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结直肠癌异时性肝转移的分子标志物： miR-181a 及其生物学功能

结直肠癌异时性肝转移的分子标志物： miR-181a 及其生物学功能. 顾晋 陈治国 北京肿瘤医院 北京大学临床肿瘤学院. 研究背景. microRNA 的概念及其作用机制. 研究背景. miRNA 对肿瘤的发生发展起着重要的作用 miRNA 在不同肿瘤组织中具有特征性表达模式 miRNA 与肿瘤的生物学行为密切相关 可用于诊断 CLL 、乳腺癌和软组织肉瘤等肿瘤 miRNA 与结直肠癌（ CRC ）肝转移的关系？. 实验目的. 筛选可能有助于预测 CRC 肝转移的 miRNAs CRC 肝转移相关的 miRNAs 功能研究. 实验方案. 无肝转移的 CRC.

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结直肠癌异时性肝转移的分子标志物： miR-181a 及其生物学功能

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Presentation Transcript

  1. 结直肠癌异时性肝转移的分子标志物：miR-181a及其生物学功能结直肠癌异时性肝转移的分子标志物：miR-181a及其生物学功能 顾晋 陈治国 北京肿瘤医院 北京大学临床肿瘤学院

  2. 研究背景 • microRNA的概念及其作用机制

  3. 研究背景 • miRNA对肿瘤的发生发展起着重要的作用 • miRNA在不同肿瘤组织中具有特征性表达模式 • miRNA与肿瘤的生物学行为密切相关 • 可用于诊断CLL、乳腺癌和软组织肉瘤等肿瘤 • miRNA与结直肠癌（CRC）肝转移的关系？

  4. 实验目的 • 筛选可能有助于预测CRC肝转移的miRNAs • CRC肝转移相关的miRNAs功能研究

  5. 实验方案 无肝转移的CRC 肝转移 伴有同时性肝转移的CRC miRNA表达的芯片检测 生物信息学分析 分子生物学验证 组织芯片构建 原位杂交检测 筛选出CRC肝转移相关miRNAs

  6. 实验方案 低转移潜能CRC细胞系HT29 携带miRNA前体的慢病毒表达载体 裸鼠移殖瘤 体外培养 病毒感染 接种 基因增强表达效率测定 比较转染前后生物学性状的改变 裸鼠局部成瘤能力 浸润能力 裸鼠局部瘤的转移潜能 生长增殖

  7. 实验结果 • 完成miRNA芯片检测 • 无肝转移的CRC组织：5例 • 伴有同时性肝转移的CRC组织：5例 • 筛选出7个在两组间差异表达倍数大于1.7倍的miRNAs • miR-181a，152，320a • Let-7d，miR-15b，20b，223

  8. 实验结果 • 构建组织芯片 • 同时性肝转移的CRC原发灶 ：n=160 • 异时性肝转移的CRC原发灶 ：n=37 • 无肝转移的CRC原发灶：n=97 • 远癌正常CRC粘膜：n=72 • 原位杂交 • Dig标记的LNA探针

  9. 实验结果 • 构建慢病毒过表达载体 • LV-miR-181a-GFP • LV-NC-GFP • 慢病毒载体转染HT29细胞系

  10. 实验结果 Figure 1. miRNA detection in colorectal cancer tissues by LNA-ISH.

  11. 表1. miRNAs在CRC组织中的表达情况

  12. Figure 2. . overall survival in CRC patients with different expression level of miR-181a

  13. Figure 3.The expression of reporter gene GFP in HT29 cell line

  14. Figure 4.The fold change of the miR-181a expression in cell line

  15. Figure 5. miR-181a enhance the proliferation of HT29 cell

  16. Figure 6. miR-181a enhance the migration of HT29 cell in vitro

  17. Figure 7. miR-181a enhance the migration and invasion of HT29 cell in vitro

  18. Figure 8. In vivo tumor growth in NOD-SCID mice

  19. Figure 9. Xenograft tumors in three groups

  20. 结论 • miR-181a对预测CRC异时性肝转移可能具有重要的意义 • miR-181a高表达是预后不良的分子标志物 • miR-181a促进HT29细胞的生长，迁移和浸润 • 对miR-181a功能的后续研究可能有助于阐明CRC异时性肝转移的调控机理

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