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第四节 动物细胞的培养 条件和培养基

第四节 动物细胞的培养 条件和培养基. 细胞体外培养基本条件 : ① 无菌 ②营养充足 , 防止有害物质 ③氧气. ④ 随时清除代谢有害物质 ⑤良好的生存外环境 ⑥及时分种. 一、动物细胞的培养条件 ⒈器材的清洗和消毒 ⑴器材的清洗 浸泡、刷洗、泡酸、冲洗 ⑵器材的消毒灭菌 物理消毒 化学消毒. ⒉ 水质 : 电阻值大于 18MΩ, 去热原。 ⒊ pH:7.2 ～ 7.4 ⒋ 渗透压 :290 ～ 300mOsm/kg ⒌ 温度 :37±0.5 C ⒍ 空气 : 氧的饱和质 60%, 氧分压

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第四节 动物细胞的培养 条件和培养基

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Presentation Transcript

  1. 第四节 动物细胞的培养条件和培养基 细胞体外培养基本条件: ①无菌 ②营养充足,防止有害物质 ③氧气

  2. ④随时清除代谢有害物质 ⑤良好的生存外环境 ⑥及时分种

  3. 一、动物细胞的培养条件 ⒈器材的清洗和消毒 ⑴器材的清洗 浸泡、刷洗、泡酸、冲洗 ⑵器材的消毒灭菌 物理消毒 化学消毒

  4. ⒉ 水质 :电阻值大于18MΩ, 去热原。 ⒊ pH:7.2～7.4 ⒋ 渗透压:290～300mOsm/kg ⒌ 温度:37±0.5 C ⒍ 空气:氧的饱和质60%,氧分压 4～0.7kPa

  5. 二、动物细胞的培养基的种类和组成 分3类: ⒈天然培养基 ⒉合成培养基 ⒊无血清培养基

  6. ⒈天然培养基 血清、羊水、腹水等,成分复杂、 成分不稳定 ⒉合成培养基 DME、 MEM、 DMEM、 HAM F12、 RPMI1640

  7. ⑴氨基酸 ⑵维生素 ⑶糖类 ⑷无机盐 ⑸其它成分 添加小牛血清：

  8. 添加小牛血清的作用 ⑴提供生长因子和激素 ⑵提供贴附因子和伸展因子 ⑶提供结合蛋白 ⑷提供必需脂肪酸和微量元素

  9. ⒊无血清培养基 ①提高重复性 ②减少微生物污染 ③供应充足稳定 ④产品易纯化 ⑤避免血清因素对细胞的毒性 ⑥减少血清中蛋白对生物测定 的干扰

  10. 无血清培养基加入添加剂 ⑴生长因子和激素 ⑵结合蛋白 ⑶贴附因子和伸展因子 ⑷有利细胞生长的因子和元素

  11. 第五节 动物细胞培养方法和操作方式 一、动物细胞大规模培养的方法 依细胞种类: 原代培养、 传代培养 依培养基: 液体培养、 固体培养

  12. 依培养器和方式: 静止培养、旋转培养、 搅拌培养、微载体培养、 中空纤维培养、 固定床或流化床培养

  13. 从生产实际分为: 悬浮培养 贴壁培养 贴壁-悬浮培养

  14. ⒈悬浮培养 让细胞自由的悬浮于培养基内 生长繁殖。 ⒉贴壁培养 让细胞贴附在某种基质上生长 繁殖的培养方法。 ⒊贴壁-悬浮培养

  15. ⒊贴壁-悬浮培养 ⑴微载体培养 ⑵包埋和微囊培养 ⑶结团培养

  16. 二、动物细胞培养的操作方式 ⒈分批式操作 ⒉半连续式操作 ⒊灌流式操作

  17. 第六节 动物细胞生物反应器及其检测控制系统 一、动物细胞生物反应器的类型及 其基本结构 ⒈搅拌式生物反应器 ⒉气升式生物反应器 ⒊中空纤维式生物反应器 ⒋透析袋或膜式生物反应器 ⒌固定床或流化床式生物反应器

  18. ⒈搅拌式生物反应器

  19. ⒉气升式生物反应器

  20. ⒊中空纤维式生物反应器

  21. 平床式中空纤维式生物反应器

  22. ⒋透析袋或膜式生物反应器

  23. ⒌固定床或流化床式生物反应器

  24. CellGen plus生物反应器

  25. 二、动物细胞生物反应器的检测控制系统 ⒈ 培养过程需检测的物化参数 直接在线检出 取样离线检测 检测后计算 ⒉ 主要参数的检测和控制方法

  26. ⒉主要参数的检测和控制方法 ⑴ 温度 ⑵ pH ① 在培养初期，控制进氧量 ② 当细胞密度提高后控制 NaHCO3的量

  27. ⑶溶氧 ⑷搅拌 ⑸进出液流量 ⑹其它

  28. 第七节 动物细胞制药的前景与展望 一、提高产量降低成本和改进质 量方面的研究 二、转基因动物的研究 三、组织工程的研究

  29. 一、提高产量、降低成本和改进质量方面的研究一、提高产量、降低成本和改进质量方面的研究 为了提高产量,要提高细胞表达水平。 为降低成本，须改进培养基配方。 为改进产品质量，关键是糖基化质量。 改进工艺，生产设备等

  30. 二、转基因动物的研究 自1982年Palimiter提出用转基因 动物来生产药用蛋白以来，发展迅 速。 优点：产量高成本低质量与天然一 样。 现还有不成熟之处。对动物和人的 健康的影响。

  31. 三、组织工程的研究 组织工程：通过对大量细胞的培养， 并用细胞直接作为一种治疗手段用于 临床，或用培养的细胞进一步加工构 成一种组织，如人造皮肤、人造肝脏、人造胰腺、人造血管、人造骨等并用于临床治疗。

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