1 / 7

20. 叶绿体色素含量的测定 ---- 分光光度法

20. 叶绿体色素含量的测定 ---- 分光光度法. 实验原理 利用 80% 丙酮提取叶绿体色素，叶绿素 a 、叶绿素 b 和类胡萝卜素最大吸收峰的波长分别是 663nm 、 646nm 和 470nm 。 根据分光光度计测定的吸光度值，可以计算出丙酮提取液中叶绿体色素含量。. 实验目的 掌握分光光度法对叶绿素 a 、叶绿素 b 、叶绿素总浓度和类胡萝卜素总浓度测定和计算的方法。. 实验器材和试剂 1 、材料：菠菜叶片 2 、 用具：分光光度计、天平、研钵、漏斗、剪刀、容量瓶、烧杯、滤纸、滴管等

judah-weber
Download Presentation

20. 叶绿体色素含量的测定 ---- 分光光度法

An Image/Link below is provided (as is) to download presentation Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author. Content is provided to you AS IS for your information and personal use only. Download presentation by click this link. While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server. During download, if you can't get a presentation, the file might be deleted by the publisher.

E N D

Presentation Transcript

  1. 20. 叶绿体色素含量的测定----分光光度法

  2. 实验原理 利用80%丙酮提取叶绿体色素，叶绿素a、叶绿素b和类胡萝卜素最大吸收峰的波长分别是663nm、646nm和470nm。 根据分光光度计测定的吸光度值，可以计算出丙酮提取液中叶绿体色素含量。

  3. 实验目的 掌握分光光度法对叶绿素a、叶绿素b、叶绿素总浓度和类胡萝卜素总浓度测定和计算的方法。 实验器材和试剂 1、材料：菠菜叶片 2、 用具：分光光度计、天平、研钵、漏斗、剪刀、容量瓶、烧杯、滤纸、滴管等 3、试剂：80%丙酮、石英砂和碳酸钙

  4. 实验步骤 1.叶绿体色素的提取 取新鲜菠菜叶片5克,擦干,去中脉,剪碎放入研钵;加入少许石英砂和CaCO3,再加入80%丙酮3ml,研磨成匀浆,再加80%丙酮10ml,静置10分钟;用漏斗滤去残渣,用丙酮反复冲洗研钵、残渣至无色;用容量瓶定容至50ml 。 2.吸光度的测定 取光径1cm比色杯，注入上述叶绿素提取液,以80%丙酮注入另一同样的比色杯内作为空白对照,在波长663、646和470nm下测定吸光度。 3.结果计算 依据下列丙酮提取液中色素浓度计算公式,分别计算出叶绿素a、b的浓度及其叶绿素总浓度和类胡萝卜素的浓度。

  5. 计算公式 80%丙酮提取液中色素浓度的计算 Ca（叶绿素a）=12.2A663-2.81A646 Cb（叶绿素b）=20.13A646-5.03A663 CT（叶绿素）=Ca+Cb=17.32A646+7.18A663 Cx.c（类胡萝卜素）=(1000A470-3.27Ca-104Cb)/229 叶绿体色素含量=

  6. 附录：722分光光度计的使用 1、选择灵敏度旋纽至3；将波长调节到600nm，打开样品室盖，打开电源开关预热20min。 2、打开样品室盖，将测定旋纽调至T（透光度），用调节旋纽0调0；盖上样品室盖，用调节旋纽100调100。 3、将空白样品放入样品槽，按上述方法调0和调100。 4、将测定旋纽调至A（吸光度），用Abs旋纽调0，测定待测样品的光密度。

  7. 作业 计算出叶绿素a、b的浓度及其叶绿素总浓度和类胡萝卜素的浓度。 思考题 1. 叶绿素a、b在蓝色区也有吸收峰，能否用这一吸收峰波长进行叶绿素的定量分析？为什么？2．为什么提取叶绿素时干材料一定要用80%的丙酮，而新鲜的材料可以用无水丙酮提取？

More Related