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Estado nativo ( N )

Estado nativo ( N ). Compactación óptima Grupos polares en el exterior Mínima superficie expuesta Anisotropía y baja periodicidad Organización jerárquica de la estructura Flexibilidad óptima Conformación única y cooperativa Mínimo energético. Estado desplegado ( U ).

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Estado nativo ( N )

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Presentation Transcript

  1. Estado nativo (N) • Compactación óptima • Grupos polares en el exterior • Mínima superficie expuesta • Anisotropía y baja periodicidad • Organización jerárquica de la estructura • Flexibilidad óptima • Conformación única y cooperativa • Mínimo energético

  2. Estado desplegado (U) • Expansión máxima (5-10 veces el volumen de N)Máxima superficie expuesta al solvente • No existen interacciones preferenciales entre residuos • Infinitas conformaciones • Estado ideal, modelo teórico que describe aproximadamente el comportamiento de muchas proteínas en condiciones fuertemente desnaturalizantes

  3. Estados parcialmente plegados (I) • Grupo heterogéneo de conformaciones no nativas • Estructura residual secundaria, nativa o no nativa • Sin estructura terciaria • Tendencia a la agregación • Existen como: Precursores cinéticos de N En trazas en equilibrio con N En ausencia de cofactores específicos Resultado de vías muertas del plegamiento

  4. ¿Qué relación existe entre N, I y U? • En soluciones fisiológicas N es absolutamente mayoritario • En presencia de urea o cloruro de guanidinio concentrados (agentes caotrópicos), N se desestabiliza y aparecen I y U • Los agentes caotrópicos solubilizan las cadenas laterales haciendo más favorable la interacción con el agua

  5. No se observará I en el equilibrio

  6. Se observará N, I y U en equilibrio

  7. Equilibrium unfolding of IFABP

  8. Nishimura et al J. Mol. Biol. (2005) 351, 383–392 quenching Met-Trp en la proteína salvaje y no en las mutantes

  9. Temperatura (grados centígrados) elipticidad (miligrados)

  10. IA-2ec

  11. Differential Scanning Calorimetry (DSC)

  12. 4-10 kcal/mol 0-200 kcal/mol 100-400 kcal/mol Los efectos entalpicos y entrópicoscontribuyen con fuerza parecida. Además son marcadamentedependientes de la temperatura

  13. ¿Cuáles son las contribuciones entrópicas? • La diferencia enorme entre el número de conformaciones permitidas a U y N • El ordenamiento de las moléculas de agua sobre la superficie accesible S=R´ln(w)

  14. ¿Cuáles son las contribuciones entálpicas? • Interacciones de van der Waals • Puentes de hidrógeno • Puentes salinos

  15. Átomos en una esfera de radio 5 A centrada en cada átomo (no se incluyen el átomo central ni los unidos covalentemente a él) ESBL

  16. Salvo muy escasas excepciones no existen puentes de hidrógeno sin satisfacer en el interior proteico. Todos son intramoleculares. Son muy pocos los puentes salinos encontrados en el interior proteico. En general desestabilizan a la estructura nativa.

  17. Teoría clásica del efecto hidrofóbico U N Entropía conformacional Entropía del solvente Entalpía

  18. Modelo actual U N Entropía conformacional Entropía del solvente Entalpía de solvatación Entalpía del solvente

  19. H C ¶ H = C p p,u U ¶ T N C p,n T S C p,u ¶ T S = U C p ¶ T C N p,n lnT G H T S

  20. DG(80ºC)=160-168=-8 kcal/mol DG(28ºC)=4.8-0=4.8 kcal/mol DG(-20ºC)=-139-(-132)=-7 kcal/mol

  21. Ermacora Thanks Alberto Podjarny

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