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Liver function test

Liver function test. ① 단백 합성기능 Serum albumin, Prothrombin time. ② 유기 음이온 배설기능 Bilirubin (total, direct). ③ 세포손상에 의한 효소측정 Transaminase . ALP. ④ 혈청 교질반응 과 간 세포 색소배설 ( BSP, ICG ), . 혈청 교질반응 (colloid reaction) : 중금속 / 유기산. 티몰 혼탁 시험 ( Thymol turbidity test).

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Liver function test

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Presentation Transcript

  1. Liver function test ① 단백 합성기능 Serum albumin, Prothrombin time ② 유기 음이온 배설기능 Bilirubin (total, direct). ③ 세포손상에 의한 효소측정 Transaminase. ALP. ④ 혈청 교질반응 과 간 세포 색소배설(BSP, ICG),

  2. 혈청 교질반응(colloid reaction): 중금속/유기산 티몰 혼탁 시험 (Thymol turbidity test) 황산 아연 혼탁시험 (Zinc sulfate turbidity) 색소 배설 기능검사 Indocyanine green (ICG) Bromsulphalein (BSP)

  3. 혈청 교질반응(colloid reaction): 중금속/유기산 • 단백변성 시약을 가하여 turbidity, precipitated • Albumin, bile acid –억제, γ-globuline - 촉진 • β, γ-globuline, Ig-G, Ig-M = TTT • γ-globuline, Ig-G, Ig-M = ZTT • 물리적 성상 불명 • 비 특이적 반응, 급성간염, 간 경변, 만성감염, 교원병 등.

  4. 티몰 혼탁 시험 (Thymol turbidity test) 혈청과 thymol barbital buffer을 혼합하여 생성된 혼탁을 660nm 에서 흡광도를 측정한다. 혼탁도 증가는 γ-globuline (Ig-M, Ig-G), lipoprotein의 증가를 보이며, albumin은 감소 ,A형 간염 초기에 Ig-M 증가 민감한 반응을 보인다 1) Thymol barbital buffer(pH7.55±0.03) Barbital - - - - - - - - - - - - 3.09㎎ Sod, barbital - - - - - - -- 1.69㎎ thymol(C10H14O) - - - - - 6.0㎎ (tris 1.21gm)   add  thymol crystal  1gm CO2 free 증류수 2,000ml REAGENT 2) Standard sol ① 0.0962N BaCl2 : BaCl2 2H2O 1.173g/100ml DW ② 0.2N H2SO4 : conc H2SO4 : 6㎖ /DW 700㎖ 1.35㎖ /8.65㎖ = 5 units • TTT test= serum 0.1ml + reagent 6.0ml /25’C /30min – 660nm reading

  5. 황산아연 혼탁시험(Zinc sulfate turbidity) 혈청과 zinc sulfate barbital buffer 혼합 생성된 혼탁을 660nm에서 흡광도를 측정한다. 즉 약 알카리성 금속 Zn이온과 반응하여 γ-globuline과 불용성인 복합체을 이룬 혼탁을 BaCl2의 표준액을 Kunkei(20units) 검량선에서 구한다 REAGENT 1) Kunkel 황산아연시약(pH7.6 ± 0.05)       ZnSO4. 7H2O    0.480 / 100㎖DW       Barbital         0.302g ,      sod, barbital    0.190g        CO2 free DW 1.000㎖ 2) Standard sol ① BaCl2 2H2O 1.175g/100ml DW ② 0.2N H2SO4 : conc H2SO4 : 6㎖ /DW 700㎖ 1.35㎖ /8.65㎖ = 5 units • ZTT test= serum 0.1ml + Reagent 6.0ml/25’C 30min – 660nmreading

  6. TTT • - 단백질기준- MacLagen unit, BaSO4 기준 shank-Hoagland • Normal Value 0 ∼ 5 (3 ∼ 4) • 경증 5 ∼ 10, 중증 11 ∼ 30 • 간실질장애, 바이러스 간염(A), 폐쇄성황달(N) , • - 만성감염증, 교원병, 류머티스관절염, SLE, 다발성골수종, • ZTT • Normal Value 4 ∼ 12 Kunkel unit • 경과관찰 및 치유 판정에 유용 • 만성간염, 간 경변증, 급성간염(N) • 교원병, 류머티스관절염, SLE, 다발성골수종, • γ-globulin = Kunkel unit x 0.053 + 0.5

  7. 색소 배 설 기 능 검 사 Indocyanine green (ICG) Bromsulphalein (BSP) • 색소를 주입하면 혈중 albumin 과 결합 하여 간세포막을 거처 간장에서 담즙과 같이 담관으로 배설. • 배설작용에 이상이 생기면 담 관에서 색소를 배설이 더디므로 일정 • 시간 후에 혈액을 채취하여 혈중에 남아있는 색소의 양을 검사한다. • 간질환 환자는 정상인 보다 많은 양이 혈중에 남아 있게 된다. • 그 남아있는 색소의 양을 퍼센트로 환산한다. • BSP는 45분 후에 5%남고, ICG는 15분 후에 10%밖에 남지 않는다. • 그 이상의 수치가 나오면 간장의 배설작용에 이상을 의미한다.

  8. Bromsulphalein(BSP) 1) Plasma protein 70 ∼ 80% 결합 2) Liver – conjugate glutathion – free form – bile secration 3) Kidney – 20% secration, and RES system에서 분해 4) BSP retention time – 30- 45min 5) 정 체율, 간 저장 능, 최대 배설 량 등 측정 6) 고 bilirubinemia 검사적 의의 없음(Dubin-johnson) 1:60 ( S : 0.1㎖ + R 6㎖ )

  9. 검사원리 혈중 BSP 농도 측정은 alkaline 조건에서 이 색소가 적자색으로 정색한다. 이때 최대 흡수파장은 580 ㎚이나 혈청 albumin과 결합하면 594 ㎚로 이동하여 흡수도는 저하 하여 혈청 시료에 p-toluensulfonic acid를 가하여 BSP와 Albumin 결합을 분리하여 측정한다 50mg/ ml BSP (Hepatosulphalein-DAIICHI) 을 체중 5mg/kg 을 1분간에 걸처 서서히 정맥 주사한다 정맥 주사후 정확히 30분, 45분 후 반대 팔에서 채혈한다

  10. REAGENT • 5% BSP(Hepatosulphalein-DAIICHI) • 2) Alkaline buffer pH 10.6 • Na2HPO47H2O 12.2gm Na2PO412H2O 1.79gm • p-toluensulfonic 3.2gm Distill Water 500 ㎖ • 3) Acid Reagent NaH2PO4H2O 27.6gm/ 100 ㎖ • 4) 5mg/dl BSP Standard sol • BSP 0.1 ㎖ • 10% NaOH 0.25 ㎖ • D W 100ml

  11. 측 정 1) 혈청 0.5 ㎖에 Alkaline buffer 3.5 ㎖가하여 전도 혼합 후 H2O을 Blank로 하여 580 ㎚ 에서 흡광도 측정 - - - (A1) 2) 이어서 Acid reagent 0.1 ㎖ 를 가하여 전도 혼합 후 580 ㎚ 흡광도 측정 - - -(A2) 계 산(A1 – A2) = Retention % 주 의 1) 겨울철에는 BSP가 백색결정을 나타낸다 2) BSP가 피하층에 누출 되지 않도록 한다 3) 혈관 통, 현기증, 구토, 쇼크증상, 부작용 발생 4) 고도비만, 부종, 복수, 있는 환자는 투여 량

  12. Indocyanine green (ICG) 검사원리 ICG 는 정맥주사 후 혈청 단백에 결합하여 2 ∼3 분내에 혈액 중에 균등히 분포되고, 그 후 간에서 선택적으로 섭취 되어 약 20 분 동안 97%가 배설 되는데 이때 혈중 농도는 지수 함수적으로 하강한다. 따라서 주입 후 5-15 분 사이에 2 회 이상 채혈하여 혈장 분리 후 ICG 농도를 측정하고 혈장 소실 율 (K) ,정체(R1),제거율(Rmax) 을 구한다. Hepato-cirrhosis, liver cancer, icterus, hepatitis, cholelithiasis, cholecystitis,   potal vein disorders 등 , 간 질환 진단

  13. Indocyanine green (ICG) ◎ Diagnogreen(Indocyanine green; ICG) is a dark bluish-green dye introduced by Fox. ◎ Injected intravenously, it bind itself immediately with serum protein (albumin, lipo-protein) ◎ ICG dye(25mg/vial) :  Soluble water, but in physiological saline and salt, it is slightly soluble in methanol. ◎ Maximum absorbance 780nm in aqueous solution, But 805nm in protein-containing solution. ◎ By collecting sample of blood 3time during the period of 5, 10, 15min following injection. ◎ Disappearance rate of dye in the plasma 『K』 can be calculated (부하량에 따른 혈중 소실율) Standard curve ( K=0.693 / t½ ) ◎ Retention rate of dye in the blood 『R15』 can be calculated (ICG 제 거율)   → Only once 15 minute after intravenous administration of the drug.

  14. Indocyanine green (ICG) 혈장(색소) 소실율 측정 (Disappearance rate; K ) 정체율 측정 (Retention rate; R15) 최대 제거율 (Maximal removal rate ; R-Max)

  15. 6. Standard curve 증류수1㎖, 생리식염수 1㎖ 와 혈장(혈청)1㎖혼합액을 blank 가로축 농도, 세로축 흡광도로 하여 측정된 값을 기입하고, 점과 점을 직선 으로 연결하는 calibration curve를 그린다.

  16. ① 전일부터 금식 ② Diagnogreen ICG dye(25mg/vial)          2.5㎎/㎖    0.5 ㎎/ ㎏ 15～30sec injection ③ 이때 주사전EDTA Blood collection ④ By collecting sample of blood 3time of  5, 10, 15min. ⑤ Centrifuge Plasma 1㎖ ⑥ 검사 당일 금식5 ㎎/ ㎏ ⑦ By collecting sample of blood 3time of   10, 15min. ⑧ Cetrifuge Plasma 1㎖l Plasma 1 ㎖ + Saline 2㎖ ① Dilute 1 : 10 distill water Plasma 1 ㎖  +   Saline 2㎖ and vortex mix ⑥ 7. Sample preper ⑨ Spectrophotometer  805㎚

  17. 혈장 색소 소실율 측정(Disappearance rate; K ) ① Blank로 혈액 3㎖ , 주사 후 5분, 10분, 15분 후 반대쪽 혈액 3㎖   ② 혈액 검체는 원심분리, 각각 혈장 1㎖ 을 생리 식염수 2㎖ 에 잘 섞는다 ③ blank로 각 검체을 805㎚ 측정, Standard curve 로 부터 농도를 계 산 가로축에 시간을 세로축에 농도를 - semilogarithmic paper 3개의 값을    기입하고, 이 세 점을 연결하는 선을 그린다 이 값으로 부터 다음식에 의해 혈장 내 ICG 소실율(K) 을 계산. 0.693 K = t 1/2

  18. 0.693 K = t 1/2

  19. 혈액에서의 정체율 측정(Retention rate; R15) ”K”방법과 동일하며 단지 정맥주사 후 15분에만 혈액을 채취한다. 계 산 : ICG의 평균 정체율(R15)은 다음식에 의해 계산 C15 : 주사 후 15분에 혈장에서 ICG의 농도(㎎/㎗)             1.00 : 주사시간( 0 hr) 혈장에서 ICG의 농도(㎎/㎗)

  20. 최대 제거율; ( R-Max ) 간 혈류량과 intrahepatic shunt 의 영향을 받지않고 간 실질 세포의 기능 반영. 4 시간의 간격을 두고 두 부하량으로 시행 ( 0.5, 5 ㎎/㎗)  ICG 정맥주사 후 5min, 10min, 15min 에 채혈 . ICG-Rmax 는 부하량 및 제거율(K)의 역수로 Lineweaver-Burk plot에 의한 회귀곡선을 구하여 제거율의 역수를Y 축, ICG 부하량의 역수를 X축으로 하여 얻어진 회귀곡선이 Y축과 교차 하는 점의 역수를 ICG-Rmax로 결정한다

  21. I C G To determine resectability for hepatocellular carcinoma, liver cirrhosis, hemangioma

  22. 검 체 Plasma, ICG 투여 전, 투여 후 5분, 10분, 15분 결과보고 결과해석 및 임상적 의의 혈장 소실율 (K) 값은 간에 있어서 혈중 색소의 섭취, 배설 기능을 나타내고 간 질환의 진단, 예 후, 치료의 판정이 가능 0.195±0.037 or more Disappearance rate Plasma『K』 Mean retention rate 『R15』 10% or less I C G  R-max ＞ 0.8  : Lobectomy ＞ 0.66 : Segmentectomy ＞ 0.3  : Limited resection ＜ 0.3  : No Operation

  23. CHOLINESTERASE; ChE Pseudocholinesterase; SChE, CHE, PseudoChE EC 3. 1. 1. 8

  24. Cholinesterase (ChE) ⇒ 신경 자극전도⇒ Acetylcholine ⇒Cholinesterase ⇒ acetic acid / choline ⇒ hydrolyse 신경전도를 순조롭게 한다 ChE가 억제 ⇒acetylcholine(신경) 축적 ⇒ 신경감수장치 (감각기능항진) ⇒ 과도한 자극 ⇒ 자율신경계 및 중추 신경계 ⇒ 이상 증상 발현 심한 발한, 호흡곤란, 두통, 구토, 복통, 설사, 방뇨, 무력증, 경련, 시력장애, 혼수상태 등을 유발.

  25. acetylcholine을 가수분해하는  acetic acid / choline CHOLINESTERASE; ChE Acylcholine acylhydrolase Cholinesterase(Pseudo) choline esters 을 가수분해하는 Cholin / 유기산 Acetylcholine hydrolase Cholinesterase(True)

  26. Acetylcholinesterase  - erythrocyte cholinesterase(True AChE) AChE- Acetylcholine, acetyl-β-methylcholine Pseudocholinesterase - Plasma, Serum cholinesterase(BuChE) BuChE- Butylcholine, Benzoylcholine, Propionylcholin AChE & BuChE- Acetylcholine

  27. 생리적 변동인자 냉장고에서는 1주일, 실온에서는 24시간 Heparine을 재외한 항 응고제는 ChE 활성을 저해한다(Ca 2+ ) 유기인제의 오염으로 활성이 저하할 수 있다. 일반적으로 남자보다 여자가 활성이 낮다.(10-15%정도) 신생아는 성인의 65%정도 활성-급속히 활성이 증가한다 유아기는 성인의 1.3배의 활성치, 그후 성인치가된다 성인은 나이가 많음에 따라 활성치가 감소한다.

  28. 일내 변동 -오전 상승, 오후에는 5%정도 낮다.(유의성 낮음) 용 혈 - 측정하는 기질에 따라 다르게 반응. 일반적인 기질에는 영향이 없으나 Acetylcholine 은 적혈구 에 함유한 acetylcholinesterase에 의하여 상승한다. -Benzoylcholine 사용시 영향이 없다. 약 제 -ChE의 저해제는 유기인산제의 살충제,F,Cl,NaF, 저해    특히 NaCl 희석시 저해를 받는다.

  29. 임상적의의 1) 혈청 ChE의 활성이 감소하는 경우 간질환, 급성 감염, 악성종양, 각종 혈액질환, 자궁근종, 임신중독 ; -간에서 생 합성이 감소 (유전적,영양부족) 속 발적으로 발생 succinylcholine ( dibucain내성형, fluorid(atypical type), silent type -ChE 활성을 저해하는 약물에 의하여 - 농약 및 살충제

  30. H2O Acid Cholinesterase Acylcholine Choline 측 정 법 Ammon pH meter(Michel/Johnson) Indicator(Phenol red/m-nitrophenol) 기질감소 Acetylcholine(비색 ) Benzoylcholine(240nm) Butylcholine Thiocholine ester-thiocholine 비색분석(DTNB) 형광분석(O-phthalaldehyde) Iodine titrate

  31. REAGENT : Acetylcholine(ATC) ① Buffer nitrophenol(pH7.8)                  Di sodium phosphate(Na2PO4)      6.65g       Di hydrogen pot phosphate          0.43g         D    W                   200ml      m-nitrophenol                     0.3g    D    W                      200ml   D W  1000ml ② Acetylcholine solution 15% ③ Sodium chloride          0.9% ③ Sodium chloride          0.9% ④ 0.1N Acetic acid solution ( 5.8ml/1L)

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