Κύριοι φαινότυποι μικροβιακής αντοχής και η ερμηνεία τους: Σταφυλόκοκκοι

1. Κύριοι φαινότυποι μικροβιακής αντοχής και η ερμηνεία τους: Σταφυλόκοκκοι Ίρις Σπηλιοπούλου Αναπληρώτρια Καθηγήτρια Εργαστήριο Μικροβιολογίας Τμήμα Ιατρικής, Πανεπιστήμιο Πατρών

2. Micrococcaceae • Planococcus (citreus, halobius) • Micrococcus (luteus, lylae, varians, roseus, agilis, kristinae, nichinomyaensis, sedentarius, halobius) • Rothia (Stomatococcus mucilaginosus) • Staphylococcus : 38 είδη

3. Gram-θετικοί κόκκοι Bacitracin (0.04U) Staphylococcus Micrococcus

4. Gram (+) κόκκος Καταλάση (+)

5. Staphylococcal Species (-) Tube Coagulase (+) (-) PYR broth hydrolysis (+) S. aureus S. intermedius S. hyicus S. schleiferi subsp. coagulans (R) Novobiocin (S) (R) Novobiocin (S) (-) b-glucosidase (+) S. saprophyticus S. cohnii subsp. cohnii S. cohnii subsp. urealyticum S. sciuri S. xylosus S. cohnii subsp. urealyticum (-) Alkaline phsophatase (+) (-) Ornithine (+) S. schleiferi subsp. schleiferi S. simulans S. caprae S. haemolyticus S. simulans S. capitus subsp. urealyticus S. auricularis (-) Alkaline phsophatase (+) S. lugdunensis S. captitus S. captitus subsp. urealyticus S. warneri S. homminis (R) Polymyxin B (S) (-) Voges-Proskauer (+) S. caprae S. hyicus S. epidermidis

6. Ταυτοποίηση CNS με βάση την αντοχή τους σε αντιβιοτικά

7. Alexander Fleming 1928 Βραβείο Nobel 1945

9. Πώς αποκτούν αντοχή στα αντιβιοτικά οι Σταφυλόκοκκοι;

10. Vancomycin, Teicoplanin Penicillins Cephalosporins Monobactams Carbapenems Quinolones Erythromycin (Macrolides) Chloramphenicol Clindamycin Aminoglycosides: Gentamicin, Tobramycin Kanamycin Amikacin, Netilmicin

12. Minimum inhibitory concentration (MIC)

13. Minimum inhibitory concentration (MIC) • E test OX

14. Μέθοδος των δίσκων και διάχυσης σε άγαρ • Müller-Hinton agar: 4 mm, pH 7.2∼7.4 σε RT • Εναιώρημα:0.5 McFarland (1.5 X108 CFU/mL)

15. Στέλεχος αναφοράς:S.aureus ATCC 25923 Συχνότητα ελέγχου: μια φορά την εβδομάδα Όταν αλλάζουμε κάποιο αντιδραστήριο Επώαση 24 ώρες στους 350C

16. ※β-λακταμικά αντιβιοτικά

17. Ανθεκτικές στις b-λακταμάσες • Methicillin • Oxacillin • Cloxacillin • Dicloxacillin

19. NAG NAG NAG NAG NAG NAMA NAMA NAMA NAMA NAMA L-ala L-ala L-ala L-ala L-ala D-glu D-glu D-glu D-glu D-glu L-lys L-lys L-lys L-lys L-lys 5 gly 5 gly 5 gly 5 gly 5 gly D-ala D-ala D-ala D-ala D-ala D-ala D-ala D-ala D-ala D-ala Σύνθεση κυτταρικού τοιχώματοςπολυμερισμός

20. NAG NAMA NAG NAMA NAG NAMA L-ala D-glu L-ala L-ala D-glu D-glu L-lys 5 gly D-ala L-lys L-lys 5 gly 5 gly D-ala D-ala D-ala D-ala D-ala τρανσπεπτιδάσες Οι β-λακτάμες μοιάζουν με το διμερές: D-ala-D-ala, συνδέονται με το ένζυμο, και αναστέλλουν τη γεφύρωση D-ala D-ala D-ala D-ala D-ala D-ala L-lys L-lys L-lys D-glu D-glu D-glu L-ala L-ala L-ala NAMA NAG NAMA NAG NAMA NAG

21. Β-λακτάμη λυσίνες PBP PBP PBP

26. Δομή της κασέτας SCCmec

27. Έλεγχος αντοχής στην oxacillin με τη μέθοδο των δίσκων και διάχυσης σε άγαρ διάμετρος (mm) Cefoxitin (30 g) S. aureus/lugdunensis  19*  20** CoNS  24*  25** * Αναφέρεται ως oxacillin/methicillin-ανθεκτικό ** Αναφέρεται ως oxacillin-ευαίσθητο CoNS, coagulase-negative staphylococci 20-25mm: Latex test για την PBP2a M100-S14 (M2, M7); Table 2C

28. Staphylococcus - Oxacillin MIC (µg/ml): ΕΜΕΑ S. aureus  2 -  4 CoNS  0.25 - 0.5 DD (mm): ΕΜΕΑ S. aureus 10 11-12  13 CoNS  17 -  18 M100-S14 (M2, M7); Table 2C

33. Συχνότητα απομόνωσης στελεχώνMRS στο ΠΓΝΠ

34. Methicillin Methicillin-resistant S. aureus (MRSA) [1970s] Vancomycin [1997] [1990s] Vancomycin Vancomycin-resistant intermediate- enterococci (VRE) resistant S. aureus (VISA) Αντοχή στα αντιβιοτικά τουS. aureus Penicillin Penicillin-resistant S. aureus [1950s] S. aureus Vancomycin- resistant S. aureus

35. Πώς δρουν τα γλυκοπεπτίδια;Κυτταρικό τοίχωμα σταφυλοκόκκων

36. H O N C C O * * * * * R__D-ala CH3 Vancomycin

37. G G M G M M L-ala D-gln X-NH2 D-ala D-ala M M G G M L-ala D-gln X-NH2 D-ala D-lactate or D-serine G G G M M γλυκοπεπτίδιο Αντοχή στα γλυκοπεπτίδια

38. Μειωμένη ευαισθησία στα γλυκοπεπτίδια

40. Vancomycin Intermediate S. aureus • Μέθοδος των δίσκων: • Vancomycin: ≥ 15 mm ευαίσθητο • Teicoplanin: ≥ 14 mm ευαίσθητο • Etest: BHIA 200μL από 2 McF, 48 h επώαση • Vancomycin/teicoplanin: ≥ 8 μg/ml ανθεκτικό • Teicoplanin: ≥ 12 μg/ml ανθεκτικό • Πληθυσμιακή ανάλυση(100 μl από 2McF) • Vancomycin: ≤ 2 (4) μg/ml ευαίσθητο ≥ 16 (32) μg/ml ανθεκτικό • Teicoplanin: ≤8 μg/ml ευαίσθητο ≥ 32 μg/ml ανθεκτικό

42. VISA MIC=8μg/ml Μάιος 1996: Ιαπωνία

43. Χρόνος εμφάνισης αντοχής σε Vancomycin και Linezolid Moellering – January 2003

44. Μελέτη της αντοχής στα γλυκοπεπτίδια σε 1337 στελέχη σταφυλοκόκκων (Λάρισα, Πάτρα,Αθήνα). Van-αρνητικά

45. Αναστολείς πρωτεϊνοσύνθεσης ΑντιβιοτικόΔράση Θέση σύνδεσης Aminoglycosides -κτόνο 30S, 50S Tetracyclines -στατικό30S Chloramphenicol - στατικό50S Erythromycin - στατικό50S Clindamycin - στατικό50S Quinupristin/dalfopristin - κτόνο 50S Linezolid- στατικό50S

46. αμινογλυκοσίδες χλωραμφενικόλη τετρακυκλίνες 50S 30S μακρολίδες κλινταμυκίνη streptogramins χλωραμφενικόλη μακρολίδες αμινοξύ κωδικόνιο mRNA tRNA

47. Macrolides: Erythromycin, Azithromycin, Clarithromycin Η Clarithromycin έχει Methoxy group

48. 39

49. Staphylococcus spp. Erythromycin / Clindamycin msrA = macrolide streptogramin resistance erm = erythromycin ribosome methylase *επαγωγή για τη διάγνωση της αντοχής

50. “D Test” – θετική δοκιμασία Επαγώγιμη αντοχή στην clindamycin (erm-mediated) Δίσκος 2 g clindamycin 15 mm - 26 mm από δίσκο 15 g erythromycin 15 - 26 mm