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Ana Laura López López

Replication initiator DnaA interacts with an anti-terminator NusG in T. tengcongensis Jingfang Liu a,b , Huadong Pei a,c , Shuangshuang Mei a,b , Jie Li a,b , Ligang Zhou a,b , Hua Xiang. Ana Laura López López. Dna A. Proteína implicada en el inicio de la replicación del DNA

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Presentation Transcript

  1. Replication initiator DnaA interacts with an anti-terminator NusGin T. tengcongensisJingfangLiua,b, HuadongPeia,c, ShuangshuangMeia,b, Jie Li a,b, LigangZhoua,b, HuaXiang Ana Laura López López

  2. Dna A • Proteína implicada en el inicio de la replicación del DNA • Estructural y funcionalmente similar al complejo de reconocimiento del origen (ORC) en eucariotas. • Durante el inicio de la replicación en E.Coli interacciona consigo misma, además de interaccionar con proteínas replisomales (DnaB, Complejo Clam/Clam de la polimerasa III en cooperación con la proteína Hda).

  3. Nus G • Proteína esencial, participa en procesos de transcripción y traducción como antiterminador y terminador. • Mejora la eficiencia de Rho mediando la terminación transcripcional, al mismo tiempo es un antiterminador que acelera el crecimiento de cadenas de RNA por acción de la RNA pol (RANP)

  4. Objetivo • Demostrar que TtDnaA y TtNusGs de T. tengcongensis interactúan tanto in vitro como in vivo en procesos de replicación de ADN.

  5. Plásmidos utilizados en este estudio

  6. Oligonucleótidos utilizados en este estudio

  7. Experimento de doble hibrido PCR Amplificación de los genes de TtDnaA y Nus G Los productos fueron cortados con enzimas de restricción y clonados en pGADT7 y pGBDT7 Para generar plásmidos de fusión que contenía el domino activo (AD) y el dominio de unión (BD) Así podían meter los plásmidos a la levadura y producir cada uno de los fragmentos proteicos por separado o en las combinaciones que querían Se determinó la actividad transcripcional mediante la cuantificación del gen reportero (X-Gal)

  8. Resultados Análisis de la interacción entre los híbridos de levadura TtDnaAy TtNusG2 de T. Tengcongensis.

  9. Resonancia de superficie de plásmidos

  10. Co-inmunoprecipitación entre la TtDnaAnativa y TtNus G2 en vivo. Los extractoscelularestotales y el precipitado de muestras sin anticuerposfueron los controlespositivo y negativo

  11. Determinación de la región de DnaAque interacciona con NusG2

  12. CONCLUSIONES La proteína NusG2 interacciona con la proteína DnaA tanto in vivo como in vitro Es posible que NusG2 participe en la regulación de la replicación del cromosoma (inicio) por que regula la expresión DnaA a través de la interacción con la caja DnaA al inicio del promotor, lo que acelera la actividad de la RNApol. los niveles de proteína DnaA que será utilizada para la replicación

  13. Escogemos el Vector: plásmidos comerciales Insertamos el gen de la proteína en la sitio de clonaje. La proteína de fusión será precedida de la la ß-galactosidasa (lacZ). El plásmido así transformado se introduce en una bacteria o levadura a la que se le ha suprimido el gen lacZ. Vector

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