1 / 15

Dibawakan Oleh : Mastura (20504017) Merry (20504009)

Mutasi Pada Gal83 Glycogen-Binding Domain Mengaktifkan Snf1/Gal83 Kinase Pathway Dengan Mekanisme Glycogen-Independent. Dibawakan Oleh : Mastura (20504017) Merry (20504009). Pendahuluan. Glycogen Storage. Glikogen  penyimpan karbohidrat Glikogen  jika glukosa  ( fase eksponensial )

jonny
Download Presentation

Dibawakan Oleh : Mastura (20504017) Merry (20504009)

An Image/Link below is provided (as is) to download presentation Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author. Content is provided to you AS IS for your information and personal use only. Download presentation by click this link. While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server. During download, if you can't get a presentation, the file might be deleted by the publisher.

E N D

Presentation Transcript

  1. Mutasi Pada Gal83 Glycogen-Binding Domain Mengaktifkan Snf1/Gal83 Kinase Pathway Dengan Mekanisme Glycogen-Independent Dibawakan Oleh : Mastura (20504017) Merry (20504009) 27 April 2005/ Metabolisme Glikogen/ Kel I/ Mastura (20504017)-Merry (20504009)

  2. Pendahuluan • Glycogen Storage 27 April 2005/ Metabolisme Glikogen/ Kel I/ Mastura (20504017)-Merry (20504009)

  3. Glikogen  penyimpan karbohidrat • Glikogen  jika glukosa  ( fase eksponensial ) • Glikogen  jika glukosa  ( fase stationer ) • Saccharomyces cerevisiae Snf1 kinase homolog dengan mamalian AMP-activated protein kinase (AMPK) • Keduanya berperan dalam regulasi metabolisme glikogen 27 April 2005/ Metabolisme Glikogen/ Kel I/ Mastura (20504017)-Merry (20504009)

  4. Snf1 kinase dan AMPK • Catalytic subunit : -subunit • Regulatory subunit : -subunit • Mediates heterotrimer formation : -subunit • Snf1 kinase • -subunit : Snf1 • -subunit : Snf4 • -subunit : Gal83, Sip1, Sip2 • Gal83 -subunit  memediasi interaksi Snf1 dan Sip4 27 April 2005/ Metabolisme Glikogen/ Kel I/ Mastura (20504017)-Merry (20504009)

  5. Latar Belakang • AMPK dan Snf1 kinase  penting untuk regulasi metabolisme glikogen • -subunit AMPK terdiri dari N-isoamylase domain  glikogen & enzim percabangan • Contoh : • Mutasi -subunit mempengaruhi glycogen storage  glycogen storage disease 27 April 2005/ Metabolisme Glikogen/ Kel I/ Mastura (20504017)-Merry (20504009)

  6. Tujuan • Untuk menentukan peran glycogen-binding domain pada -subunit in vivo • Untuk mengetahui pengaruhnya terhadap regulasi metabolisme glikogen • Menentukan mekanisme yang terjadi antara glycogen-binding domain dengan aktivitas Snf1 kinase/ AMPK 27 April 2005/ Metabolisme Glikogen/ Kel I/ Mastura (20504017)-Merry (20504009)

  7. Metodologi Penelitian • Strains and genetic methods • Plasmids • Ekspresi GBD Gal83 & Sip2 pada bakteri • S. cerevisiae strains • Medium yeast extract-peptone-dextrose • pRT12, pHW33, pHW39, pHW40  Gal83 • pHW30, pHW35, pHW38  Sip2 • Kultur ditumbuhkan (OD 600 nm)  ekspresi protein  pengambilan sel (sentrifugasi)  dilisis (PBS)  lisat (sentrifugasi dan kromatografi pada Ni-agarose 27 April 2005/ Metabolisme Glikogen/ Kel I/ Mastura (20504017)-Merry (20504009)

  8. Uji Pengikatan Glikogen • Uji Kandungan Glikogen • Immunoblot analysis • Microscopy • Glycogen-binding domain Gal83 atau Sip2 murni diinkubasi  sentrifugasi  supernatan dihilangkan, pellet dicuci identifikasi fraksi dengan elektroforesis  immunoblotting • Inokulasi kultur mid-log sentrifugasi  resuspensi dlm sodium karbonat  ditempatkan dalam heating block  glukosa yang dilepaskan dihitung menggunakan oksidasi glukosa oksidase • Protein dipisahkan oleh SDS-Page  dideteksi oleh anti-GFP antibodi • Nikon Eclipse E800 fluorescence microscope 27 April 2005/ Metabolisme Glikogen/ Kel I/ Mastura (20504017)-Merry (20504009)

  9. Sel ditumbuhkan dalam SC  inkubasi  filtrasi  kromatografi  uji aktivitas melalui fosforilasi SAMS peptide • Kinase assays • -Galactosidase assays • Preparation of RNA and Northern blot analysis • Transforman  SC glukosa  SC gliserol  Aktivitas -Galactosidase diuji • RNA diendapkan dengan etanol  elektroforesis  dilacak dengan 32P-labeled DNA 27 April 2005/ Metabolisme Glikogen/ Kel I/ Mastura (20504017)-Merry (20504009)

  10. Hasil Penelitian • Mutasi Gal83 & Sip2 menghasilkan Gal83W184A,R214Q dan Sip2W186A,R216Q • Mutasi residu pada GBD meniadakan pengikatan glikogen 27 April 2005/ Metabolisme Glikogen/ Kel I/ Mastura (20504017)-Merry (20504009)

  11. Double mutasi sip2gal83  akumulasi glikogen  • Mutasi Gal83 GBD  akumulasi glikogen  27 April 2005/ Metabolisme Glikogen/ Kel I/ Mastura (20504017)-Merry (20504009)

  12. Level protein • Distribusi nukleoplasmik • Aktivitas katalitik Snf1 27 April 2005/ Metabolisme Glikogen/ Kel I/ Mastura (20504017)-Merry (20504009)

  13. Mutasi Gal83 meningkatkan ekspresi RNA yang mengkode Glycogen Synthase • Mutasi GBD mempengaruhi Snf1/Gal83 pada sel yang tidak mengandung glikogen 27 April 2005/ Metabolisme Glikogen/ Kel I/ Mastura (20504017)-Merry (20504009)

  14. Kesimpulan • Mutasi Gal83 GBD mempengaruhi secara positif fungsi Snf1/Gal83 kinase • GBD mengatur fungsi Snf1/Gal83 kinase dengan mekanisme yang tidak bergantung pada glikogen • Adanya kemungkinan bahwa domain mengikat molekul lain yang mirip glikogen yang dapat mengatur aktivitas katalitik 27 April 2005/ Metabolisme Glikogen/ Kel I/ Mastura (20504017)-Merry (20504009)

  15. Terima Kasih 27 April 2005/ Metabolisme Glikogen/ Kel I/ Mastura (20504017)-Merry (20504009)

More Related