Методы диагностики причин возникновения тромбоцитопении.

1. Методы диагностики причин возникновения тромбоцитопении. Российский Кардиологический Научно-производственный Комплекс. Институт экспериментальной кардиологии. Московская гимназия на Юго-Западе № 1543. Даниил Халангот. Научные руководители: Антонова Ольга Александровна Хаспекова Светлана Георгиевна Москва 2012

2. Что такое тромбоцитопения? • Тромбоцитопения - состояние, характеризующееся снижением количества тромбоцитов в крови ниже 150·109/л • Причины возникновения: повышенное разрушение тромбоцитов, сниженная продукция тромбоцитов в костном мозге и повышенная секвестрация (неспецифическое задержание тромбоцитов в селезенке).

3. Виды тромбоцитопений. • Идиопатическая тромбоцитопеническая пурпура (ИТП) • Неонатальная аллоиммунная ТП • Неонатальная трансиммунная ТП • Псевдотромбоцитопения. • Гаптеновые ТП • Лекарственные ТП • Тромбоцитопении, ассоциированные с вирусной инфекцией  • Рефрактерность к переливанию тромбоцитов

4. Гликокалицин • Гликокалицин (ГК) представляет собой крупный (молекулярная масса 125 кД) внеклеточный протеолитический фрагмент одного из главных мембранных белков тромбоцитов — гликопротеина lb.

5. Задачи и цели. • Освоить метод лабораторной диагностики, позволяющий определить концентрацию растворимого гликокалицина, как метода определения пролиферативной функции мегакариоцитов. • Освоить метод лабораторной диагностики, позволяющий определить уровень тромбоцитассоциированных антител. • Освоить метод лабораторной диагностики, позволяющий определить уровень аллоиммунных антител против антигенов на поверхности тромбоцитов. • Сравнить полученные результаты анализа крови пациентов с тромбоцитопенией разного генеза и у здоровых доноров. • Охарактеризовать практическое значение методов для современной клинической диагностики.

6. Материалы и методы. В работе были исследованы следующие методы: • Радиоиммунный метод (РИА) для определения тромбоцит-ассоциированных антител (ТААТ). • Иммуноферметный анализ (ИФА) для определения сывороточных антител (сАТ) • “Сэндвич” – ИФА для определения гликокалицина

7. “Сэндвич” ИФА для определиния гликокалицина

8. Определение ТААТ IgG с помощью прямого РИА.

9. Определение сывороточных антитромбоцитарных антител с помошью непрямого ИФА • 1. Прикрепление тромбоцитов отца/матери к пластику • 2. Инкубация тромбоцитов отца/матери с исследуемой сывороткой • 3. Добавление Рох-АТ • 4. Добавление хромогенного субстрата.

10. Результаты. • Был проведен «сэндвич» ИФА для определения концентрации гликокалицина, чтобы убедиться в иммунном генезе тромбоцитопении. • РИА, чтобы выяснить количество ТААТ. • ИФА на адсорбированных тромбоцитах для определения аллоиммунной тромбоцитопении.

13. Результаты пациента №10 1 2 3 4 цитрат Na ЭДТА 0ч ЭДТА 2ч ЭДТА 4ч

14. Выводы. • Представленные в работе методы позволяют диагностировать пациентов без болезненного вмешательства, например, пункций костного мозга.

15. Сниженное концентрация гликокалицина в крови указывает на недостаточную пролиферацию тромбоцитов в костном мозге. Повышенное количество ТААТ является признаком иммунного происхождения тромбоцитопении. При неонатальной аллоиммунной ТП антитела матери действуют против тромбоцитов в плазме отца (которые идентичны тромбоцитам детей). Измерения лучше всего проводить сразу после забора крови, чтобы избежать образования агрегатов в ЭДТА.

16. Благодарю: • Ольгу Александровну Антонову и Светлану Георгиевну Хаспекову за активную помощь в проведении работы. • Парнеса Евгения Яковлевича за рецензию на данную работу. • Глаголева Сергея Менделевича за предоставленную возможность провести научную работу.

17. Спасибо за внимание!