1 / 33

免 疫 学 检 测（ P186 ）

免 疫 学 检 测（ P186 ）. 抗原或抗体的检测. 原理 抗原抗体反应的特异性 抗原抗体反应的可见性. Precipitation. 1 、凝集反应 2 、沉淀反应 血清蛋白质、细胞裂解液或组织浸液等可溶性抗原与相应抗体结合后出现沉淀物，称之。 3 、补体参与的反应 4 、免疫标记技术 免疫荧光法： 直接荧光法、间接荧光法 ELISA ：双抗体夹心法、间接法等. 实验内容. 一、特异免疫功能检测： 1 、血清中总 IgG 检测：单向琼脂扩散法（示教） 2 、 ELISA 法检测血清中抗 HBs IgG 二、沉淀反应 1 、人血清的检测：环状沉淀法

kirby-frazier
Download Presentation

免 疫 学 检 测（ P186 ）

An Image/Link below is provided (as is) to download presentation Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author. Content is provided to you AS IS for your information and personal use only. Download presentation by click this link. While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server. During download, if you can't get a presentation, the file might be deleted by the publisher.

E N D

Presentation Transcript

  1. 免 疫 学 检 测（P186）

  2. 抗原或抗体的检测 原理 • 抗原抗体反应的特异性 • 抗原抗体反应的可见性

  3. Precipitation

  4. 1、凝集反应 2、沉淀反应 血清蛋白质、细胞裂解液或组织浸液等可溶性抗原与相应抗体结合后出现沉淀物，称之。 3、补体参与的反应 4、免疫标记技术 免疫荧光法：直接荧光法、间接荧光法 ELISA：双抗体夹心法、间接法等

  5. 实验内容 • 一、特异免疫功能检测： • 1、血清中总IgG检测：单向琼脂扩散法（示教） • 2、ELISA法检测血清中抗HBs IgG • 二、沉淀反应 • 1、人血清的检测：环状沉淀法 • 2、AFP 检测：双向琼脂扩散法（示教）、免疫电泳法（示教）

  6. 沉淀反应(precipitation) • 概念： • 种类：环状法、絮状法、琼脂扩散法、对流免疫电泳等。 • 琼脂扩散法又包括：单向琼脂扩散试验、双向琼脂扩散试验；与电泳技术结合免疫又有火箭电泳、对流免疫电泳、免疫电泳等。

  7. 单向琼脂扩散试验 • 定量实验：检测可溶性抗原的量

  8. Mechanism of single and double diffusion

  9. Single diffusion

  10. 双向琼脂扩散试验 3孔 2孔 4孔 5孔 1孔 6孔

  11. 双扩实验结果分析

  12. Ag1 Ag1 Ag1 Ag2 Ag1 Ag2 Ag2 Ab1 Ab2 Ab1 Ab1 Ab2

  13. 对流免疫电泳 • 原理：带电的抗原、抗体在电场中由于受到电场力的作用相对运动，相遇时如果相对应，则发生结合反应，出现肉眼可见的沉淀线。

  14. AFP向正极移动； • 抗AFP向负极移动； 抗体孔 抗原孔

  15. 对流免疫电泳 原理 • 抗原与抗体在电场中的移动方向 • 与其带的电荷是正电荷还是负电荷有关 • 带电荷与其等电点及环境溶液的PH大小有关 • AFP等电点：PH4-5 • 抗AFP等电点：PH6-7 • 缓冲液：PH8.6 • 与其所受到的电泳力及电渗力的大小有关

  16. AFP及抗AFP均带负电荷，但AFP的负电荷大于抗AFP；所受到的电泳力均向正极方向移动；AFP及抗AFP均带负电荷，但AFP的负电荷大于抗AFP；所受到的电泳力均向正极方向移动； • 电渗力：由于固相的琼脂本身带电荷（负电荷）在电场中受到电泳力作用有向正极移动的趋势，由此产生的使液相的物质向反向（负极）移动的作用力。 电渗力 电泳力

  17. 缓冲液：PH8.6 抗AFP (PH6-7) AFP (PH4-5) 电渗力 电泳力

  18. 环状沉淀试验 • 实验材料： 1、家兔抗人血清 2、人血清稀释液 3、牛血清稀释液 4、N.S (生理盐水) 5、铁孔座：1个/2人 公用，6套/室

  19. 方法：加样 先加抗人血清 图3 图2 图1 注意加样时勿带气泡 注意加抗原时要缓慢沿管壁加入

  20. 酶联免疫吸附实验(ELISA) 定义：运用酶标记免疫技术进行液体标本中微量物质测定的实验方法。

  21. 基本原理 原理 反应 加入待测抗体或 抗原和酶标抗原 或抗体 包被 2 1 洗涤 使结合在固相上 的抗原抗体复合物 与未结合的分离 3 4 底物显色 定性或定量的分析

  22. HBV血清学标志物检测

  23. 乙肝病毒的结构及组成成分 HBsAg+PreS2 HBsAg (hepatitis B surface antigen) HBcAg (hepatitis B core antigen) DNA HBsAg+PreS2+PreS1 Polymerase HBeAg (hepatitis B e antigen)

  24. HBV血清学标志物检测原理(ELISA) 抗-HBs检测 - 双抗原夹心法 抗原包被 阳性血清(含抗体) 加终止液 加酶作用底物 洗涤

  25. 实验步骤 1、分别试剂盒，取出包被板，做好标记。 2、 在包被孔中分别加入50ul待检血清， 3、贴上板贴，置37℃温箱中孵育30分钟。 4、洗板5次: 先弃去各孔液体、拍干，用洗涤液 注满各孔，防止串流，停留5~10秒后弃去， 反复5次，每次均拍干。 5、加入底物液1滴/孔，随即加入显色剂1滴/孔， 充分混匀，置 37℃避光温育10分钟。 6、加终止液1滴/孔，混匀后肉眼观察结果。 明显显色者为阳性，无色为阴性 3、随即加入酶结合物1滴/孔，振荡混匀。

  26. 注意事项 1、手工洗板时注意防止污染相邻孔。 2、血清污染的实验材料均应按传染性样品处理， 放置于指定容器中。操作过程中注意防护。

More Related