Образцы

1. Образцы • Образцы с ангикоагулянтомидеально разделяют плазму и клетки и обеспечивают наилучшее практическое использование в технологии ID-System. • Плазма в отличие от сыворотки не влияетна качество выявления антител. • Образцы не должны быть гемолизированы более, чем на 20%. • Образцы не должны быть желтушными. • Образцы новорожденных не должны быть желеобразными.

2. Пипетирование Способы пипетирования важны для получения оптимальных результатов при работе в гелевой технологии ID-System

3. Реакционная камера

4. Cтандартные эритроциты вносятся первыми при использовании пипетки - дозатора, которая держится под острым углом

5. Держите наконечник прикоснувшись к краю лунки и вносите жидкие образцы, так что бы они стекали по одной стороне реакционной камеры.

6. Жидкость должна стекать в реакционную камеру так, что бы образовался мениск над микропробиркой, и между клеточной суспензией и гелем образовалась «воздушная прослойка»

7. Во время процедуры пипетирования для предотвращения контаминации (переноса) избегайте контакта наконечника со стенками микропробирки

9. При внесении тестируемых образцов (плазмы или сыворотки) держите пипетку вертикально, непосредственно над клеточной суспензией и слегка ближе к одному из краев реакционной камеры

11. Ни при каких обстоятельствах не вносите растворы непосредственно в гель, это может привести к ошибочным результатам

13. Факторы влияющие на результаты

14. Факторы которые могут повлиять на результаты . • Некоторые лекарства, как известно могут привести к положительным результатам в тесте Кумбса. • cephalosporin, • Methyldoporin • Некоторыепатологические состояния так же, как зафиксировано могут привести к положительным результатам в тесте Кумбса • Плазмоцитома • Серповидно-клеточная анемия • Болезни почек • Миелома • Аутоиммуные заболевания (СКВ)

15. Факторы которые могут повлиять на результаты . • Бактериалнаяилидругая контаминация используемых реагентов или материаловможет привести к ложно отрицательным или ложноположительным результатам. • В остатках фибринамогут застрять неагглютинированные клетки приводя к образованию тонкой розовой линии «красной-линии” на поверхности гелевого слоя в то время как после центрифугирования большинство эритроцитов обнаруживаются на дне микропробирки

16. Факторы которые могут повлиять на результаты Строгое следованиеправилам выполнения методики и использование соответствующего оборудования крайне важно. Использование иных растворов для приготовления суспензии эритроцитов, чем ID-растворы могут привести к изменению рузультатовреакции. Слишком«перегруженная» суспензия эритроцитовможет привести к ложноположительным или ложноотрицательным результатам. Использованиедругой сывороткичем описанная в ID системе может изменить результаты реакции. Холодовые антителамогут привести к положительной реакции, особенно в ферментативном методике.

17. Проблемы с транспортировкой -при получении продукции визуально проверьте уровень супернатанта Правила использования ID-карт

18. Правила использования ID-карт Стабильность Не используйте ID-карты, в которых видны: Признаки высыхания Пузырьки в геле Поврежденная фольга Всегда проверяйте сроки годности на этикетке

19. Нормативные документы Приказ МЗ РФ №2 от 09.01.1998г. Приказ МЗ РФ №363 от 25.11.02 Отражают лишь некоторые аспекты иммуногематологической диагностики Вызывают многочисленные вопросы по организации и перечню исследований и неоднозначная трактовка в различных учреждениях службы крови и ЛПУ Первый шаг на пути создания единого национального стандарта иммуногематологического обследования доноров и реципиентов: Постановление правительства №1230 от 31.12.2010: «Об утверждении правил и методов исследований и правил отбора образцов донорской крови……»

20. Задачи лабораторной службы в иммуногематологии Принятие в РФ нового регламента иммуногематологического обследования доноров (Постановления правительства РФ от 31 декабря 2010 года N 1230 «Об утверждении правил и методов исследований и правил отбора образцов донорской крови……» В целях обеспечения соблюдения требований безопасности крови и ее компонентов необходимо использовать следующие иммунологические методы: внесение реагентов и образцов крови в гель, в различные типы микропланшет, а также в колонки на стеклянных микросферах

21. Алгоритм тестирования Доноров Группа крови по системе АВО: определяется перед каждой донацией В подтверждающей лаборатории во время донации выполняется: определение группы крови (АВО) перекрестным методом с использованием стандартных эритроцитов А1, В. В каждую серию исследований включаются «положительный» и «отрицательный» контрольные образцы Резус-принадлежность устанавливается только по наличию или отсутствию антигена D Типирование антигенов эритроцитов С,с,Е,е системы Резус производится дважды от разных донаций разными сериями типирующих реагентов или различными методами Определение антигена К эритроцитов системы Келл двухкратно от разных донаций разными сериями типирующих реагентов или различными методами Скрининг аллоантиэритроцитарных антител донорской крови проводится при каждой донации независимо от группы крови системы АВО и Резус (D) принадлежности

22. Национальный стандарт иммуногематологического обследования доноров и реципиентов 1. Принятие в РФ нового регламента иммуногематологического обследования доноров (Постановления правительства РФ от 31 декабря 2010 года N 1230 «Об утверждении правил и методов исследований и правил отбора образцов донорской крови……» 2. Постановление Правительства РФ от 26 января 2010 г. N 29 "Об утверждении технического регламента о требованиях безопасности крови, ее продуктов, кровезамещающих растворов и технических средств, используемых в трансфузионно-инфузионной терапии" 3. Приказ Министерства здравоохранения Российской Федерации (Минздрав России) от 2 апреля 2013 г. N 183н г. Москва "Об утверждении правил клинического использования донорской крови и (или) ее компонентов“

23. Задачи лабораторной службы в обеспечении национального стандарта иммуногематологических исследований в трансфузиологии

24. Приказ Министерства здравоохранения Российской Федерации (Минздрав России) от 2 апреля 2013 г. N 183н г. Москва "Об утверждении правил клинического использования донорской крови и (или) ее компонентов" Нормативные документы

25. Цели приказа • Обеспечение эффективности, качества и безопасности трансфузии донорской крови и (или) ее компонентов. • Контроль: • Назначения • Выбора компонентов • Проведения • Осложнений • Клинической эффективности • Документальной прослеживаемости

26. Исполнительные организации • Все организации, осуществляющие клиническое использование донорской крови и (или) ее компонентов: • в том числе СПК, если они осуществляют исследования реципиентов, индивидуальный подбор гемокомпонентов

27. Порядок иммуногематологических исследований реципиента • ПЕРВИЧНОЕ ОБСЛЕДОВАНИЕ при поступлении • АВО, Rh (врач-трансфузиолог) • ПОДТВЕРЖДЕНИЕ В КДЛ (КДЛ) • АВО, Rh • Фенотипирование • Скрининг антител • ОБСЛЕДОВАНИЕ В ДЕНЬ ТРАНСФУЗИИ • АВО, Rh реципиента • АВО донора (информация об Rh на этикетке контейнера) • Проба на инд. Совместимость 2 метода • На плоскости при комн. Т-ре • НАГТ или желатиновый или полиглюкиновый • БИОЛОГИЧЕСКАЯ ПРОБА • Посттрансфузионное исследование (п.21) при осложнениях

28. Порядок иммуногематологических исследований реципиента ПЕРВИЧНОЕ ОБСЛЕДОВАНИЕ • КОМУ? • Пациент, потенциально нуждающийся в гемотрансфузии • КОГДА? • При поступлении • КТО? • Врач клинического отд. с квалификацией трансфузиолога • Исследования? АВО, Rh(пп.7, 22, 67)

29. Порядок иммуногематологических исследований реципиента ПОДТВЕРЖДЕНИЕ (КДЛ) • 1/ АВО, перекрестный метод*; Rh(пп. 8) • Обратное определение с эритроцитами – А, -В, -Опри наличии слабых реакций в прямом определении (п.22б))У детей старше 4 месяцев (п.68а), Подгруппы А1, А2 (п.40а) • 2/ Фенотипирование С, с, Е, е, Сw , К и k** у детей до 18 лет, женщин детородного возраста и беременных, реципиентов с отягощенным трансфузионным анамнезом, имеющих антитела к антигенам эритроцитов, реципиентов, нуждающихся в многократных (в том числе повторных) гемотрансфузиях (кардиохирургия, трансплантология, ортопедия, онкология, онкогематология, травматология, гематология) (п.22в) • 3/ Скрининг антиэритроцитарных антител с использованием не менее трех образцов эритроцитов • (пп. 7, 22, 67) (п.22г)

30. Порядок иммуногематологических исследований реципиента ПОДТВЕРЖДЕНИЕ П.7 Подтверждающее определение группы крови по системе АВО и резус-принадлежности, а также фенотипирование по антигенам С, с, Е, е, Cw, К, k и определение антиэритроцитарных антител у реципиента осуществляется в клинико-диагностической лаборатории. П.8 Результаты подтверждающего определения группы крови АВО и резус-принадлежности, а также фенотипирования по антигенам С, с, Е, е, Cw, К, k и определения антиэритроцитарных антител у реципиента вносятся в медицинскую документацию, отражающую состояние здоровья реципиента

31. Порядок иммуногематологических исследований реципиента СКРИНИНГ АНТИТЕЛ • КОМУ? • Пациент, потенциально нуждающийся в гемотрансфузии • КОГДА? • При поступлении • КТО?Клинико-диагностическая лаборатория • Исследования? скрининг антиэритроцитарных антител с использованием не менее трех образцов эритроцитов, которые в совокупности содержат антигены С, с, Е, е, Cw, К, k, Fya, Fyb, Lua, Lub, Jka и Jkb(пп. 7, 22, 67) (п.22г)

32. ИНДИВИДУАЛЬНЫЙ ПОДБОР ГЕМОКОМПОНЕНТОВ • КОМУ? Реципиентам, имеющим в анамнезе посттрансфузионные осложнения, беременность, рождение детей с гемолитической болезнью новорожденного, а также реципиентам, имеющим аллоиммунные антитела(п.9) • КОГДА? При поступлении • Исследования? При выявлении у реципиента антиэритроцитарных антител (п.23) осуществляется: • а) типирование эритроцитов по антигенам систем резус, Келл и других систем с помощью антител соответствующей специфичности; • б) идентификация антиэритроцитарных антител с панелью типированных эритроцитов, содержащей не менее 10 образцов клеток; • в) индивидуальный подбор доноров крови и эритроцитов с проведением непрямого антиглобулинового теста или его модификации с аналогичной чувствительностью. (23г, 69)

33. СКРИНИНГ И ИДЕНТИФИКАЦИЯ АНТИТЕЛ ID-карта LISS/Coombs ID-DiaCell l-ll-lll + ID-DiaPanel +

34. Скрининг антител Требования п. 22(г) Приказа 183н г) скрининг антиэритроцитарных антител с использованием не менее трех образцов эритроцитов, которые в совокупности содержат антигены С, с, Е, е, Cw, К, k, Fya, Fyb, Lua, Lub, Jka и Jkb.

35. Реагенты для АВО типирования

36. Взаимосвязь H-антигенас антигенами системы ABO

37. Химическая структура антигенов системы ABO

38. Антигены системы ABO

40. Правила исследования групп крови по системе АВО Результаты прямого тестирования определяют наличие/отсутствие антигенов А и В на поверхности эритроцитов! Результаты прямого определения группы крови по системе АВО Определение группы крови по системе АВО должно быть проведено прямым и обратным методом. Все несовпадения результатов реакций должны быть исследованы!!! Результаты тестирования со стандартными эритроцитами определяют наличие/отсутствие антител к антигенам А и В в плазме/сыворотке крови! Результаты обратного определения группы крови по системе АВО

41. Определение группы крови(перекрестный метод); скрининг антител ID-карта DiaClon ABO/D + ReverseGrouping 001234 V 4 × 12 001237 V 24 × 12 001236 V 60 × 12 001235 V 112 × 12 ID-карта Reverse Grouping with AntibodyScreening 003014 V 4 × 12 003017 V 24 × 12 003016 V 60 × 12 003015 V 112 × 12 003615V ID-DiaCellA1, B, O 004310V ID-DiaCell l-ll-lll

42. Ослабление экспрессии антигенов при онкопатологии, беременности, приеме различных лек. средств Отмыть эритроциты теплым физ. раствором – повторить исследование Если расхождения были устранены – возможная причина холодовые антитела Слабая агглютинация

43. Реагенты для исследования холодовых антител

44. Варианты антигена А АнтигенA2 Антиген А1

45. Подгруппа антигена А

46. Варианты антигена А A1, A2, A3 . . . . . An A2 A1 > A2

47. А(II) Эритромасса 0(I) Эритромасса В(III) или 0(I) АB(IV) Предупреждение несовместимости при переливании A2(II) A2B(IV)

48. Реагенты для определения подгруппы антигена А

49. Реагенты для определения антигена H

50. Система антигенов эритроцитов- Резус Антигены группы крови системы Резус Играют существенную роль в патогенезе • Пострансфузионных осложнений • Гемолитической болезни новорожденных (HDN) • Аутоимунной гемолитической анемии (AIHA)