Automated Hematology Dr.P.Dahim Health Reference Laboratory

1. Automated Hematology Dr.P.Dahim Health Reference Laboratory

2. Principles of Automation • Calibration • Quality Control • Flagging

3. Hematology Automation • Two General Principles • Electronic resistance ( impedance) • Light scattering

4. Electronic Resistance (Impedance) • Utilizes non-conductive properties of blood cells • as blood cell passes through orifice of aperture it displaces its own volume • increased resistance between electrodes results in an electrical pulse • RBCs and Platelets counted together, separated by pulse heights • hydrodynamic focusing forces cells to pass single file through sensing zone

5. Cell counting

6. Light scattering • Cells counted as passed through focused beam of light( LASER) • Sum of diffraction(bending around corners), refraction (bending due to change in speed) and reflection (light rays turned back by obstruction). • Multi angle polarized scatter separation (M.A.P.S.S) • 0° : indicator of cell size • 10° : indicator of cell structure and complexity • 90° polarized: indicates nuclear lobularity • 90° depolarized: differentiate eosinophils

7. Principles of counting &sizing • Counting and sizing red cells ,WBCs , Plts by counting the number of pulses and height of pulses • Measuring Hb by modified HiCN method • Measuring MCV by computing the mean of height of pulses • Hct (PCV ) derived from MCV & RBC • MCH derived from Hb & RBC • MCHC derived from Hb , RBC & MCV

8. RDW: SD or CV of individual measurement of red cell volume • HDW :The degree of variation in red cell hemoglobinization,CV of measurements of hemoglobin concentration of individual cells • NRBC: included in the WBC counting

9. WBC Differential Count : • Impedance technology with current of various frequencies • Light scattering & light absorbance

10. Reticulocyte counting : • Flourescence – based methods

11. Histograms • RBC, PLT, and WBC plotted on histogram • X-Axis • Cell size in femtoliters (fL) • Y-Axis • # of cells

12. Histogram WBC: Distribution with three individual peaks and valleys at specific regions representing the lymphocytes, monocytes, and granulocytes. All curves normally start and end at baseline

13. مشخصات شناسنامه دستگاههای شمارشگر سلولی خودکار 1-تاريخ خريد 2- تاريخ نصب ، کاليبراسيون و نام فرد راه اندازی کننده 3- تاريخ شروع بکار 3-کارخانه و کشور سازنده 4- مدل وشماره سريال دستگاه 5- شرايط دستگاه هنگام خريد (نو ، مستعمل ، بازسازی شده ) نکته : علاوه بر شناسنامه ، موارد زير نيز برای هر سل کانتر می بايست بصورت مکتوب در آزمايشگاه موجود باشد .

14. 6- نام وآدرس شرکت پشتيبان 7-نام کاربر يا کاربران دستگاه 8- مشخصات و نحوه آموزش کاربر دستگاه توسط شرکت پشتيبان 9-ميزان عدم دقت و عدم دقت دستگاه در هنگام نصب

15. ساير مستندات - مشخصات محلولها و مواد مصرفی - تاريخ آخرين سرويس دوره ای و خدمات پشتيبانی - تاريخ آخرين کاليبراسيون - تاريخ آخرين تعمير با ذکر قطعه تعويض شده - تاريخ آخرين مشکل و راه حل آن

16. اصول کار • كار با دستگاه سل كانتر مي بايست بطور كامل مطابق كاتالوگ دستگاه يا آموزش كارشناسان شركت پشتيبان صورت گيرد .

17. اصول کار • درصورت تعويض کاربر دستگاه ، می بايست از آموزش وی در مورد چگونگی کار با دستگاه و نحوه نگهداری و اصول کنترل کيفی اطمينان حاصل نمود .

18. اصول کار • کليه موارد مربوط به نگهداری دستگاه ، از قبيل تاريخ انجام شستشوهای لازم ، تعمير ، سرويس ويا تعويض محلولها می بايست ثبت ونگهداری شوند.

19. اصول کار هر روز شمارش زمينه يا Back ground دستگاه ارزيابي و در صورت امکان ثبت و نگهداری شود .بطور معمول شمارش زمينه هر دستگاه در کاتالوگ مربوطه آمده است ولی مقادير قابل قبول سازمان جهانی بهداشت به شرح زير می باشند : • RBC: <0/03 x 1012/l • WBC: <0/04 x 109 / l • Haemoglobin: <0/2g/dl • Platelets: <5 x 109 /l

20. Calibration • Calibration provides the most accurate results possible. • For best performance, calibrate all the CBC parameters. • The WBC differential is calibrated at the factory. They do not require calibration in the laboratory.

21. When to Calibrate • At installation • After the replacement of any component that involves dilution characteristics or the primary measurements (such as the apertures) • When advised to do so by your service representative

22. Calibration Normal fresh blood samples Calibrators

23. Accuracy • 100×ميانگين روش دستگاهي - ميانگين روش دستيCF= • ميانگين روش دستگاهی

24. پايداری کاليبراسيون _ Sd =√ ∑(d2)- (∑d)2 /n / n-1 tn = d √n  sd

25. Precision check • Purpose: check reproducibility of instrument • Precision quick method • Run 5 replicates of one patient’s sample free of elevated bilirubin, lipemia, and hemoloysis • Calculate % CV or SD • Refer to the methodology in procedure manual for expected % CV or SD

26. Quality Control • Purpose of QC • Assure proper functionality of instrumentation • Monitoring the Integrity of the Calibration

27. Quality Control Methods • Assayed stabilized material (Commercial) • Previously analyzed patient samples • Easily obtained • Cost effective • Results and samples readily available

28. Quality control Replicate tests (control samples) Control charts Duplicate & Check tests Correlation system Delta check Daily means of MCV,MCH,MCHC Comparison the results with reference methods

29. Replicate tests • بررسي عدم دقت دستگاه

30. Control charts • استفاده از خون كنترل • تفسير با استفاده از قوانين سازمان جهاني بهداشت يا وستگارد

31. Quality Control OUT OF CONTROL!!! Repeat the assay ( One time occurrence ) Check integrity of material Troubleshoot Verify instrumentation

32. Duplicate test درهرسري کاري 2-3 نمونه به صورت مضاعف((Duplicate آزمايش ميشوند تا با بررسي اختلاف خوانده ها از طريق محاسبات آماري از وجود خطاهاي تصادفي آگاه گرديد . افزايش اختلاف بين دو خوانده بيش از 2SD محاسبه شده ، احتمال وجود خطاي تصادفي را مطرح مي نمايد. • SD= √∑d2 • 2n

33. Check test • در ابتدای سری کاری يا صبح3- 2نمونه آزمايش شده وهمان نمونه ها در انتهاي سري كاري يا بعد از ظهرمجددا آزمايش مي شوند. نتايج حاصل از اين دو آزمايش با استفاده از فرمول Duplicate test قابل مقايسه می باشند . اختلاف نتايج در محدوده 2SD قابل قبول می باشد . در صورت نگهداری نمونه ها در شرايط مناسب ، هرگونه تغيير در نتايج خارج از اين محدوده نشاندهنده اشکال درعملکرد دستگاه و يا معرفها مي باشد. • اين آزمايش براي بررسي هموگلوبين و گلبولهای قرمز مناسب بوده و به ميزان کمتر براي شمارش گلبولهاي قرمز و پلاکت کاربرد دارد ولي براي هماتوکريت بخصوص اگر فاصله زماني آزمايش نمونه ها بيش از 6 ساعت باشد کارايي ندارد.

34. Delta check Hb 2 g/l PCV 0.05 L/L MCV >6 fL MCH > 5 pg WBC Normal to abnormal Platelets Reduced or increased by more than 50%

35. Daily means of MCV,MCH,MCHC مراکز آزمايشگاهي با پذيرش بيمار زياد (حداقل روزی 100 بيمار تفاوت مقادير بيش از 3٪ از ميانگين، نشان دهنده بروز خطا و لزوم بررسی کاليبراسيون دستگاه می باشد.

36. Comparison the results with reference methods انجام محاسبات آماري براي بررسي هم خواني نتايج الزامي است .

37. ERRORS INACCURACY

38. Reliability of Electronic Counters High Precision Accuracy? - Recirculation of cells - Red cell agglutination - Lipid droplets, Microorganisms, - Extraneous particles - Faulty maintenance - Incorrectly calibration

39. Interfering substances Cold Agglutinins Cryoglobulins Lipemia Platelet Clumps RBC fragments NRBCs Clot

40. WBC Count Interferences Unusual RBC abnormalities that resist lysing malarial parasites giant platelets, platelet clumps, NRBCs fragmented white cells, agglutinated white cells, lyse-resistant red cells, cryoglobulin, some extremely elevate proteins, unlysed particles greater than 35 fL in size

41. RBC Count Interferences Very high WBC count, high concentration of very large platelets, Auto-agglutination

42. Hgb Very high WBC count, Severe lipemia, certain unusual RBC abnormalities that resist lysing

43. MCV Very high WBC count, high concentration of very large platelets, Auto-agglutination

44. Flagging • WBC Suspect flags • Blasts • Imm Grans • Variant lymphs

45. More Flagging • RBC Suspect flags • NRBCs • Macrocytic RBCs • Dimorphic RBC population • Micro RBCs/RBC fragments • RBC agglutination

46. Troubleshooting Flagged Results: • Refer to the Instrument Manual to troubleshoot codes, flags, and messages displayed with patient results

47. Thank you for your attention