PROPIEDADES DE ÁCIDOS NUCLEICOS

1. PROPIEDADES DE ÁCIDOS NUCLEICOS Transferencia de material genético II

2. DNA • La extensión de DNA que tiene cada organismo no es la misma. • El DNA a pesar de su extensión tiende a formar una estructura helicoidal compacta.

3. Estructura del DNA • Doble hélice • Estabilizada por puentes de hidrógeno • En la célula generalmente superempacada o superenrollada

4. Conformaciones de un plásmido • Linealizado: Es decir cuando se ha cortado ambas cadenas del DNA sólo una vez. • Parcialmente linealizado: Cuando se ha cortado el DNA en una de las cadenas • DNA relajado circular. DNA que no se ha empacado. • Superenrrolado: Covalentemente cerrado y muy empacado • Superenrollado desnaturalizado. Parecido al anterior pero un poco menos empacado

5. Superenrollamiento plásmido • Existen varias conformaciones de los plásmidos en el estado superenrollado. • Por lo que pueden migrar en un campo eléctrico de manera muy diferente cada uno a pesar de tener el mismo peso molecular

6. DNA se puede desnaturalizar • El calor, pH, la concentración de iones, influyen en la estabilidad de la doble hélice. • En la desnaturalización se deshace su estructura nativa, es decir se eliminan sus puentes de hidrógeno. • Dos hebras separadas que se pueden volver a unir.

7. Temperatura de fusión: Tm • Temperatura a la cual el 50% del DNA se encuentra en la forma desplegada. • Al monitorear su absorbancia a 260 nm se observa que hay un aumento en está conforme alteramos o despegamos la doble hélice EFECTO HIPERCRÓMICO

8. Plásmido • Determinación de concentración

9. Plásmido • Determinación de pureza • Determinación de integridad (corrimiento electroforético)

10. COMO SE SEPARAN LAS DIFERENTES FORMAS DEL PLÁSMIDO EN UN GEL?

11. Supercoiled: the normal state of plasmids inside coli cells. Carefully done preps contain mostly supercoiled plasmid. These run faster on a gel than the cut linear plasmid fragment.Nicked plasmid: results from damage to the supercoiled DNA resulting in loss of supercoiling. Often this is nicking a single strand. Runs more slowly than a linear DNA of the same length. Produced by ligating DNA into a circular plasmid when the vector has been treated with CIP or SAP.Relaxed or covalently closed DNA: Can be produced by using topoisomerase I enzyme acting on supercoiled plasmid DNA. This is the form produced on ligating DNA into a circular plasmid. Runs at a similar speed as nicked plasmid.Linear DNA: result of double strand nick or restriction enzyme cutting of supercoiled or relaxed plasmid.Denatured plasmid: strands are not paired over the full length. Runs more slowly than linear or relaxed plasmid.