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病毒感染的检测与防治原则

病毒感染的检测与防治原则. 病毒感染的检测. 一、标本的采集与运送. 急性期标本； 根据感染性质取不同的标本； 标本置于转运液中； 冷藏快运； 血清标本需取双份。. 二、病毒分离培养 1 、病毒分离的一般程序 处理标本 病毒培养（鸡胚接种、动物接种和细胞培养） 判断病毒生长情况. 2 、病毒培养方法 动物接种 鸡胚接种 细胞培养. （ 1 ）原代细胞培养： 动物或人组织直接用蛋白酶消化所得的细胞经体外培养 后可贴壁或悬浮生长。 （ 2 ）二倍体细胞株：

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病毒感染的检测与防治原则

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Presentation Transcript

  1. 病毒感染的检测与防治原则

  2. 病毒感染的检测 一、标本的采集与运送 • 急性期标本； • 根据感染性质取不同的标本； • 标本置于转运液中； • 冷藏快运； • 血清标本需取双份。

  3. 二、病毒分离培养 • 1、病毒分离的一般程序 • 处理标本 • 病毒培养（鸡胚接种、动物接种和细胞培养） • 判断病毒生长情况

  4. 2、病毒培养方法 • 动物接种 • 鸡胚接种 • 细胞培养

  5. （1）原代细胞培养： 动物或人组织直接用蛋白酶消化所得的细胞经体外培养 后可贴壁或悬浮生长。 （2）二倍体细胞株： 在体外连续培养50~60代仍保持其二倍染色体数目的单型细胞。为生产人用疫苗的首选细胞株。 （3）传代细胞系 能在体外连续传代、来自癌细胞或发生自发转化、突变 的原代细胞或二倍体细胞株。

  6. 判断病毒增殖的方法 （1）细胞病变效应（cytopathic effect, CPE） 溶细胞型病毒感染细胞后，可出现细胞团缩、裂解或细胞肿大、数个细胞融合成多核巨细胞或细胞聚集成葡萄串状、脱落或死亡等。

  7. epithelial cells - adenovirus uninfected early infection late infection slides from CDC

  8. （2）红细胞吸附(hemadsorption)：流感病毒和某些副粘病毒感染细胞后24～48小时，细胞膜上出现病毒的血凝素，能吸附豚鼠、鸡等动物及人的红细胞，发生红细胞吸附现象。（2）红细胞吸附(hemadsorption)：流感病毒和某些副粘病毒感染细胞后24～48小时，细胞膜上出现病毒的血凝素，能吸附豚鼠、鸡等动物及人的红细胞，发生红细胞吸附现象。 （3）干扰现象

  9. 病毒量测定 （1）测定病毒数量可用空斑形成单位（PFU）表示。一个空斑是标本中一个病毒大量复制所致，有感染性的病毒经适当稀释后接种于单层细胞，由于单个病毒的复制增殖使局部单层细胞脱落，此即空斑。经染色后空斑可用肉眼观察，计算空斑数即可计数病毒数量。

  10. PLAQUE ASSAY

  11. PLAQUE ASSAY

  12. PLAQUE ASSAY PLAQUE ASSAY

  13. （2）50%致死量（LD50）或50%组织细胞感染量（TCID50）的测定：

  14. 三、光学显微镜和电子显微镜 1、光学显微镜：观察病毒的包涵体

  15. 2、电子显微镜：直接观察病毒

  16. 四、检测病毒抗原的快速方法 1、免疫荧光技术 2、ELISA 3、免疫印迹试验 4、放射免疫法

  17. a、ELISA Anti -capture assay

  18. ELISA Anti -capture assay Anti-IgM

  19. ELISA Anti -capture assay Patient serum Anti-IgM

  20. ELISA Anti -capture assay Antigen Patient serum Anti-IgM

  21. ELISA Anti -capture assay E E Antibody Antigen Patient serum Anti-IgM

  22. b、ELISA Competition assay Antigen

  23. ELISA Competition assay Patient serum Antigen E E

  24. ELISA Competition assay E E Marked Antibody Patient serum Antigen

  25. ELISA Competition assay E E Marked Antibody Patient serum Antigen Antigen

  26. ELISA Competition assay E E Marked Antibody Patient serum Antigen Antigen

  27. ELISA Competition assay E E Marked Antibody Patient serum Antigen Antigen Positive Negative

  28. c、Specific IgG-Antibody Virus

  29. Specific IgG-Antibody Virus Patient serum

  30. Specific IgG-Antibody E E Anti-IgG Patient serum Virus

  31. 五、病毒感染的血清学诊断方法 1、中和试验（病毒加抗体，结果病毒失去感染性） 2、补体结合试验 3、红细胞凝集和凝集抑制试验

  32. 六、检测病毒核酸的方法 （一）分子杂交技术 （二）PCR

  33. PCR cycler

  34. 病毒感染的防治 病毒感染的预防 1、灭活疫苗 2、减毒活疫苗 Fig Edward Jenner vaccinating (inoculating) James Phipps with cowpox material.

  35. 注意事项 • 减毒疫苗回复突变导致毒性增强； • 在免疫系统受损的人中导致疾病； • 导致先天缺陷，尤其是在怀孕头3个月接种活疫苗； • 疫苗株传给未接种的人导致发现新的先前不知道的并发症。 • 减毒疫苗和其他病毒重组。

  36. 3、现代疫苗 • 基因工程的疫苗 • 核酸疫苗 • 其他类型的疫苗： 合成肽疫苗 • 抗独特型疫苗 • 联合多价疫苗等

  37. 抗病毒治疗 1、抗病毒药物或制剂 （1）核苷类药物：阻抑子代病毒结构基因的合成与表达。 （2）病毒蛋白酶的抑制剂：阻止大分子病毒蛋白的降解。 （3）其他：IFN、TNF、IL-2、中草药等抑制病毒复制。 （4）抗病毒基因治疗：asODN、asON、ribozyme 策略：作用于病毒复制周期的不同环节 2、免疫制剂

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