320 likes | 612 Views
สถาบันวิจัยวิทยาศาสตร์สาธารณสุข กรมวิทยาศาสตร์การแพทย์. Influenza virus. Influenza virus. Influenza virus group A H1N1 Pandemic H1N1 (2009) H3N2 Human H3N2 -Swine Origin Influenza Virus (U.S.A., 2011) (similarity HA 87%, NA 91%) H5N1 (Highly pathogenic avian influenza virus)
E N D
สถาบันวิจัยวิทยาศาสตร์สาธารณสุขสถาบันวิจัยวิทยาศาสตร์สาธารณสุข กรมวิทยาศาสตร์การแพทย์
Influenza virus Influenza virus group A • H1N1 • Pandemic H1N1 (2009) • H3N2 • Human H3N2 -Swine Origin Influenza Virus (U.S.A., 2011) (similarity HA 87%, NA 91%) • H5N1 (Highly pathogenic avian influenza virus) Influenza virus group B
Epidemic curve of confirmed Avian Influenza H5 human cases in Thailand from 2004 to present. (25 cases with 17 dead in 4 waves) cases จำนวน (ราย) Acknowledge Avian influenza (AI) in poultry and human 8/12 Declared AI free mobilize village health volunteers Declared AI free 4/5 3/3 2/5 2004 2005 2006 Remark: 3097 Notification and investigation in 2004 3244 Notification and investigation in 2005 5300 Notification and investigation up to 19 October 2006 Kumnuan Ungchusak,BOE ,Thailand
วิธีตรวจวิเคราะห์ ทางห้องปฏิบัติการ
ห้องปฏิบัติการตรวจวินิจฉัยไข้หวัดนกสถาบันวิจัยวิทยาศาสตร์สาธารณสุขและศูนย์วิทยาศาสตร์การแพทย์ 14 แห่ง • วิธีวิเคราะห์ปกติ/ตรวจเบื้องต้น • ตรวจหาสารพันธุกรรมไวรัสไข้หวัดนก H5 gene ด้วยวิธี PCR (Influenza A ----> H5) 1-2 วัน • วิธีตรวจยืนยันหากพบสารพันธุกรรมไวรัสไข้หวัดนก • วิธี PCR โดยใช้ primers ต่อยีน H5 จำนวน 2 ชุดหรือนำไปเพาะเชื้อแล้วนำไปตรวจพิสูจน์ด้วยวิธี Immunofluorescence Assay (IFA) หรือ gene sequencing HA NA
-actin M A B TH/676/05 820 bp 626 bp 244 bp การตรวจหาเชื้อไวรัสไข้หวัดใหญ่นกวิธี PCR สกัดสารพันธุกรรมจากตัวอย่างผู้ป่วย เพิ่มจำนวนสารพันธุกรรม ด้วย 2 วิธี PCR Realtime PCR
การแยกเชื้อและพิสูจน์เชื้อการแยกเชื้อและพิสูจน์เชื้อ เป็นวิธีมาตรฐาน ใช้เวลาตรวจนาน 3-14 วัน เชื้อที่แยกได้มีความสำคัญต่องานวิจัยและการพัฒนาองค์ความรู้ในแขนงต่างๆ Viral isolation bycell culture/ egg inoculation
ตรวจพิสูจน์เชื้อด้วยวิธี IFA Confirm by IFA เซลล์เพาะเลี้ยงที่ติดเชื้อเปลี่ยนรูปร่าง (CPE) เซลล์เพาะเลี้ยงที่ติดเชื้อย้อมสีด้วยวิธี IFA เห็นติดสีเรืองแสงสีเขียว
วิเคราะห์หาสายพันธุ์ Strain analysis by HI test Using WHO HI reagents kit Strain analysis by Gene sequencing Annually send isolates to confirm at WHO cc in Australia and US – CDC ( 100 isolates/ year/WHOcc )
การตรวจหาภูมิคุ้มกันต่อเชื้อไวรัสไข้หวัดนก H5N1 • เป็นการตรวจด้วยวิธี micro neutralization test (micro NT) • เพื่อเปรียบเทียบระดับภูมิคุ้มกันต่อ H5N1 ที่เพิ่มขึ้นระหว่างเริ่มมีอาการและหลังจากนั้น 2 สัปดาห์หรือนานกว่านั้น • หากมีระดับสูงขึ้นมากกว่า 4 เท่า ก็แสดงว่ามีการติดเชื้อ H5N1 มาก่อน
VC Back 100 Normal 50 25 HA # 2 12.5 - 6.25 3.12 1.5 + 0 การตรวจหาแอนติบอดีด้วยวิธี Micro -NT 2. Add Sera 1. Treat sera 3. Dilute sera 56oC 30 min/RDE 1H @37°C 4. Add Virus 5. MDCK Cells 100 TCID50/well 3.0x104 cells/well 16-22 hr @37°C Ctrls - + + - + - - 6. Fix cells and run NP ELISA Protocol developed from US-CDC
ตัวอย่างสำหรับการตรวจหาสารพันธุกรรม /แยกเชื้อ • สารคัดหลั่งจากระบบทางเดินหายใจ • ระยะเริ่มมีอาการ ให้เก็บNasopharyngeal swab, nasal swab, throat swab • ผู้ที่มีอาการปอดบวม ปอดอักเสบ หรือมีอาการติดเชื้อทางเดินหายใจส่วนส่างควรเก็บ nasopharyngeal aspirate/wash , bronchoalveolar lavage , tracheal aspirates
การเก็บ Throat swab ไม้พันสำลี ไม้กดลิ้น การเก็บไม้ป้ายลำคอ (Throat swab) VTM
การเก็บ NPS การเก็บ Nasopharyngeal swab
เมื่อเก็บตัวอย่างแล้วต้องแช่ในกระติกพร้อมน้ำแข็งทันทีและส่งห้องปฏิบัติการภายใน 48 ชม. กรณีที่ไม่สามารถส่งตรวจภายใน 48 ชม. ให้เก็บในตู้แช่แข็ง – 70 0ซ การนำส่งตัวอย่างสารคัดหลั่งจากทางเดินหายใจ
ตัวอย่างเพื่อการตรวจหาแอนติบอดีจำเพาะต่อ H5N1 ซีรั่ม เก็บตัวอย่างเลือด 2 ครั้ง ครั้งละประมาณ 10 มล. ปั่นแยกซีรั่มใส่หลอดไร้เชื้อ ปิดจุกให้สนิท ตัวอย่างครั้งที่ 1 เมื่อเริ่มมีอาการ เก็บรักษาไว้ที่ -20oC หรือในช่องแช่แข็ง ตัวอย่างครั้งที่ 2 เวลาห่างจากครั้งแรก 2 สัปดาห์ หรือนานกว่านั้น นำส่งตัวอย่างทั้งสองครั้งโดยแช่ในกระติกน้ำแข็ง
การบรรจุและนำส่งตัวอย่างการบรรจุและนำส่งตัวอย่าง ไม้ swab ในหลอด VTM เลือดหรือซีรั่มใส่หลอดไร้เชื้อ
เครือข่ายห้องปฏิบัติการเครือข่ายห้องปฏิบัติการ กรมวิทยาศาสตร์การแพทย์ ศูนย์วิทยาศาสตร์การแพทย์ 14 แห่ง ห้องปฏิบัติการเคลื่อนที่
Facility in Mobile Lab, DMSc, Thailand Real time RT-PCR
SRRT Hospital Network Veterinarians Laboratory Laboratory Pathologist
ระบบเฝ้าระวังเชื้อไวรัสไข้หวัดใหญ่เฉพาะพื้นที่กรมวิทยาศาสตร์การแพทย์ พื้นที่รับผิดชอบ 7 จังหวัด รวม 7 โรงพยาบาล และ 1 ศูนย์บริการสาธารณสุข
อัตราเชื้อดื้อยาต้านไวรัสไข้หวัดใหญ่สายพันธุ์ใหม่ชนิด A (pH1N1) ในประเทศไทย ระหว่างตุลาคม 2553 ถึง สิงหาคม 2554 (อัตราเชื้อดื้อยาต้านไวรัสไข้หวัดใหญ่สายพันธุ์ใหม่ชนิด A (pH1N1) ระหว่างปี 2552-2553 พบร้อยละ 1.2)
Reportingsystem Immediate Response • Establish flexible communication channels in the network to ensure information dissemination and feedback. • Update the knowledge of local technical personnel. • Maintain records and data.