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第十八章 羊水检验 The Examination of Amniotic Fluid. KEY POINTS. 1. Alterations of color and clarity and the significance. 2. Evaluation indexes of fetal maturity and the significance. 3. Methodology assessment and quality control of foam stability test.
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第十八章 羊水检验 The Examination of Amniotic Fluid
KEY POINTS 1. Alterations of color and clarity and the significance. 2. Evaluation indexes of fetal maturity and the significance. 3. Methodology assessment and quality control of foam stability test. 4. Examination indexes of toxoplasma, others, rubella virus, cytomegalovirus and herpes simplex virus (TORCH) infection. 5. Evaluative indexes of fetal dysplasia and the significance.
前言 98%~99% 50% 有机物---- 无机盐---- 细 胞--- 1%~2% 功能:保护母体和胎儿。 水---- 组成: 溶质-- 50% 极少量
第一节 标本采集与处理 一、标本采集 羊膜穿刺多由妇产科医师进行。
10~30ml。 标本采集量: 标本采集最佳时间: ①诊断遗传性疾病--- ②诊断Rh溶血症---- ③评估胎儿成熟度-- 妊娠16~20W。 妊娠26~36W。 妊娠晚期(≥35W)。
第二节 羊水理学检验 一、量 【参考范围】 ①妊娠8周:5ml。 ②妊娠10周:30ml。 ③妊娠20周:400ml。 ④妊娠38周:1000ml。 ⑤足月妊娠:800ml。 ⑥过期妊娠:<300ml。
【临床意义】 羊水过多(polyhydramnios):妊娠任何时期羊水量>2 000ml。 羊水过少(oligohydramnios):妊娠足月时羊水量<300ml。
1.羊水过多的原因 ①胎儿畸形 ②多胎妊娠 ③孕妇和胎儿疾病 ④胎盘和脐带病变
2.羊水过少的原因 ①胎儿畸形 ②过期妊娠 ③胎儿宫内发育迟缓 ④羊膜病变
二、颜色与透明度 ①妊娠早期:无色或淡黄色、清晰、透明; ②妊娠晚期:乳白色、清晰或稍混浊。
【临床意义】 黄绿色:表示羊水中混有胎粪,为胎儿窘迫的现象。 棕红色或褐色:多为胎儿已经死亡。 金黄色:可能为母婴血型不合所引起的羊水中胆红素过高。 粘稠拉丝的黄色:表示妊娠过期或胎盘功能减退。 混浊脓性或带有臭味者:表示宫腔内已有明显感染。
三、泡沫试验 【检测原理】 羊水中的肺泡表面活性物质饱和磷脂是既亲水又亲脂的两性物质,在乙醇中振荡后形成的泡沫可维持数小时,并形成稳定泡沫层。 而其他物质形成的泡沫,能被乙醇消除。 用于诊断胎儿肺成熟程度。
【参考范围】 阳性(稀释度为1∶1和1∶2的两管液面均出现泡沫环)。
【临床意义】 • 临床上只进行稀释度为1∶1和1∶2的泡沫试验。 • 若2管液面均出现泡沫环为阳性,则提示L/S比值≥2.0,表示胎儿肺成熟。 • 若仅第1管液面出现泡沫环,为临界值,L/S比值在1.5~2.0之间。 • 若2管液面均未出现泡沫环为阴性,L/S比值≤1.49,提示胎儿肺未成熟。
第三节:羊水化学与免疫学检验 一、甲胎蛋白 (AFP ) 【检测原理】 火箭免疫电泳法 放射火箭免疫电泳法 放射免疫法 酶联免疫吸附法
【参考范围】 ①妊娠15周:40mg/L。 ②妊娠32周以后:25mg/L。 【临床意义】 1.AFP减低 见于葡萄胎、唐氏综合征。
2.AFP增高 ①开放性神经管缺陷的胎儿。 ②脐膨出、消化道畸形胎儿。 ③先天性肾病、先天性食管闭锁、胰腺纤维囊性变、双胎、死胎等。 ④染色体异常、糖尿病、先兆子痫、母婴Rh血型不合等。 ⑤羊膜穿刺所致的胎血污染。
二、胆碱酯酶 【检测原理】 ChE测定:丙酰硫代胆碱或乙酰胆碱作为底物,2-硝基苯甲酸为显色剂的速率法或终点法。 AChE测定:聚丙烯酰胺凝胶电泳分析法。 【参考范围】 AChE<10.43U/L。
【临床意义】 1.羊水中AChE活性增高与胎儿开放性神经管畸形有高度的相关性。 2.AChE/PChE比值: >0.27者可诊断为神经管缺损, ≤1.0者可诊断为开放性腹壁缺陷胎儿。 3.AChE活性测定:可纠正羊水AFP的假阳性。
三、卵磷脂与鞘磷脂 【检测原理】 薄层层析色谱法(thin-layer chromatography ; TLC)。 【参考范围】 L/S比值≥2.0。
【临床意义】 L/S<1.49:表示肺脏不成熟,IRDS (特发性呼吸窘迫综合征)严重; L/S为1.50~1.99:表示肺脏发育不够成熟,有IRDS可能; L/S为2.0~3.4:表示肺脏已成熟; L/S为3.5~3.9:表示肺脏肯定成熟; L/S>4.0:表示过熟儿。
四、肌酐 【检测原理】 肌酐与苦味酸反应,生成橘红色的苦味酸肌酐复合物。 肌酐测定方法有去蛋白终点法和速率法。 【参考范围】 妊娠37周:>176.8μmol/L。
【临床意义】 判断胎儿肾脏成熟度,准确率高。 妊娠37周时,羊水肌酐: >176.8μmol/L提示胎儿肾脏成熟; 为132.6~176.7μmol/L为临界值; <132.5μmol/L提示胎儿肾脏未成熟。
五、睾酮 【检测原理】 ELISA法或放射免疫法。 【参考范围】 ①男性胎儿:(224±11)μg/L。 ②女性胎儿(39±2)μg/L。
【临床意义】 1.预测胎儿性别。 2.妊娠合并糖尿病、母婴Rh血型不合、无脑儿羊水睾酮水平可降低。 3.结合染色体检查, 诊断胎儿性疾病。
六、雌三醇 【检测原理】 ELISA法或放射免疫法。 【参考范围】 妊娠末期:0.8~1.2mg/L
【临床意义】 1.直接反映胎儿-胎盘功能。 2.间接的反映胎儿在宫内发育的情况。 ①雌三醇<1.0mg/L,胎儿预后不良; ②雌三醇突然下降,可能为先兆流产。 ③雌三醇减低,多见于母婴Rh血型不合、妊娠合并糖尿病、重度妊娠高血压综合征时的宫内死胎。 ④雌三醇持续性处于低值者,可见于胎盘性硫酸酯酶缺乏症
七、胆红素 【检测原理】 光谱分析法,改良J-G法,胆红素氧化酶法和二甲亚砜(DMSO)法。 【参考范围】 <1.71μmol/L(△A450<0.02)。
【临床意义】 ①判断胎儿安危、观察胎儿肝脏成熟程度的胆红素水平。 ②监测胎儿溶血程度,以决定分娩时机。
八、葡萄糖 【检测原理】 葡萄糖氧化酶(GOD)法, 己糖激酶(HK)法, 邻甲苯胺(O-TB)法。 【参考范围】 <0.56mmol/L。
【临床意义】 1.判断胎儿肾脏成熟程度的指标。 <0.56mmol/L,提示胎儿肾脏发育成熟。 >0.80mmol/L,提示胎儿肾脏不成熟。 2.但判断肾脏成熟程度的精确度不如羊水肌酐。
九、淀粉酶 【检测原理】 碘-淀粉酶比色法, 对-硝基苯麦芽庚糖苷(4NP-G7)法。 【参考范围】 300 Somogyi U/L。
【临床意义】 主要用于判断胎儿唾液腺成熟程度。 1.大于300 Somogyi U/L,提示胎儿唾液腺成熟; 2.200~300 Somogyi U/L为临界值; 3.小于200 Somogyi U/L为胎儿唾液腺不成熟。
十、反三碘甲状腺原氨酸 【检测原理】 RIA法。 【参考范围】 2.62~8.31nmol/L。 【临床意义】 用于诊断胎儿甲状腺疾病。 水平降低见于胎儿甲状腺功能减退。
十一、血型物质 • ABH分泌型血型的预测 【检测原理】 羊水中分泌的血型物质可将相应抗血清中抗体中和。
Judgement of blood type Resultant of agglutination anti-A serum anti-B serum anti-H serum secretion of A blood group - 4+ 4+ Secretion of B blood group 4+ - 4+ secretion of O blood group 4+ 4+ - secretion of ABblood group - - 4+ Non-secretion of blood group 4+ 4+ 4+
2. ABH(O)血型酶的测定 【检测原理】 • A基因产生的N-乙酰氨基半乳糖转移酶,形成A血型物质。B基因产生的D-半乳糖转移酶,形成B血型物质。 • 当有糖供体、Mn++与O型红细胞共同孵育时,羊水中的转移酶可在红细胞膜上合成A或B物质。 • 利用血型测定的方法可检测非分泌型胎儿的血型。
【临床意义】 • 为有严重ABO同种免疫史的孕妇非分泌型的胎儿血型鉴定提供了可能。 • 为在位于ABO基因部位的遗传性疾病的产前诊断提供了可能。
第四节 羊水显微镜检验 一、羊水脂肪细胞计数 【检测原理】 脂肪细胞计数是反映胎儿皮肤成熟程度的指标。将羊水涂片用尼罗蓝水溶液染色后,显微镜下观察,计数200~500个细胞,计算脂肪细胞阳性率。
【参考范围】 妊娠34周前羊水脂肪细胞≤1%; 34~38周为1%~10%; 38~40周为10%~15%; 40周以后大于50%。 【临床意义】 大于20%为胎儿皮肤成熟的指标。 10%~20%为临界值。 小于10%为皮肤不成熟。 大于50%为皮肤过熟。
二、羊水快速贴壁细胞计数 【检测原理】 1.正常羊水细胞需要4~5d才能贴壁生长。 2.胎儿畸形,如神经管缺陷及脐疝畸形时,羊水细胞仅需20h即可贴壁生长,此种细胞称为快速贴壁细胞(RAC),具有贴壁生长快、活细胞贴壁率高的特点。通过计算活细胞贴壁率,来判断有无畸形。
【参考范围】 <4%。 【临床意义】 RAC主要用于胎儿畸形的诊断。 脐疝畸形的RAC为9%~12%, 无脑儿的RAC为100%。
第五节 羊水病原生物学检验 一、病毒 1.风疹病毒检查 【检测原理】 ①病毒分离培养法。 ②血凝抑制试验。 ③风疹病毒特异性IgM测定。 ④PCR:灵敏度高,特异性强,具有早期快速诊断的价值。
【临床意义】 风疹病毒是引起胎儿畸形的病毒之一 ①妊娠1~2周感染风疹病毒者,胎儿严重畸形发生率为30%~80%; ②妊娠12~18周感染风疹病毒者,10%~20%胎儿可有智力障碍和听力缺陷; ③妊娠18周以后感染风疹病毒的危害性很低。
2.巨细胞病毒检查 巨细胞病毒是疱疹病毒的一种。 WHO已将其列为引起新生儿出生缺陷的主要病原体。 3. 单纯疱疹病毒检查 单纯疱疹病毒是疱疹病毒的一种。 与胎儿和新生儿有关的主要是Ⅱ型。
二、弓形虫 【检测原理】 ①组织学:可直接寻找弓形虫的滋养体、包囊或卵囊等。 ②血清学:有Sabin-Feldman染色试验、补体结合试验、间接荧光抗体试验或间接血凝试验等。 ③PCR:以B1基因、200-300重复序列(AF146527)或16S rDNA为目的基因。
【临床意义】 可引起弓形虫病,为人畜共患疾病。 孕妇感染弓形虫后,除了通过胎盘感染胎儿外,还可经过羊水进入消化道而使胎儿感染。 孕妇感染弓形虫后,可造成流产、早产、胎儿小头畸形、脑积水、视力障碍、智力发育缺陷等畸形。
第六节 羊水检验的质量控制与临床应用 一、质量控制 ①AFP:母体AFP检测连续2次阳性时,再考虑是否行羊水AFP检查。 ②羊水胆红素检测:要求避光。 ③羊水泡沫试验:新鲜标本或4℃冷藏。操作时需用力振荡。
二、临床应用 • 产前诊断
(一)产前诊断 1.神经管缺陷性疾病 ( NTD ) ①母体血清和羊水AFP增高。 ②羊水AFP增高除了见于NTD以外,还可见于死胎、先天性食管闭锁及某些染色体病。 ③RAC对诊断NTD具有高度的特异性和灵敏度。无脑儿的RAC贴壁率为100%,脐疝畸形RAC贴壁率为9%~12%。