铃薯200g、葡萄糖（或蔗糖）20g、琼脂20g、H2O 1000mL、pH 6.5。 适用于一般食用菌母种分离与培养，但草菇、猴头菌等在此培养基上生长不良。
(二) 母种生产技术 ②综合马铃薯培养基 马铃薯200g、葡萄糖（或蔗糖）20g、KH2PO4 2g、MgSO4 0.5g、维生素B1 10mg、琼脂20g、H2O 1000mL、pH自然。 适合培养草菇、猴头菌、灵芝及各种食用菌菌种分离、保藏。
(二) 母种生产技术 ③胡萝卜葡萄糖琼脂培养基 胡萝卜200g、葡萄糖（或蔗糖）18~20g、琼脂20g、H2O 1000mL、pH自然。
(二) 母种生产技术 ④玉米粉培养基 玉米粉40g、葡萄糖（或蔗糖）10g、琼脂20g、H2O 1000mL、pH自然； 适用于大多数食用菌菌丝的生长。 ⑤马铃薯、葡萄糖、蛋白胨、琼脂培养基 马铃薯200g、葡萄糖（或蔗糖）20g、蛋白胨10g、琼脂20g、H2O 1000mL、pH自然； 适用于培养和保藏多种食用菌。
(二) 母种生产技术 ⑥黄豆芽、松针培养基 黄豆芽250g、松针50g、葡萄糖（或蔗糖）20g、琼脂20g、H2O 1000mL、pH 5~5.5。 将松针、黄豆芽按量称好，加水煮30min，取滤液，加入葡萄糖、琼脂，充分搅拌，使琼脂熔化，补水至1000ml，即分装试管。 主要用于培养竹荪母种。
(二) 母种生产技术 ⑦苹果汁培养基 苹果100g、蛋白胨2g、蔗糖20g、琼脂20g、H2O 1000mL； 主要用于草菇培养 （配制方法同PDA）
⑴ 配方 ⑵ 配制方法（以PDA为例） 马铃薯（去皮、去芽眼）→切成片→称取200g＋1000mL H2O→煮沸→双层纱布过滤→取滤液并补足1000mL＋琼脂→熔化＋其它营养物质→调节pH（用HCl或NaOH）→分装试管→灭菌（高压蒸气灭菌15-30min）→制成斜面→检查灭菌效果（即28~30℃培养2~3d） 其它天然培养基或综合培养基，如：玉米粉、黄豆粉、胡萝卜、麸皮等原料，加适量水煮汁过滤，取滤液与其它成分混合。
(二) 母种生产技术 2、母种分离 有性 孢子分离 组织分离 基质分离 母种分离方法 无性
1）单孢子分离法：培养基上只接种1个担孢子，使它萌发成菌丝体而获得纯菌种的方法。 如：双孢蘑菇、草菇单个孢子分离得到菌丝便能结实。 （一个孢子→萌发→菌丝体→纯种） 孢子分离法 2）多孢子分离法：许多孢子接种于同一培养基上，使它们萌发自由交配来获得纯菌种的方法。如：香菇、平菇、金针菇、毛木耳等。 （多个孢子→萌发→菌丝体→纯种） ⑴孢子分离法 利用孢子在适宜培养基上形成菌丝来获得纯菌种的方法。
(二) 母种生产技术 下面先解释二个基本概念 1）同宗配合：同一担子孢子萌发产生的两条菌丝之间进行结合便能生育（自交亲合、可孕，类似于高等植物自花授粉），可用单孢子分离。 如：双孢蘑菇、草菇 2）异宗配合：同一性别菌丝之间不亲合，只有两条性别不同的菌丝交配才能产生子实体。 大多数食用菌属此类型，需用多孢子分离法。
(二) 母种生产技术 担子菌亚门中，约10%菌类属同宗结合，90%以上是异宗配合，所以单孢子分离对大多数食用菌不适用，只有育种时才采用。 此法技术复杂，生产上很少采用，在此不作详述。
(二) 母种生产技术 多孢子分离简单易行，生产上经常采用，多孢子分离的具体操作方法有以下几种： ①整菇插种法：伞菌常用此法采得孢子。 即选择成熟度适当的优良种菇，在无菌操作下，插入无菌孢子采集器内，置适温下让其自然弹散孢子。用接种环取少量孢子，放入试管斜面上培养。 种菇选择：菌丝生长健壮，无病虫杂菌，出菇均匀，转潮较快，菇形圆整，菌盖肥厚，达八九成熟。 参见P48
搪瓷盘（大号培养皿） 培养皿 种菇支架 玻璃钟罩（大漏斗） 孢子采集器 (二) 母种生产技术 孢子采集器是用来采集食用菌孢子的一种装置。 参见P48
耳片 培养基 ②悬钓法 此法主要用于耳类（黑木耳、毛木耳、银耳等）孢子的采集。 耳片（表面消毒） → 悬挂于培养基上方→培养→ →取出挂钩与耳片→培养→挑取先端菌丝→转管纯化→母种 12~24h 参见P48
⑵组织分离法 参见P45 组织分离：指通过菇体组织分离纯种。 优点：操作简便、取材广泛、不易变异，保持原菌种优良种性。 方法： ①选择种菇（出菇早、无病虫害、柄短、肉厚、大小适中、5~6分成熟） ②组织分离
⑵组织分离法 参见P45-46 选择种菇→表面消毒（75%酒精或0.1%升汞）→撕成两半→取菌柄菌盖交界处→小块菌肉→移入PDA→培养→观察→转管→纯种 上述分离物在25℃下，经3d~5d可看到分离物表面长出白色绒毛状丝，每隔1d~2d检查1次，随时淘汰霉菌、细菌污染的培养物，培养10d~15d，再作1次转管即得到纯种。
⑵组织分离法 注： ⑴取组织块不要贪大，因组织块小易定植; ⑵有些食用菌不易用组织分离法获纯种； ⑶不同的食用菌切取部位和消毒方法不同。 如：1）红菇、乳菇等，因它们菇体细胞已泡囊化，再生能力极弱； 又如：2）银耳和木耳等胶质菌，它们子实体中菌丝含量极少，组织分离法不易成功。而只能取其生长的基质即菇木、耳木分离。
⑶基内菌丝分离法（基质分离法） 参见P46-47 概念： 由菇木、耳木、培养料等食用菌生长基质中的菌丝分离培养而成。这是利用潜在于寄主组织内的菌丝体获得纯种的方法。 （常用于银耳及木耳菌种分离）
⑶基内菌丝分离法（基质分离法） 参见P46-47 段木内菌丝分离法： 取1~2cm菇木、耳木（子实体着生部位）→去皮→消毒（75%酒精或0.1%升汞浸泡1min）→切去四周木块→切成火柴杆粗细，0.5 cm长的小木梗→取1根放入试管斜面上→培养→取菌丝→转管纯化
(二) 母种生产技术 3、菌种提纯与扩大繁殖 用孢子、组织或基质分离法得到的菌种，一般不宜直接用于生产，必须经过提纯方可应用。 ⑴提纯：选稀疏单菌落→边缘取菌→接种试管斜面（3~5支）→培养→纯菌种。 ⑵扩大繁殖：提纯的母种或从有关单位引进的母种，数量均很少，应扩大繁殖后再用。 在母种繁殖时，最好一次多移些，不易多次转管，以免影响出菇率，降低产量和质量。 一支斜面母种可移接40支左右斜面试管。
(二) 母种生产技术 4、质量检验 对分离、引进或转管扩大的菌种，应经过质量鉴定，选优去劣，方可使用。 1）检验方法 ①外观鉴定 优良菌种：菌丝浓白、粗壮、富有弹性，则生命力强。如有子实体或茶褐色被膜，只要除去仍可使用。 老化菌种：菌种已收缩、干燥或菌丝体自溶产生了大量红褐色液体，说明生活力弱，不可使用。
(二) 母种生产技术 参见52 ②显微镜检验 挑取少许菌丝于载玻片上，加蒸馏水1滴，盖上盖玻片，观察菌丝形态是否为培育的菌种。 ③菌丝生长速度 将其接种到适宜斜面培养基上，在适温下培养。凡菌丝生长较快、整齐、浓密而健壮的就是优良母种。
(二) 母种生产技术 参见52 ②显微镜检验 ③菌丝生长速度 ④出菇试验 进行子实体产量和品质评比。 经以上检验，通过综合评比，选出菌丝生长速度较快，子实体生长健壮、品质好、产量高的母种，即可供生产上使用。
(二) 母种生产技术 2）检验标准 ①首先要辨认分离或引进的是不是所需要的菌种； ②有无杂菌污染，是否老化。
简 答 题 1、食用菌生产中常用的设备和用具有哪些？ 2、什么叫组织分离法？写出组织分离法的步骤和注意事项。 3、写出PDA培养基配方及配制方法。
(二) 母种生产技术 (三) 原种和栽培种的生产技术 原种和栽培种的生产，无论是培养基成分，配制方法和灭菌方法基本上是相同的。 1）原种：是由试管斜面培养基培养的母种作种源接种而成，主要用于繁殖栽培种，也可直接用于生产。（母种→原种） 2）栽培种：由原种作种源扩大而成，只能用于生产。（原种→栽培种)
