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保健食品中摻加 西藥及類緣物成分之檢驗

保健食品中摻加 西藥及類緣物成分之檢驗. 林哲輝 2010 年 5 月 14 、 17 日. 報 告 大 綱. 壹、前言 貳、材料與方法 參、未知類緣物之探討 肆、經驗分享 - 優質管理 伍、 結果. 壹、前 言. 近年來 保健觀念 深植人心，國際市場上 保健 食品盛行，其安全性也備受各國重視。 一般消費者認定「食品」是安全無副作用。 或有業者 為求速效 … ，於 保健 食品中摻加西藥。 由於對使用之西藥劑量、藥物間 相互作用不瞭解 ，消費者於不知情下長期服用，危害堪慮。 為保障消費者健康， 未許可 於 保健 食品中摻西藥。. 貳、 材料與方法.

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保健食品中摻加 西藥及類緣物成分之檢驗

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  1. 保健食品中摻加 西藥及類緣物成分之檢驗 林哲輝 2010年5月14、17日

  2. 報 告 大 綱 壹、前言 貳、材料與方法 參、未知類緣物之探討 肆、經驗分享-優質管理 伍、結果

  3. 壹、前 言 • 近年來 保健觀念 深植人心，國際市場上保健食品盛行，其安全性也備受各國重視。 • 一般消費者認定「食品」是安全無副作用。 • 或有業者 為求速效 …，於保健食品中摻加西藥。 • 由於對使用之西藥劑量、藥物間相互作用不瞭解，消費者於不知情下長期服用，危害堪慮。 • 為保障消費者健康， 未許可於保健食品中摻西藥。

  4. 貳、材料與方法 一、檢體來源 衛生機關抽(稽)查、衛生機關之消費者服務中心、司法檢警調機關、關稅局、其他

  5. 二、選定檢驗類別 因檢體來源甚為複雜，潛在性基質干擾未知，且申請檢驗者 常未標明處方組成，摻加之西藥 標的成分 亦未知，且常摻加與治療效能無關未知成分，檢驗頗為困難。 為求 系統化快速檢驗，就治療效能、副作用或指定檢驗項目，選定(40)檢驗類別，推測可能摻加的西藥。

  6. 檢 驗 類 別

  7. 三、檢驗方法 • 取約一日服用量檢體，經處理後加適量95﹪乙醇浸泡，以超音波於室溫振盪萃取30分鐘，靜置，取上清液過濾供作檢液。 • 取適量檢液，點注於TLC板 (Merck silica gel 60 F254)，以五種各為酸性、鹼性及不同極性之中性溶媒，於展開槽展開分離。

  8. 3. TLC板取出風乾後， 4.以紫外燈254 nm及366 nm檢視， 5.刮取層析板上可疑斑點，加95% 乙醇，超 音波振盪溶解， 6.置離心機離心。 7.所得濾液再以紫外光分光光度計測其吸收圖譜。

  9. 8. 並與西藥標準品圖譜比對。篩選出摻加之可疑成分，再次與西藥對照標準品比對展開分離， 9.視成分特性，噴上適當之呈色劑， 10. 觀察呈色後斑點顏色及Rf值，是否與對照標準品一致。 11.另配合以GC/MS、HPLC或LC/MS/MS進行追查確認。

  10. 呈 色 劑 • Dragendorff’s spray reagent • 50%Sulfuric Acid-Ethanol spray reagent • Iodine vapor • Tetrazolium blue spray reagent • p-Dimethylaminobenzaldehyde spray reagent • Ninhydrin spray reagent • Anisaldehyde-Sulfuric Acid spray reagent • 2,4-Dinitrophenylhydrazine spray reagent

  11. p-Dimethylaminocinnamaldehyde spray reagent • 5% Ferric Chloride spray reagent • Iodoplatinate spray reagent • Iodoplatinate （acidified）spray reagent • 1% Mercurous Nitrate spray reagent • Potassium Permanganate spray reagent • Potassium Permanganate（acidified）spray reagent • 1%Vanillin-Sulfuric Acid spray reagent

  12. 資 料 庫 • 合成藥物UV圖 : 419 種 • 藥材成分UV圖 : 61種 • GC/MS : 519 種(實驗室自行建置) ， 275000 種(Wiley) ， 6000種 (PMW) ，… • LC/MS/MS : 367種(實驗室自行建置)

  13. 參、未知類緣物之探討一、緣 起 • 摻西藥檢驗，因不斷改進方法，收集標準品，建立檔案，使檢驗工作 得以迅速精準的進行。 • 近來保健食品盛行，經檢驗 除部分添加許可上市藥品外，尚有未經許可之類緣物成分。 • 類緣物因首次出現，無法先行價購標準品建立數據比對，且標的成分物化性、其他添加成分 及 基質潛在干擾不明，異於例行鑑別檢驗； • 需以基礎化學手法探討，檢體經純化、分離後 ，所得標的成分純化物，再測定各種儀器圖 譜，反覆推斷，方能確認結構。

  14. 二、類緣物 檢出實例 1. Acetildenafil （威而鋼 sildenafil analogue ） 2. Piperidenafil （樂威壯 vardenafil analogue ） 3. Hydroxyhomosildenafil （威而鋼 sildenafil analogue ） 4. N-Desmethylsibutramine （諾美婷 sibutramine analogue ）

  15. sildenafil acetildenafil (1) UV spectra of sildenafil and acetildenafil(1)

  16. sildenafil acetildenafil (1) The LC/MS/MS ES+daughter ion scan of sildenafiland acetildenafil (1)

  17. What’s this compound ? M-1: 465 m/z M+1: 467 m/z The LC/MS/MS ES+ / ES- mass scanof acetildenafil (1)

  18. 1 : Partiton Sample MeOH extracted, filtrated Conc. MeOH ext. residue Partitioned with CH2Cl2 / H2O Acidify: 2 % HCl pH = 5~6 CH2Cl2LayerH2O Layer Conc. Partition with CH2Cl2 / H2O Alkalify: ammonia water pH = 8~9 CH2Cl2 LayerH2O Layer TLC checked Washed by H2O CH2Cl2 LayerH2O Layer Conc. Filtrated, Recrystalized by CH2Cl2 acetildenafil(1) ,white powder

  19. vardenafil piperidenafil (2) M+1: 460 m/z The LC/MS/MS ES+daughter ion scanof vardenafil and piperidenafil (2)

  20. (2) UV spectra of vardenafil and piperidenafil (2)

  21. 2 : Column chromatography Sample 95%EtOH extracted filtrated Conc. EtOH ext. residue Si-gel column CHCl3 → MeOH TLC, Conc. Recrystallized by MeOH Piperidenafil (2),white crystal

  22. sildenafil Hydroxyhomosildenafil (3) M+1: 505 m/z The LC/MS/MS ES+daughter ion scanof sildenafiland hydroxyhomosildenafil(3)

  23. sildenafil UV 相似？ hydroxyhomosildenafil (3) UV spectrum of sildenafil and hydroxyhomosildenafil (3)

  24. 3 : Crystallization • powder sample • extracted with 95% ethanol • ultrasonic shakingat room temp. for 30 minutes • filtrated • sample extract wasstored at 4°C overnight • Hydroxyhomosildenafil (3),(white crystal )

  25. - 42 m/z 114 sibutramine -14 m/z 72 100 N-Desmethylsibutramine(4) 58 The GC/MS fragmentation of sibutramine and N-Desmethylsibutramine(4)

  26. sibutramine N-Desmethylsibutramine(4) UV spectrum of sibutramine and N-Desmethylsibutramine (4)

  27. 4 :Partiton Powder sample Solved in H2O Alkalized with NaOH to pH 8 ~ 9 Filtrate, partitioned with CH2Cl2 H2O layerCH2Cl2 layer Washed by H2O H2O layerCH2Cl2 layer Passed over anhydrous MgSO4 Evaporated to dryness in vacuum oven N-Desmethylsibutramine(4), pale yellow liquid

  28. 三、結 構 鑑 定(案例) • 未知 標的成分 經分離純化 • 測定物化性︰ • 核磁共振儀（1H-NMR, 13C-NMR, COSY, DEPT, HMQC, HMBC） • 紅外線吸收光譜儀（IR ） • 質譜（HRMS, FAB） • X-ray, EA等圖譜 • 判讀 確定構造

  29. Ex : 1 M.W.466 The EIMS fragmentation of acetildenafil (1)

  30. -CH3 (H-31) N-CH2- (H-23) N-CH2- (H-30) 3.7 2.3 0.9 1H NMR spectrum of acetildenafil (1)

  31. C=O (C-22) 2O C C-30 C-23 195 64 51 13C NMR spectrum of acetildenafil (1)

  32. 64 51 2O C 2.3 methylene 3.7 HMQC spectrum of acetildenafil (1)

  33. N-CH2- (H-30) -CH3 (H-31) -CH3 (H-31) 0.9 N-CH2- (H-30) 2.3 ethyl COSY spectrum of acetildenafil (1)

  34. C=O 195 COSY ethyl N-CH2- N-CH2- Ar-H HMBC spectrum of acetildenafil (1)

  35. Sildenafil（Viagra 威而鋼） C22H30N6O4S M.W. 474 Acetildenafil (1) 四、類 緣 物 結 構 C25H34O3N6 M.W. 466

  36. Sildenafil（Viagra 威而鋼） C22H30N6O4S M.W. 474 Hydroxyacetildenafil C25H34N6O4 M.W. 482

  37. Sildenafil（Viagra 威而鋼） C22H30N6O4S M.W. 474 Homosildenafil C23H32N6O4S M.W. 488

  38. Sildenafil（Viagra 威而鋼） C22H30N6O4S M.W. 474 Hydroxyhomosildenafil (3) C23H32O5N6S M.W. 504

  39. Sildenafil（Viagra 威而鋼） C22H30N6O4S M.W. 474 Gendenafil C19H22N4O3 M.W. 354

  40. Sildenafil（Viagra 威而鋼） C22H30N6O4S M.W. 474 Thiosildenafil C22H30N6O3S2 M.W. 490

  41. Sildenafil（Viagra 威而鋼） C22H30N6O4S M.W. 474 Thiohomosildenafil C23H32N6O3S2 M.W. 504

  42. Sildenafil（Viagra 威而鋼） C22H30N6O4S M.W. 474 Hydroxythiohomosildenafil C23H32N6O4S2 M.W. 520

  43. Sildenafil（Viagra 威而鋼） C22H30N6O4S M.W. 474 Thioaildenafil C23H32N6O3S2 M.W. 504

  44. Piperidenafil (2) C22H29O4N5S M.W. 459 Vardenafil（Levitra 樂威壯） C23H32N6O4S M.W. 488

  45. Vardenafil 類緣物 C17H20N4O2 M.W. 312 Vardenafil（Levitra 樂威壯） C23H32N6O4S M.W. 488

  46. Vardenafil 類緣物 C24H31N5O3 M.W. 437 Vardenafil（Levitra 樂威壯） C23H32N6O4S M.W. 488

  47. Aminotadalafil C21H18N4O4 M.W. 390 Tadalafil (犀利士®)C22H19N3O4 M.W. 389

  48. N-Desmethylsibutramine (4) C16H24NCl M.W. 265.5 Sibutramine 諾美婷 C17H26NCl M.W. 279.5

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